糖尿病是一種對(duì)人類健康有嚴(yán)重危害的代謝性疾病,而胰島β細(xì)胞的凋亡是1型和2型糖尿病發(fā)病機(jī)制的重要環(huán)節(jié)。我們前期的研究表明,孤核受體NR4A1能夠抵抗由氧自由基（ROS）或氧化應(yīng)激所引起的胰島β細(xì)胞凋亡。谷胱甘肽過氧化物酶1（GPX1）,作為谷胱甘肽過氧化物酶類中最多見的抗氧化酶,在抵抗由氧自由基（ROS）或氧化應(yīng)激引起的細(xì)胞凋亡方面發(fā)揮十分重要的作用。因此,孤核受體NR4A1是否通過調(diào)控GPX1的表達(dá)來抵抗胰島β細(xì)胞凋亡及相應(yīng)的分子機(jī)制有待探索。本研究中,在構(gòu)建過表達(dá)NR4A1的胰島β細(xì)胞（MIN6）的基礎(chǔ)上,用不同的方法檢測(cè)GPX1的表達(dá)變化,并使用螢火蟲酶檢測(cè)NR4A1對(duì)GPX1啟動(dòng)子活性的影響及其作用方式。然后,在過表達(dá)GPX1的MIN6細(xì)胞中,用H2O2進(jìn)行不同方式的處理,來模擬細(xì)胞所處的氧化應(yīng)激狀態(tài),檢測(cè)氧化應(yīng)激狀態(tài)下活化的Caspase3的水平變化。結(jié)果顯示:在MIN6細(xì)胞中,過表達(dá)NR4A1能夠使GPX1的表達(dá)量升高,雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:NR4A1能夠提高GPX1啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性。經(jīng)檢索發(fā)現(xiàn)在GPX1啟動(dòng)子上（-273至-268）含有NR4A1的潛在結(jié)合位點(diǎn)。ChIP... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１鑒定ＭＩＮ６與對(duì)照細(xì)胞中ＮＲ４Ａ１的過表達(dá)效果

為了多方位驗(yàn)證ｃＤＮＡＭｉｃｒｏａｒｒａｙ的結(jié)果，對(duì)ＮＣ、ＯＶ細(xì)胞提取蛋白質(zhì)及??ｍＲＮＡ進(jìn)行Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ及ｑＰＣＲ檢測(cè)，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ的結(jié)果一致，??即過表達(dá)ＮＲ４Ａ１之后，無論是蛋白水平（圖３Ａ，戶＝０．０００８），還是ｍＲＮＡ水平??（圖３Ｂ，Ｐ＝０．０１９７），ＧＰＸ１表達(dá)量均顯著升高，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與之前??Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ?結(jié)果一致。??３６??

動(dòng)子２０００?ｂｐ長度（Ｐ＝０．００１８）和４０００?ｂｐ長度（Ｐ＝０．００１６）的轉(zhuǎn)錄活性均顯著增強(qiáng)，??結(jié)果均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果表明：過表達(dá)ＮＲ４Ａ１對(duì)于２０００?ｂｐ長度ＧＰＸ１啟??動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的增強(qiáng)不低于４０００?ｂｐ長度啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性（圖４），提示ＮＲ４Ａ１??發(fā)揮效應(yīng)的區(qū)域主要在０到－２０００?ｂｐ內(nèi)。??＞５］??？專?＊＊?ｎ?ｎｃ??§?４－?■〇ｖ??ｌＵ＿ｎｉ??２０００ｂｐ?４０００ｂｐ??圖４?ＮＲ４Ａ１對(duì)ＧＰＸ１?２０００?ｂｐ長度啟動(dòng)子和４０００?ｂｐ長度啟動(dòng)子活性的影響，＊＊尸＜?０．０１，??與ＮＣ細(xì)胞相比。??Ｆｉｇ．４?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ＮＲ４Ａ１?ｏｎ?ＧＰＸ１?ｐｒｏｍｏｔｅｒ?ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，?ｂｏｔｈ?２０００?ｂｐ?ｐｒｏｍｏｔｅｒ?ａｎｄ?４０００?ｂｐ??ｐｒｏｍｏｔｅｒ?ｏｆ?ＧＰＸ１?ｗｅｒｅ?ａｐｐｌｉｅｄ?ｆｏｒ?ａｎａｌｙｓｉｓ，?＊＊Ｐ＜?０．０１，?ｖｓ．ＮＣ．??３．?２?ＮＲ４Ａ１跟ＧＰＸ１啟動(dòng)子有物理結(jié)合??通過對(duì)ＧＰＸ］啟動(dòng)子序列進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，在４０００?ｂｐ長度的啟動(dòng)子上存在三??個(gè)ＮＲ４Ａｌ的潛在結(jié)合位點(diǎn)（ＴＧＡＣＣＴ），其中一個(gè)是位于?２０００ｂｐ范圍內(nèi)，比較??接近轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的位置（－２７３至－２６８），而另外兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)之間較為靠近，??但位于距離轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)較遠(yuǎn)的位置（－３４３７至－３４３２，－３６２６至－３６２１），示意圖如??圖５Ａ�？紤]到ＮＲ４Ａ１對(duì)兩個(gè)長度的ＧＰＸ１轉(zhuǎn)錄活性的影響


本文編號(hào)：3562827