葉酸補充是高同型半胱氨酸血癥（HHcy）的一線治療方法。但是有高達40%的HHcy患者不能從葉酸補充治療中獲益。葉酸代謝是一個涉及多種酶的復(fù)雜代謝網(wǎng)絡(luò),不僅可以直接影響同型半胱氨酸（Hcy）的代謝,而且與DNA甲基化密切相關(guān)。DNA甲基化作為一種常見的表觀遺傳修飾,可以彌補遺傳因素影響解釋不足的情況。雖有研究結(jié)果提示葉酸代謝相關(guān)甜菜堿同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶（Betaine-homocysteine methyltransferase,BHMT）和 5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶（Methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR）基因甲基化與 Hcy 濃度的變化相關(guān),但DNA甲基化對葉酸治療HHcy效果的影響目前仍不清楚,有必要進一步探究DNA甲基化在葉酸治療效果中的作用。目的結(jié)合影響葉酸治療效果的環(huán)境及遺傳因素,分析葉酸代謝相關(guān)基因BHMT和MTHFR甲基化水平對葉酸治療效果的影響,進一步探討DNA甲基化在葉酸治療效果中的作用。方法本研究選擇2014年07月-12月期間,在河南省鄭州市鄭州大學第五附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科就診的HHcy患者（Hcy濃度≥15μm... 

【文章來源】：鄭州大學河南省 211工程院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１?一碳轉(zhuǎn)運過程??１．３?ＤＮＡ

??）！?基因組ＤＮＡ提取??＋?｜?＾?Ｉ?｝?Ｉ??ｒ?士?士??中期ｆ室檢?１?ｆ基因多態(tài)性檢測?ｆ＾甲基狀平檢測＇??＾１?，?Ｔ＇?１?）??３?收集和整理數(shù)據(jù)??ｖ?＾??”?—?１?１?士?＾????［甲基化水平比較］［環(huán)境、遺傳影響因索］ｒ構(gòu)建中介模型ｊ??后期統(tǒng)計學分＾?＾?—｝＇〉?各〈〉各?〈??‘析?，獨立關(guān)聯(lián)模型）’交互作用模型），中介效應(yīng)模型）??ｖ？＿??—?一???—?—?ｙ??圖２．１技術(shù)路線圖??２．?２．?６實驗室檢查??使用北京奧普森公司提供的試劑以及貝克曼全自動生化檢測儀，采用免疫比??濁法以及酶法分別對血脂譜指標和血糖進行測定。采用雙抗體夾心法測定人血清??中維生素Ｂ６?（ＶＢ６）、Ｂ１２?（ＶＢ１２）和葉酸水平，酶聯(lián)免疫分析（ＥＬＩＳＡ）試劑??盒由北京麥格泰克科技有限公司提供。??２．?２．?７?ＤＮＡ的提取和純度測定??使用北京百泰克生物技術(shù)有限公司的全基因組ＤＮＡ提取試劑，按照基因組??ＤＮＡ提取的相關(guān)步驟進行操作。主要步驟如下：??７??

?材料與方法???表２．１兩個ＳＮＰｓ位點的信息??基因?ＳＮＰ＿ＩＤ?染色體?位置?等位基因?ＭＡＦ?值?ＨＷＥ－尸值??ＢＨＭＴ?ｒｓ３７３３８９０?５ｐｌ４．１?７９１２６１３６?Ｇ／Ａ?０．２９１?０．０４４?０．９２６??ＭＴＨＦＲ?ｒｓｌ８０１１３３?ｌｐ３６．３?１１７９６３２１?Ｃ／Ｔ?０．２４５?＜０．００１?０．１６８??２．２．９?ＤＮＡ甲基化檢測??委托上海天昊遺傳分析中心對ＢＨＭＴ和ＭＴＨＦＲ基因啟動子區(qū)域的ＤＮＡ甲??基化水平進行檢測。該分析中心采用基于多重ＰＣＲ高通量測序技術(shù)??ＭｅｔｈｙｌＴａｒｇｅｔＴＭ對目標區(qū)域甲基化進行檢測，實驗流程見圖２．２。??引物設(shè)計及優(yōu)化?Ｉ??＼?寸?、甲翻：位點區(qū)域富集??ＢＳＢ??文庫構(gòu)建??文庫質(zhì)檢??上機測庠??圖２．２甲基化實驗流程圖??９??


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