目的:痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是由單鈉尿酸鹽（Monosodiumutate,MSU）沉積所致的晶體相關(guān)性關(guān)節(jié)病。在急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎炎癥活動(dòng)中,NLRP3炎癥小體起著重要的炎癥樞紐作用。課題組前期通過(guò)Microarray篩選出痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎特異表達(dá)的miRNAs,通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)miRNA223-3p與miRNA22-3p有共同的作用靶點(diǎn)—NLRP3。本實(shí)驗(yàn)主要研究miRNA223-3p與miRNA22-3p對(duì)MSU晶體誘導(dǎo)的痛風(fēng)炎癥中NLRP3的調(diào)控作用。方法:體內(nèi)實(shí)驗(yàn):1)使用BALB/C型小鼠進(jìn)行氣囊模型的構(gòu)建。2)構(gòu)建miRNA223-3p與miRNA22-3p的agomir與negative control組。分別給予MSU刺激相應(yīng)時(shí)間后使用Q-PCR、western blot、ELISA實(shí)驗(yàn)手段觀察各組NLRP3與IL-1 β表達(dá)量變化。3)通過(guò)對(duì)小鼠氣囊滑膜上皮進(jìn)行HE染色及NLRP3免疫組化圖象分析,觀察各組變化。體外實(shí)驗(yàn):1)首先構(gòu)建氟波酯（PMA）誘導(dǎo)后的THP-1巨噬細(xì)胞模型,給與MSU刺激后觀察并確定MSU刺激濃度。分析細(xì)胞內(nèi)NLRP3,miRNA223-3p與miRNA2... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．小鼠背部氣囊模型建造流程圖??

?結(jié)果???結(jié)果??１單納尿酸鹽結(jié)晶的制備??通過(guò)對(duì)尿酸的處理加Ｘ＃我們成功獲得細(xì)針狀ＭＳＵ晶體（如圖３）。??圖３．在４０Ｘ顯微鏡下觀察ＭＳＵ?＿體??２?ｍ?ｉ?ＲＮＡ２２３－３Ｐ與ｍ?ｉ?ＲＮＡ２２－３ｐ在氣囊組織中的表達(dá)及轉(zhuǎn)染效果??我們進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)．，選擇＿■?ｍｉＲＮＡ２２３－３ｐ?ａｇｏｍｉｒ?組．與．ｍｉＲＮＡ２２－３ｐ?ａｇｏｍｉｒ?組，，還??有?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ．組：每組?３?只小鼠》將?ｍｉＲＮＡ２２３－３ｐ?與?ｌｎｉＲＮＡ２２－３ｐ?ａｇｏｍｉｒ?＿??射入小氧氣囊模型中＊同時(shí)對(duì)照組注射ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ，造模成功啟，將各組小鼠??背部氣囊解剖，取氣囊滑膜上皮，進(jìn)彳ｆ組織ＲＮＡ的提取，通過(guò)ｍｉＲＮＡ逆轉(zhuǎn)彔以??及Ｒｅａｌ?ｔｉｍｅ?ＰＣＲ技術(shù)，觀察各組之間ｍｉＲＮＡ的轉(zhuǎn)染效果，如圖４所示，??ｍｉＲＮＡ２２３－３ｐ與ｍｉＲＮＡ２２－３ｐ均成功轉(zhuǎn)染至小鼠氣囊中。??４０?Ｔ??Ｉ?＊＊??曬丨?Ｔ?＊＊??ｒ°＼?．．?ｔ??ｆ：?｜｜??〇Ｐ＾－００５??圖４．?ｍｉＲＮＡ２２３－３ｐ與ｍｉＲＮＡ２２－３ｐ在小鼠氣囊內(nèi)的轉(zhuǎn)染效果??１７??

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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]加味四妙丸聯(lián)合西藥治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎28例臨床研究[J]. 袁曉,范永升,謝冠群,馮曉紅,吳巧敏,金雅美.  中醫(yī)雜志. 2017(24)
[2]Effect of Rhizoma Polygoni Cuspidati and Ramulus Cinnamomi Compatibility on Uric Acid Metabolism and Urinary Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin and Kidney Injury Molecule-1 in Rats with Hyperuricemia[J]. HAN Bin,ZHU Chun-xia,SHI Wan,HUANG Hui-zhu,HU Xu-guang,ZHOU Xiao-ming,LEI Ming,LI Zhong.  Chinese Journal of Integrative Medicine. 2017(07)
[3]復(fù)方土茯苓顆粒治療高尿酸血癥40例隨機(jī)對(duì)照臨床觀察[J]. 張嫻嫻,孫維峰,侯燕,劉穎琬,何彥.  中醫(yī)雜志. 2016(01)
[4]穿山龍總皂苷對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)炎滑膜IL-1β及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[J]. 周琦,張寧,盧芳,劉樹(shù)民.  中藥藥理與臨床. 2013(06)
[5]萆薢總皂苷對(duì)大鼠慢性高尿酸血癥和腎小管尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體1表達(dá)的影響[J]. 陳光亮,朱立然,那莎,李莉.  中國(guó)中藥雜志. 2013(14)
[6]土茯苓抑制黃嘌呤氧化酶活性的物質(zhì)基礎(chǔ)研究[J]. 徐婷婷,承志凱,尹蓮,徐文皚.  中藥材. 2012(04)
[7]中西醫(yī)結(jié)合分期綜合治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的隨機(jī)對(duì)照臨床研究[J]. 王一飛,李伯華,張明,徐文彬,周蓉,周敏.  中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào). 2008(06)
[8]中西醫(yī)結(jié)合治療急性痛風(fēng)65例臨床觀察[J]. 張愛(ài)華,蔡善平,毛振中.  中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志. 2001(05)



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