骨質(zhì)疏松癥（Osteoporosis,OP）是一種多發(fā)生于老年人的全身性骨骼系統(tǒng)疾病,表現(xiàn)為骨密度和質(zhì)量降低,骨骼微結(jié)構(gòu)被破壞,進(jìn)而導(dǎo)致骨脆性增加,骨折風(fēng)險上升。隨著人口老齡化日益嚴(yán)重,骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率也越來越高。治療骨質(zhì)疏松癥的藥物主要分為抗骨吸收藥物和促骨形成藥物。其中抗骨吸收藥物能夠抑制破骨細(xì)胞的生成和活動,從而降低骨重建的速率并逆轉(zhuǎn)由骨吸收大于骨形成而造成的骨暫時性缺失,然而并不能改善骨骼結(jié)構(gòu)的完整性。因此,采用抗骨吸收藥物與促骨形成藥物相結(jié)合的療法已成為當(dāng)前臨床治療的熱點(diǎn)。甲狀旁腺素1-34氨基端片段（PTH1-34）又稱特立帕肽,是一種被美國FDA批準(zhǔn)的用于治療骨質(zhì)疏松的促骨形成藥物,能夠有效促進(jìn)骨形成。然而其介導(dǎo)的促骨形成機(jī)制尚未完全闡明。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)PTH1-34可以通過引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)激活PERK-eIF2α-ATF4信號通路。在PTH處理細(xì)胞4-6小時后,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子如Bip,Chop,Gadd34,Grp94,P4hb和Pdia3等的mRNA水平提高近一倍,PERK-eIF2α-ATF4通路各蛋白表達(dá)上升并活化。為驗(yàn)證此通路在調(diào)節(jié)PTH促成骨細(xì)胞... 

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 骨質(zhì)疏松癥概述
        1.1.1 骨質(zhì)疏松癥全球及國內(nèi)發(fā)病現(xiàn)狀
        1.1.2 骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機(jī)制及治療進(jìn)展
    1.2 PTH概述
        1.2.1 PTH的簡介及臨床應(yīng)用
        1.2.2 PTH的促成骨作用機(jī)制
    1.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激概述
        1.3.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其介導(dǎo)的未折疊蛋白反應(yīng)
        1.3.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與成骨細(xì)胞的聯(lián)系
    1.4 主要研究內(nèi)容
第二章 實(shí)驗(yàn)材料及方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
        2.1.1 試劑及耗材
        2.1.2 儀器
        2.1.3 主要試劑的配制
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)對象
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 新生小鼠顱骨骨細(xì)胞的制備
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)與凍存
        2.2.3 利用siRNA進(jìn)行基因沉默實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 實(shí)時定量PCR實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western blot）
        2.2.6 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)（Co-immunoprecipitation）
        2.2.7 堿性磷酸酶染色與活性測定實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 茜素紅染色
        2.2.9 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）
        2.2.10 細(xì)胞增殖測定
        2.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 PTH通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激激活PERK-eIF2α-ATF4通路
        3.1.1 在MC3T3-E1細(xì)胞中，PTH處理引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激并激活PERK-eIF2α-ATF4通路
        3.1.2 在POB細(xì)胞中，PTH處理引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激并激活PERK-eIF2α-ATF4通路
    3.2 ATF4對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖分化的調(diào)控
        3.2.1 ATF4-siRNA轉(zhuǎn)染效果驗(yàn)證
        3.2.2 ATF4的沉默抑制了PTH對成骨細(xì)胞分化的促進(jìn)作用
        3.2.3 ATF4的沉默抑制了PTH對成骨細(xì)胞堿性磷酸酶表達(dá)的促進(jìn)作用
        3.2.4 ATF4的沉默抑制了PTH對成骨細(xì)胞礦化的促進(jìn)作用
        3.2.5 ATF4的沉默抑制了PTH對成骨細(xì)胞骨鈣素分泌的促進(jìn)作用
        3.2.6 ATF4的沉默抑制了PTH對成骨細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用
    3.3 ISRIB對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖分化的影響
        3.3.1 ISRIB對PTH介導(dǎo)的PERK-eIF2α-ATF4通路激活的影響
        3.3.2 ISRIB對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞分化的影響
        3.3.3 ISRIB對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞堿性磷酸酶表達(dá)的影響
        3.3.4 ISRIB對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞礦化的影響
        3.3.5 ISRIB對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞骨鈣素分泌的影響
        3.3.6 ISRIB對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖的影響
    3.4 AMG’44 對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖分化的影響
        3.4.1 AMG’44 對PTH介導(dǎo)的PERK-eIF2α-ATF4通路激活的影響
        3.4.2 AMG’44 對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞分化的影響
        3.4.3 AMG’44 對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞堿性磷酸酶表達(dá)的影響
        3.4.4 AMG’44 對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞礦化的影響
        3.4.5 AMG’44 對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞骨鈣素分泌的影響
        3.4.6 AMG’44 對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖的影響
    3.5 PERK對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖分化的調(diào)控
        3.5.1 PERK-siRNA轉(zhuǎn)染效果驗(yàn)證
        3.5.2 PERK的沉默抑制了PTH對成骨細(xì)胞分化的促進(jìn)作用
        3.5.3 PERK的沉默抑制了PTH對成骨細(xì)胞堿性磷酸酶表達(dá)的促進(jìn)作用
        3.5.4 PERK的沉默抑制了PTH對成骨細(xì)胞礦化的促進(jìn)作用
        3.5.5 PERK的沉默抑制了PTH對成骨細(xì)胞骨鈣素分泌的促進(jìn)作用
        3.5.6 PERK的沉默抑制了PTH對成骨細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用
    3.6 Salubrinal對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖分化的影響
        3.6.1 Salubrinal對PTH介導(dǎo)的PERK-eIF2α-ATF4通路激活的影響
        3.6.2 Salubrinal對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞分化的影響
        3.6.3 Salubrinal對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞堿性磷酸酶表達(dá)的影響
        3.6.4 Salubrinal對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞礦化的影響
        3.6.5 Salubrinal對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞骨鈣素分泌的影響
        3.6.6 Salubrinal對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖的影響
    3.7 HSP90在PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖分化中的作用
        3.7.1 HSP90可以增強(qiáng)經(jīng)過PTH處理的成骨細(xì)胞中的PERK的穩(wěn)定性
        3.7.2 HSP90的抑制劑Geldanamycin對PTH介導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖分化的影響
第四章 討論
第五章 主要結(jié)論與展望
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄: 作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號：3679553