目的:痛風性關(guān)節(jié)炎是由單鈉尿酸鹽（Monosodiumutate,MSU）沉積所致的晶體相關(guān)性關(guān)節(jié)病。在急性痛風性關(guān)節(jié)炎炎癥活動中,NLRP3炎癥小體起著重要的炎癥樞紐作用。課題組前期通過Microarray篩選出痛風性關(guān)節(jié)炎特異表達的miRNAs,通過生物信息學預測miRNA223-3p與miRNA22-3p有共同的作用靶點—NLRP3。本實驗主要研究miRNA223-3p與miRNA22-3p對MSU晶體誘導的痛風炎癥中NLRP3的調(diào)控作用。方法:體內(nèi)實驗:1)使用BALB/C型小鼠進行氣囊模型的構(gòu)建。2)構(gòu)建miRNA223-3p與miRNA22-3p的agomir與negative control組。分別給予MSU刺激相應時間后使用Q-PCR、western blot、ELISA實驗手段觀察各組NLRP3與IL-1 β表達量變化。3)通過對小鼠氣囊滑膜上皮進行HE染色及NLRP3免疫組化圖象分析,觀察各組變化。體外實驗:1)首先構(gòu)建氟波酯（PMA）誘導后的THP-1巨噬細胞模型,給與MSU刺激后觀察并確定MSU刺激濃度。分析細胞內(nèi)NLRP3,miRNA223-3p與miRNA2... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．小鼠背部氣囊模型建造流程圖??

?結(jié)果???結(jié)果??１單納尿酸鹽結(jié)晶的制備??通過對尿酸的處理加Ｘ＃我們成功獲得細針狀ＭＳＵ晶體（如圖３）。??圖３．在４０Ｘ顯微鏡下觀察ＭＳＵ?＿體??２?ｍ?ｉ?ＲＮＡ２２３－３Ｐ與ｍ?ｉ?ＲＮＡ２２－３ｐ在氣囊組織中的表達及轉(zhuǎn)染效果??我們進行預實驗．，選擇＿■?ｍｉＲＮＡ２２３－３ｐ?ａｇｏｍｉｒ?組．與．ｍｉＲＮＡ２２－３ｐ?ａｇｏｍｉｒ?組，，還??有?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ．組：每組?３?只小鼠》將?ｍｉＲＮＡ２２３－３ｐ?與?ｌｎｉＲＮＡ２２－３ｐ?ａｇｏｍｉｒ?＿??射入小氧氣囊模型中＊同時對照組注射ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ，造模成功啟，將各組小鼠??背部氣囊解剖，取氣囊滑膜上皮，進彳ｆ組織ＲＮＡ的提取，通過ｍｉＲＮＡ逆轉(zhuǎn)彔以??及Ｒｅａｌ?ｔｉｍｅ?ＰＣＲ技術(shù)，觀察各組之間ｍｉＲＮＡ的轉(zhuǎn)染效果，如圖４所示，??ｍｉＲＮＡ２２３－３ｐ與ｍｉＲＮＡ２２－３ｐ均成功轉(zhuǎn)染至小鼠氣囊中。??４０?Ｔ??Ｉ?＊＊??曬丨?Ｔ?＊＊??ｒ°＼?．．?ｔ??ｆ：?｜｜??〇Ｐ＾－００５??圖４．?ｍｉＲＮＡ２２３－３ｐ與ｍｉＲＮＡ２２－３ｐ在小鼠氣囊內(nèi)的轉(zhuǎn)染效果??１７??

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【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3459398