目的探討脂肪干細(xì)胞（ASC）來源的外泌體在白色脂肪棕色化中的作用。方法分離培養(yǎng)并鑒定小鼠ASC細(xì)胞;慢病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建過表達(dá)miR-27的ASC細(xì)胞;超高速離心提取正常及過表達(dá)miR-27的ASC細(xì)胞分泌的外泌體,實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增（qRT-PCR）分析外泌體中miR-27的表達(dá)量;高脂喂食構(gòu)建肥胖小鼠模型,分別注射過表達(dá)miR-27外泌體（過表達(dá)組）、正常ASC外泌體（正常表達(dá)組）及生理鹽水（對(duì)照組）,在寒冷暴露條件下監(jiān)測(cè)體質(zhì)量變化;剝離小鼠附睪皮下脂肪組織和肩胛骨脂肪組織,比較組織大小,蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)解偶聯(lián)蛋白1（UCP1）、過氧化物酶體增殖劑激活受體γ（PPARγ）、含PR結(jié)構(gòu)域的鋅指蛋白16（PRDM16）、過氧化物酶體增殖子激活受體γ共激活因子1α（PGC-1α）的表達(dá)。結(jié)果成功提取ASC及其外泌體,并成功轉(zhuǎn)染miR-27;ASC及其外泌體中的miR-27顯著高于白色脂肪組織（P<0.05）。與對(duì)照組相比,過表達(dá)組及正常表達(dá)組的小鼠體質(zhì)量下降幅度小,隨時(shí)間的增加效果更加明顯（P<0.05）。過表達(dá)組及正常表達(dá)組的小鼠的附睪皮下脂肪組織... 

【文章來源】：天津醫(yī)藥. 2020,48(03)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

ASC中外泌體的鑒定

免疫印跡法檢測(cè)UCP1、PPARγ、PRDM16、PGC-1α的表達(dá)

ASC剛貼壁的細(xì)胞呈圓形，培養(yǎng)24 h后細(xì)胞呈長梭形；培養(yǎng)第3代的ASC的形態(tài)，見圖1。流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，CD34、CD45、CD133低表達(dá)，陽性率分別為6.43%、6.35%、0.09%;CD105與Sca-1高表達(dá)，陽性率為93.71%、92.62%，見圖2。2.2 外泌體的鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR-582-5p靶向抑制Rab27a對(duì)肺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[J]. 葉璐,母丹,楊莉,付波,王敏.  臨床腫瘤學(xué)雜志. 2019(02)
[2]miR-27a對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡影響的體外研究[J]. 張悅,管敘文,王婧雅,黃鼎智.  天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(06)
[3]miR-27a、miR-27b和miR-378在不同豬種皮下脂肪中的差異表達(dá)研究[J]. 陶璇,顧以韌,楊雪梅,梁艷,鐘志君,楊躍奎,曾凱,陳曉暉,王言,龔建軍,應(yīng)三成,王衛(wèi),呂學(xué)斌.  中國畜牧雜志. 2018(11)

博士論文
[1]脂肪源性含miR-27a外泌體通過抑制PPARγ誘導(dǎo)骨骼肌胰島素抵抗的作用機(jī)制研究[D]. 于洋.吉林大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3550470