PI3K信號通路對結(jié)節(jié)病和1型糖尿病中Treg穩(wěn)態(tài)的作用及機制研究
發(fā)布時間：2021-12-31 16:33
第一部分:選擇性抑制PI3K介導(dǎo)肺結(jié)節(jié)病小鼠模型Th1/Th17/Treg再平衡的研究背景:結(jié)節(jié)病是一種病因不明的多系統(tǒng)免疫性疾病,病理表現(xiàn)為不同器官內(nèi)非干酪樣肉芽腫,主要累及肺。研究證明,結(jié)節(jié)病的發(fā)病機制與Th1（T helper 1 cell）/Th17（T helper 17 cell）/Treg（Regulatory T cell）紊亂相關(guān)。PI3K（Phosphatidylinositol 3-kinase）/Akt（protein kinase B;PKB（Akt））通路對于維持Treg的功能及穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要,在結(jié)節(jié)病患者中異常激活。在我們的前期研究中發(fā)現(xiàn)同時抑制4種Ⅰ類PI3K亞基的BKM120比選擇性抑制p110α,β和δ亞基的LY294002能更有效地誘導(dǎo)Treg穩(wěn)態(tài),提示結(jié)節(jié)病中Treg的水平和功能可能更依賴于p110γ亞基。目的:在本研究中我們選用兩種PI3K亞基的特異性抑制劑AS-605240（特異性抑制PI3Kp110γ亞基）和CAL-101（特異性抑制PI3Kp110δ亞基）,探究特異性干預(yù)p110γ和p110δ亞基是否能通過恢復(fù)Treg的免疫調(diào)節(jié)能力,從而減...
【文章來源】：南京大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：71 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
結(jié)節(jié)病小鼠模型建構(gòu)圖
南京大學(xué)碩士畢業(yè)論文26ANOVA)，P<0.05認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3.結(jié)果3.1肺結(jié)節(jié)病小鼠的建立及模型驗證我們根據(jù)Swaisgood的方法[50]，通過兩次SodA免疫應(yīng)激，構(gòu)建小鼠結(jié)節(jié)病模型并給藥（圖1）。圖1.結(jié)節(jié)病小鼠模型建構(gòu)圖。6周大雌性C57BL/6J小鼠，第1天給予第一次免疫刺激，第15天給予第二次免疫刺激并同時進行藥物干預(yù)，第16、29、30、36、37天再次給予藥物干預(yù)，第43天處理小鼠，取樣進行后期分析。首先，我們對結(jié)節(jié)病小鼠成模情況進行了驗證。小鼠肺組織經(jīng)過固定、包埋，H&E染色。結(jié)果顯示，與正常小鼠相比，結(jié)節(jié)病模型小鼠肺部存在明顯的由上皮樣細胞和淋巴細胞聚集而成的肉芽腫結(jié)（圖2）。圖2.肺部病理。肺組織H&E染色。放大倍數(shù)×100。接著，我們對各組小鼠的BALF和淋巴結(jié)中的CD4+T細胞、CD8+T細胞進行了流式統(tǒng)計。結(jié)果顯示，與臨床結(jié)節(jié)病患者一致，結(jié)節(jié)病組小鼠BALF中CD4+/CD8+T細胞比例顯著性增加（6.523±2.108vs.1.168±0.266%，P=0.0012），而在淋巴結(jié)中CD4+/CD8+T細胞比例沒有明顯變化（圖3）。
南京大學(xué)碩士畢業(yè)論文27圖3.CD4+/CD8+T細胞比例變化。A.肺泡灌洗液中CD4+/CD8+T細胞比例變化。B.淋巴結(jié)中CD4+/CD8+T細胞比例變化。（**P<0.01，每組n=5）此外，我們還對BALF中的Th1細胞、Th2細胞、Th17細胞和Treg細胞進行了流式分析。結(jié)果顯示，與正常組相比，結(jié)節(jié)病組BALF中Th1、Th17細胞比例顯著增高（24.70±4.082vs.4.268±0.376%，P=0.0025；7.523±1.108vs.3.168±0.626%，P=0.0142）,而Treg細胞比例明顯減少（2.643±0.508vs.3.681±0.236%，P=0.0003）（圖4）。說明在結(jié)節(jié)病小鼠中出現(xiàn)了Th1/Th17/Treg紊亂。圖4.淋巴結(jié)中Th1細胞、Th2細胞、Th17細胞和Treg細胞比例。A.淋巴結(jié)中CD4+IFNγ+T細胞比例。B.淋巴結(jié)中CD4+IL-4+T細胞比例。C.淋巴結(jié)中IL-17A+IFNγ+T細胞比例。D.淋巴結(jié)中CD25+FoxP+T細胞比例。（*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，每組n=5）。然后，我們對小鼠肺組織進行了免疫熒光染色，與正常小鼠相比結(jié)節(jié)病小鼠肺部肉芽腫周圍PI3K信號出現(xiàn)明顯激活（圖5）。
本文編號：3560599
【文章來源】：南京大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：71 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
結(jié)節(jié)病小鼠模型建構(gòu)圖
南京大學(xué)碩士畢業(yè)論文26ANOVA)，P<0.05認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3.結(jié)果3.1肺結(jié)節(jié)病小鼠的建立及模型驗證我們根據(jù)Swaisgood的方法[50]，通過兩次SodA免疫應(yīng)激，構(gòu)建小鼠結(jié)節(jié)病模型并給藥（圖1）。圖1.結(jié)節(jié)病小鼠模型建構(gòu)圖。6周大雌性C57BL/6J小鼠，第1天給予第一次免疫刺激，第15天給予第二次免疫刺激并同時進行藥物干預(yù)，第16、29、30、36、37天再次給予藥物干預(yù)，第43天處理小鼠，取樣進行后期分析。首先，我們對結(jié)節(jié)病小鼠成模情況進行了驗證。小鼠肺組織經(jīng)過固定、包埋，H&E染色。結(jié)果顯示，與正常小鼠相比，結(jié)節(jié)病模型小鼠肺部存在明顯的由上皮樣細胞和淋巴細胞聚集而成的肉芽腫結(jié)（圖2）。圖2.肺部病理。肺組織H&E染色。放大倍數(shù)×100。接著，我們對各組小鼠的BALF和淋巴結(jié)中的CD4+T細胞、CD8+T細胞進行了流式統(tǒng)計。結(jié)果顯示，與臨床結(jié)節(jié)病患者一致，結(jié)節(jié)病組小鼠BALF中CD4+/CD8+T細胞比例顯著性增加（6.523±2.108vs.1.168±0.266%，P=0.0012），而在淋巴結(jié)中CD4+/CD8+T細胞比例沒有明顯變化（圖3）。
南京大學(xué)碩士畢業(yè)論文27圖3.CD4+/CD8+T細胞比例變化。A.肺泡灌洗液中CD4+/CD8+T細胞比例變化。B.淋巴結(jié)中CD4+/CD8+T細胞比例變化。（**P<0.01，每組n=5）此外，我們還對BALF中的Th1細胞、Th2細胞、Th17細胞和Treg細胞進行了流式分析。結(jié)果顯示，與正常組相比，結(jié)節(jié)病組BALF中Th1、Th17細胞比例顯著增高（24.70±4.082vs.4.268±0.376%，P=0.0025；7.523±1.108vs.3.168±0.626%，P=0.0142）,而Treg細胞比例明顯減少（2.643±0.508vs.3.681±0.236%，P=0.0003）（圖4）。說明在結(jié)節(jié)病小鼠中出現(xiàn)了Th1/Th17/Treg紊亂。圖4.淋巴結(jié)中Th1細胞、Th2細胞、Th17細胞和Treg細胞比例。A.淋巴結(jié)中CD4+IFNγ+T細胞比例。B.淋巴結(jié)中CD4+IL-4+T細胞比例。C.淋巴結(jié)中IL-17A+IFNγ+T細胞比例。D.淋巴結(jié)中CD25+FoxP+T細胞比例。（*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，每組n=5）。然后，我們對小鼠肺組織進行了免疫熒光染色，與正常小鼠相比結(jié)節(jié)病小鼠肺部肉芽腫周圍PI3K信號出現(xiàn)明顯激活（圖5）。
本文編號：3560599
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