本文關(guān)鍵詞：GCK基因突變引起的先天性高胰島素血癥2例的基因分析及功能學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景先天性高胰島素血癥(congenital hyperinsulinism, CHI)又稱嬰兒持續(xù)性高胰島素血癥性低血糖癥(persistent hyperinsulinemic hypoglycemia of infancy, PHHI)是一類復(fù)雜多樣的罕見(jiàn)性疾病,由Aynsley-Green在1981年首次報(bào)道,是嬰兒持續(xù)性低血糖中最常見(jiàn)的原因。本病的病因及發(fā)病機(jī)制目前尚未完全清楚,其病理生理基礎(chǔ)是胰島β細(xì)胞持續(xù)不適當(dāng)分泌胰島素導(dǎo)致嚴(yán)重低血糖。目前分子遺傳學(xué)的研究表明,至少有9種基因突變與CHI有關(guān),其中最常見(jiàn)的是由編碼ATP敏感性鉀離子通道(KATP通道)Kir6.2亞單位和SUR1亞單位蛋白的KCNJ11基因和ABCC8基因突變引起的。而編碼葡萄糖激酶(GCK)的GCK基因突變屬于其中的罕見(jiàn)類型,于1998年首次報(bào)道,目前報(bào)道僅為9個(gè)家系和9個(gè)散發(fā)病例,亞洲人群未見(jiàn)報(bào)道。研究一2例CHI患者致病基因的分析目的探討2例先天性高胰島素血癥的臨床特點(diǎn)和分子遺傳學(xué)特征。方法對(duì)我院2例先天性高胰島素血癥的患者進(jìn)行臨床資料的總結(jié),抽提相關(guān)家系成員的基因組DNA,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增后進(jìn)行CHI可能致病基因(ABCC8, KCNJ11、 GLUD1、GCK、HNF4A、HNF1A)的直接測(cè)序。結(jié)果2例先天性高胰島素血癥患者均為GCK基因突變所引起,GCK基因突變的位點(diǎn)分別是c.589 AG和c.269 AG,導(dǎo)致的突變?yōu)閜.M197V和p.K90R。結(jié)論亞洲人群可以出現(xiàn)GCK基因突變引起的先天性高胰島素血癥(GCK-CHI)。研究二GCK基因突變功能學(xué)研究目的探討葡萄糖激酶(GCK)基因突變K90R、M197V突變引起先天性高胰島素血癥(CHI)的分子生物學(xué)機(jī)制。方法構(gòu)建攜帶有谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST)標(biāo)簽的K90R、M197V突變型以及野生型GCK質(zhì)粒。體外表達(dá)和純化K90R、M197V和野生型GST-GCK重組蛋白。酶偶聯(lián)分析法進(jìn)行動(dòng)力學(xué)和熱穩(wěn)定性分析。結(jié)果1.K90R突變與野生型GCK相比,可導(dǎo)致蛋白產(chǎn)量下降；M197V突變與野生型GCK相比,可導(dǎo)致蛋白產(chǎn)量增加。2.與野生型GCK相比,K90R和M197V突變可導(dǎo)致葡萄糖S0.5、希爾系數(shù)(力)下降以及ATP-Kn水平升高；K90R突變導(dǎo)致Kcat下降；相對(duì)活性指數(shù)分別為1.620和4.690。結(jié)論K90R和M197V突變引起的GCK酶動(dòng)力學(xué)異常是導(dǎo)致先天性高胰島素血癥的可能原因。
【關(guān)鍵詞】：先天性高胰島素血癥 葡萄糖激酶 GCK基因 基因突變 先天性高胰島素血癥 葡萄糖激酶 GCK基因 基因突變 酶動(dòng)力學(xué)
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 背景4
• 研究一 2例CHI患者致病基因的分析4-5
• 研究二 GCK基因突變功能學(xué)研究5-6
• 英文摘要6-8
• 中英文詞匯對(duì)照8-10
• 研究一 2例CHI患者致病基因的分析10-19
• 前言10-11
• 1.1 研究對(duì)象及臨床資料11-13
• 病例111-12
• 病例212
• 病例312-13
• 1.2 研究方法13-15
• 1.2.1 CHI致病基因分子遺傳學(xué)檢測(cè)13-14
• 1.2.2 序列比對(duì)和分析14-15
• 1.3 結(jié)果15-17
• 病例115
• 病例215-16
• 病例316-17
• 1.4 討論17-18
• 1.5 結(jié)論18-19
• 研究二 GCK基因突變功能學(xué)研究19-33
• 前言19-20
• 2.1 研究方法20-28
• 2.1.1 所需材料、試劑和儀器21-23
• 2.1.2 定點(diǎn)誘變23-24
• 2.1.3 細(xì)菌培養(yǎng)和質(zhì)粒提取24-25
• 2.1.4 蛋白表達(dá)和純化25-26
• 2.1.5 酶動(dòng)力學(xué)和熱穩(wěn)定性分析26-28
• 2.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法28
• 2.2 結(jié)果28-31
• 2.3 討論31-32
• 2.4 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 綜述 先天性高胰島素血癥36-50
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 附錄1：引物列表50-53
• 附錄2：GCK蛋白突變位點(diǎn)53-54
• 附錄3：GCK蛋白突變生物信息學(xué)分析結(jié)果54-55
• 附錄4：pGEX-2T-GCK全序列55-58
• 致謝58-59

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王志新;中國(guó)青少年成人起病型糖尿�。∕ODY）患者篩查及GCK基因突變功能學(xué)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉婷;一些含氮雜環(huán)類化合物的設(shè)計(jì)、合成及其生物活性研究[D];南昌大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：GCK基因突變引起的先天性高胰島素血癥2例的基因分析及功能學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：366106