糖脂代謝紊亂（Glucose metabolism disorders）是指機體內(nèi)糖代謝相關(guān)激素和酶以及代謝器官發(fā)生病變,致使糖代謝紊亂;以及自身或環(huán)境因素造成的血液和相關(guān)代謝性器官脂質(zhì)沉積或代謝異常的脂質(zhì)代謝紊亂。而糖尿病、非酒精性脂肪肝、肥胖等疾病都與糖脂代謝紊亂密切相關(guān),隨著生活水平的提高,此類代謝疾病發(fā)生越來越普遍,但糖脂代謝紊亂的機制卻有待完善。本文通過地塞米松作用不同時間誘導(dǎo)大鼠肝臟糖脂代謝紊亂模型,進一步揭示糖脂代謝紊亂的發(fā)病機制。將180-220g的雄性SD大鼠隨機分為5組,即空白組（Ctrl）、地塞米松（DEX）不同作用之間 7d、14d、21d、28d 組（DEX07、DEX14、DEX21 和 DEX28）。地塞米松作用組分別給予lmg/kg地塞米松腹腔注射給藥,作用不同的給藥時間后,處死大鼠收集血清、肝臟組織和糞便樣本用以后續(xù)實驗。分別檢測血清中ALT、AST、ALP、Glucose、FINS、TG、CHOL、LDL以及HDL的含量;HE染色觀察肝臟組織病變和脂肪沉積情況;通過16srRNA高通量測序發(fā)分析大鼠糞便中腸道菌群的變化;利用轉(zhuǎn)錄組測序方法分析大鼠肝臟... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?１６ｓｒＲＮＡ測序流程??

?內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文?９??著加入緩沖液、ｄＮＴＰｓ、ＲＮａｓｅＨ和ＤＮＡＰｏｌｙｍｅｒａｓｅ?Ｉ進行ｃＤＮＡ另一條鏈的合成，??然后使用ＱＩＡＱｕｉｃｋ?ＰＣＲ試劑盒進行ＤＮＡ純化并加入ＥＢ緩沖液進行洗脫。得到的??雙鏈ｃＤＮＡ接著末端修復(fù)、加堿基Ａ、加測序接頭處理，處理之后利用瓊脂糖凝膠??電泳將目的大小的片段進行回收，并且進行ＰＣＲ擴增，從而完成整個文庫制備工??作。??文庫構(gòu)建完成后，先使用Ｑｕｂｉｔ３．０進行初步定量，稀釋文庫至ｌｎｇ／ｕｌ，隨后使??用Ａｇｉｌｅｎｔ?２１００對文庫的ｉｎｓｅｒｔ?ｓｉｚｅ進行檢測，ｉｎｓｅｒｔ?ｓｉｚｅ符合預(yù)期后，使用Ｂｉｏ－ＲＡＤ??ＣＦＸ?９６熒光定量ＰＣＲ儀，Ｂｉｏ－ＲＡＤ?ＫＩＴ?ｉＱ?ＳＹＢＲ?ＧＲＮ進行Ｑ－ＰＣＲ，對文庫的有??效濃度進行準確定量（文庫有效濃度＞１０ｎＭ），以保證文庫質(zhì)量。利用Ｉｌｌｕｍｉｎａ平??臺對質(zhì)量合格的文庫進行測序。測序策略為ＰＥ１５０。之后進行數(shù)據(jù)處理，如差異比??較、蛋白互作網(wǎng)絡(luò)、ＧＯ富集分析和ＫＥＧＧ通路分析等。??總ＲＮＡ??臀??利用?Ｏｌｉｇｏ?（ＤＴ）??富集ｍＲＮＡ??▼??片段化??齡Ｔ▲二??隨機引物反轉(zhuǎn)錄??末端修復(fù)，加Ａ??加接頭??上機測序??圖２轉(zhuǎn)錄組測序流程??Ｆｉｇ．２?Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｐｒｏｃｅｓｓ??技術(shù)路線：??

１２?地塞米松誘導(dǎo)肝臟糖脂代謝紊亂分子機制的研究???面積的壞死灶；ＤＥＸ２１組肝臟細胞大面積中度至嚴重的水泡變性和脂肪變性，并且??出現(xiàn)多個大面積壞死灶；而ＤＥＸ２８組肝臟細胞普遍出現(xiàn)中度至嚴重的顆粒變性、??水泡變性和脂肪變性，并沒有發(fā)現(xiàn)壞死灶的出現(xiàn)。除此之外，對肝臟中的脂肪變性??情況進行病理統(tǒng)計，Ｃｔｒｌ組和ＤＥＸ０７組肝細胞內(nèi)胞漿內(nèi)未發(fā)現(xiàn)明顯可見脂滴；??ＤＥＸ１４組中發(fā)生脂肪變性的肝細胞多數(shù)肝細胞胞漿內(nèi)脂滴面積占肝細胞細胞漿面??積的三分之一至二分之一之間；ＤＥＸ２１組發(fā)生脂肪變性的肝細胞多數(shù)肝細胞胞漿內(nèi)??脂滴面積占肝細胞細胞漿面積的三分之一以內(nèi)；ＤＥＸ２８組發(fā)生脂肪變性的肝細胞多??數(shù)肝細胞胞漿內(nèi)脂滴面積占肝細胞細胞漿面積的二分之一以上。從肝臟組織的病理??形態(tài)變化可以看出，ＤＥＸ作用２１ｄ時，肝臟受損最為嚴重，而ＤＥＸ作用２８ｄ時，??脂肪變性最為嚴重。??ｆｔ：：！??ｉｊｉｉ??圖５地塞米松對肝臟組織病理形態(tài)的影響??Ｆｉｇ．５?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ?ｏｎ?ｌｉｖｅｒ?ｐａｔｈｏｌｏｇｙ??３．３?ＤＥＸ對糖脂代謝素亂大鼠血糖相關(guān)指標的影響??空腹血糖和空腹胰島素異常是２型糖尿病前期胰島素抵抗癥狀之一，而糖脂代??謝紊亂是糖尿病的病理基矗因此，對血清中的空腹血糖和空腹胰島素進行檢測。??如圖６所示，在Ｇｌｕｃｏｓｅ的檢測結(jié)果中可以看到，ＤＥＸ作用１４ｄ和２８ｄ后，與Ｃｔｒｌ??組相比，糖脂代謝紊亂大鼠的Ｇｌｕｃｏｓｅ濃度顯著升高（Ｐ＜０．０５）。在ＦＩＮＳ的檢測結(jié)果??

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3382832