目的:2型糖尿病作為一種常見的慢性代謝疾病,增加骨折風(fēng)險,干擾骨組織愈合,尤其影響骨形成代謝活動。骨髓間充質(zhì)干細胞是成骨代謝過程中的重要細胞,在骨再生醫(yī)學(xué)組織工程中可作為種子細胞,具有一定應(yīng)用前景。先前的研究已證實節(jié)律基因與2型糖尿病互相影響,且節(jié)律基因參與細胞廣泛的生理活動調(diào)控。因此,本實驗研究通過建立2型糖尿病大鼠模型,探究其骨髓間充質(zhì)干細胞的成骨分化能力和節(jié)律基因表達變化,并探究2型糖尿病微環(huán)境中節(jié)律基因Clock影響骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化的調(diào)控機制,為防治2型糖尿病引起的骨損傷提供依據(jù)。方法:（1）利用GK大鼠,建立并篩選2型糖尿病大鼠模型,以Wistar大鼠作為對照組。分離下頜骨并提取骨髓間充質(zhì)干細胞,體外純化、培養(yǎng)糖尿病組和對照組的骨髓間充質(zhì)干細胞,并應(yīng)用Micro-CT進行兩組下頜骨骨形態(tài)計量的掃描分析。（2）通過克隆形成實驗、流式細胞儀檢測細胞周期與細胞凋亡實驗、CCK-8實驗評價兩組細胞的增殖與凋亡活性。兩組細胞在成骨誘導(dǎo)7天后進行堿性磷酸酶染色,在成骨誘導(dǎo)21天后進行茜素紅染色。利用qRT-PCR、Western blot檢測兩組細胞成骨誘導(dǎo)前后的節(jié)律基因Cloc... 

【文章來源】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?大鼠生化指標檢測??（注：ａ：６－１４周齡體重值；ｂ：?１４周齡空腹血糖值；ｃ：?１４周齡空腹胰島素值；ｄ：?１４??周齡０ＧＴＴ試驗血糖值；＊：Ｐ＜０．０５）??

ＧＫ糖尿病組與Ｗｉｓｔａｒ?qū)φ战MＢＭＳＣｓ接種至含有完全培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿后，２４ｈ??后倒置顯微鏡下觀察到ＢＭＳＣｓ貼壁生長。糖尿病組細胞與對照組細胞貼壁后都呈長??梭形、條形、三角形或扁平形態(tài)（圖２），生長較緩慢。可以發(fā)現(xiàn)，兩組細胞在鏡下??的貼壁表現(xiàn)無明顯差別。??圖２?倒置顯微鏡下ＢＭＳＣｓ形態(tài)??（注：倒置顯微鏡１０Ｘ，左：Ｗｉｓｔａｒ?qū)φ战MＢＭＳＣｓ；右：ＧＫ糖尿病組ＢＭＳＣｓ）??１７??

ｓａｒＰ＜０．０５�？偟内厔萆峡矗牵颂悄虿〗MＢＭＳＣｓ的生長曲線較平緩。??流式細胞儀檢測ＢＭＳＣｓ的細胞周期與細胞凋亡實驗結(jié)果可見，一方面，與對組Ｗｉｓｔａｒ?ＢＭＳＣｓ流式細胞周期結(jié)果比較，ＧＫ組ＢＭＳＣｓ在２型糖尿病微環(huán)境中Ｇ１期細胞百分數(shù)顯著高于Ｗｉｓｔａｒ組，Ｐ＜０．０５；而Ｓ期細胞百分數(shù)，Ｇ２期細胞百數(shù)，都顯著低于對照組，ＰＣ０．０５。細胞周期表明２型糖尿病微環(huán)境對ＧＫ組ＢＭＳ具有Ｇ１期阻滯作用（圖５、表３）。另一方面，應(yīng)用流式細胞儀檢測兩組ＢＭＳＣｓ胞凋亡，兩組ＢＭＳＣｓ均只有少量細胞凋亡，ＧＫ組ＢＭＳＣｓ早期凋亡率和晚期凋顯著比Ｗｉｓｔａｒ?qū)φ战M高（圖６、表４）?〇??綜合以上克隆形成實驗、ＣＣＫ－８實驗以及流式細胞檢測ＢＭＳＣｓ細胞周期與凋亡實驗的實驗結(jié)果，都趨向一致的表明，２型糖尿病微環(huán)境的影響表現(xiàn)為促ＢＭＳＣｓ凋亡活性，而抑制ＢＭＳＣｓ增殖活性。??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]牽張成骨對山羊下頜骨成骨細胞增殖節(jié)律的影響[J]. 龍潔,田衛(wèi)東,鄭曉輝,李聲偉.  華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2003(02)



本文編號：3525573