目的:探索因嚴(yán)重感染、器官移植排斥反應(yīng)等臨床重大疾病所導(dǎo)致的胸腺退化和萎縮的可能機(jī)制,以期為臨床治療上述疾病引起的胸腺萎縮和T細(xì)胞免疫缺陷的重建提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。方法:采用GM-CSF和IL-4體外誘導(dǎo)EGFP^Tg/+小鼠骨髓細(xì)胞分化為髓源樹(shù)突狀細(xì)胞（bone marrow derived dendritic cell,BMDC）,經(jīng)LPS誘導(dǎo)活化成為成熟的DC后,心內(nèi)注射過(guò)繼到同品系小鼠體內(nèi),并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)過(guò)繼小鼠胸腺中GFP⁺CD11c⁺細(xì)胞比例。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BMDC上Jagged1的表達(dá)水平,免疫熒光檢測(cè)Notch受體（Notch1和Notch3）在不同周齡的小鼠胸腺中的分布。將BMDC與小鼠胸腺上皮細(xì)胞系mTEC1共培養(yǎng)以及包被不同濃度的Jagged1重組蛋白與mTEC1細(xì)胞共培養(yǎng),Edu增殖試劑盒檢測(cè)mTEC1細(xì)胞增殖水平變化。在兩個(gè)共培養(yǎng)的體系中分別加入高濃度和低濃度γ分泌酶抑制劑DAPT處理,Edu增殖試劑盒檢測(cè)mTEC1細(xì)胞增殖水平的改變。最后構(gòu)建Notch3胞內(nèi)活化片段NICD3的慢病毒表... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠DC發(fā)育圖解

ged1/Notch3 信號(hào)抑制胸腺上皮細(xì)胞系 mTEC1 細(xì)胞增殖； 4℃預(yù)冷的 10%CaCl2-甘油，輕輕吹打重懸，0 μL/管，-80℃儲(chǔ)存。載體的構(gòu)建及擴(kuò)增nk 中 Notch3 基因（NM_008716.2），NICD3 位，共計(jì) 1968bp，按照該序列進(jìn)行人工合成包含D3 的 DNA 序列（生工生物工程（上海）股份有3.1，將合成的 NICD3 的 DNA 片段退火酶載體；

BMDC上MHC-Ⅱ,CD80,CD86的表達(dá)Fig4.1TheexpressionofMHC-Ⅱ,CD80,CD86inBMDC


本文編號(hào)：3458915