目的:探討經(jīng)間充質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1）誘導(dǎo)后間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）中趨化因子受體4（CXCR4）/趨化因子受體7（CXCR7）表達(dá)的變化及其與磷脂酰肌醇3激酶（Phosphoinositide 3-kinase,PI3K）/核因子-κB（Nuclear factor kappa B,NF-κB）信號通路的關(guān)系,為后期研究提供實(shí)驗依據(jù)。方法:（1）全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)、純化MSCs;（2）分別通過逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）和蛋白免疫印跡法（Western-blot）檢測不同濃度SDF-1誘導(dǎo)前后MSCs中CXCR4和CXCR7 mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化;（3）分別以CXCR4拮抗劑AMD3100、CXCR7拮抗劑CCX733、PI3K抑制劑渥曼青霉素（Wortmanin）和NF-κB抑制劑二硫代氨基吡咯烷（PDTC）作為工具藥,通過RT-PCR和Western-blot法檢測MSCs中CXCR4和CXCR7在基礎(chǔ)狀態(tài)和干預(yù)狀態(tài)下mRNA、蛋白水平的表達(dá)變化;（4）用Western-blot法觀察間充質(zhì)干細(xì)胞中蛋白激酶B（Akt）、NF-κB抑制蛋白（IΚBα）的基... 

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
英漢縮略詞對照表
前言
第一部分 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）分離培養(yǎng)、鑒定和不同濃度SDF-1 誘導(dǎo)前后MSCs中CXCR4和CXCR7的表達(dá)
    1 材料方法
        1.1 實(shí)驗材料和儀器
            1.1.1 實(shí)驗動物
            1.1.2 主要實(shí)驗試劑
            1.1.3 主要實(shí)驗儀器
        1.2 實(shí)驗方法
            1.2.1 MSCs的分離培養(yǎng)、純化
            1.2.2 流式細(xì)胞儀檢測MSCs表面標(biāo)記物
            1.2.3 實(shí)驗分組
            1.2.4 RT-PCR檢測不同濃度SDF-1 誘導(dǎo)前后MSCs的CXCR4和CXCR7的表達(dá)
            1.2.5 Western-blot法檢測不同濃度SDF-1 誘導(dǎo)前后MSCs的CXCR4和CXCR7的表達(dá)
        1.3 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果
        2.1 MSCs形態(tài)學(xué)表現(xiàn)
        2.2 流式細(xì)胞儀鑒定 MSCs 表面標(biāo)志物
        2.3 不同濃度SDF-1 誘導(dǎo)前后MSCs的CXCR4和CXCR7 mRNA的表達(dá)
        2.4 不同濃度SDF-1 誘導(dǎo)前后MSCs的CXCR4和CXCR7蛋白的表達(dá)
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分CXCR4和CXCR7在基礎(chǔ)狀態(tài)和干預(yù)狀態(tài)下表達(dá)變化及與PI3K/NF- κ B信 號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制相關(guān)性的研究
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗材料和儀器
            1.1.1 實(shí)驗材料
            1.1.2 主要實(shí)驗試劑
            1.1.3 主要實(shí)驗儀器
        1.2 實(shí)驗方法
            1.2.1 細(xì)胞制備及分組
            1.2.2 RT-PCR檢測CXCR4和CXCR7在不同條件誘導(dǎo)下mRNA表達(dá)的變化
            1.2.3 Western-blot法檢測CXCR4和CXCR7在不同條件誘導(dǎo)下蛋白水平的表達(dá)變化
            1.2.4 Western-blot法檢測Akt和IΚBα在不同條件誘導(dǎo)下蛋白水平的表達(dá)變化
        1.3 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果
        2.1 MSCs中CXCR4和CXCR7 mRNA水平的表達(dá)
        2.2 WESTERN BLOT檢測MSCs中CXCR4 ， CXCR7蛋白表達(dá)
        2.3 WESTERN BLOT檢測MSCs中Akt，p-Akt，IΚBα，p- IΚBα蛋白表達(dá)
    3 討論
    4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
致謝



本文編號：3676208