目的:觀察脂肪干細(xì)胞（ADSC）聯(lián)合富血小板血漿（PRP）對糖尿病創(chuàng)面修復(fù)的影響,并探討其機制。方法:（1）采用酶消法分離培養(yǎng)雄性SD大鼠ADSC;采用Sonnleitner法制備PRP;采用高脂高糖飼料喂養(yǎng)聯(lián)合腹腔注射1%鏈脲霉素溶液構(gòu)建雌性糖尿病SD大鼠模型;（2）在糖尿病大鼠中構(gòu)建創(chuàng)面模型,分別采用PBS、PRP、ADSC以及ADSC+PRP治療創(chuàng)面。定期于術(shù)后第1、3、7、10、14天觀察創(chuàng)面肉芽組織生長情況,留取創(chuàng)面組織進行石蠟包埋并制作切片,采用HE染色、免疫組化及免疫熒光法觀察創(chuàng)面血管化、再上皮化、巨噬細(xì)胞浸潤程度、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化及瘢痕形成情況;（3）采用MTS法、流式細(xì)胞技術(shù)和原位雜交法分別觀察PRP與ADSC對內(nèi)皮細(xì)胞（EC）與成纖維細(xì)胞（3T3）增殖與遷移能力的影響以及PRP對ADSC存活、轉(zhuǎn)歸和功能維持的影響;（4）采用免疫組化法及Q-PCR技術(shù)觀察PRP、ADSC以及ADSC聯(lián)合PRP對創(chuàng)面修復(fù)相關(guān)分子SDF1/CXCR7表達的影響。結(jié)果:（1）ADSC聯(lián)合PRP可顯著促進糖尿病創(chuàng)面修復(fù)過程中的微血管形成,再上皮化、膠原成熟度,并減輕巨噬細(xì)胞浸潤程度與細(xì)胞外基質(zhì)... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ADSC的培養(yǎng)及鑒定Figure1.1DevelopmentandidentificationofADSC.A（.a）P0脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)40X（標(biāo)尺100um）；（b）P3脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)40X（標(biāo)尺100um）；

圖 1.2 PRP 的制備及其與 ADSC 的最佳配比Figure 1.2 Preparation of PRP and its Optimum Ratio to ADSCA.TRANSWELL 下室中不同濃度 PRP 對上室等量 ADSC 的遷移趨化作用，（a）-（h）TRANSWELL 小室分別為 10%FBS+DMEM/LG、5%PRP+DMEM/LG、10%PRP+DMEM/LG、20%PRP+DMEM/LG、30%PRP+DMEM/LG、40%PRP+DMEM/LG、80%PRP+DMEM/LG、100%PRP+DMEM/LG，(標(biāo)尺 100um); B. TRANSWELL 下室中不同濃度 PRP 對上室等量 ADSC 的遷移細(xì)胞數(shù)，示 20%PRP+DMEM/LG 對 ADSC 遷移趨化作用最佳（*,P<0.05;**,P<0.01;***,P<0.001）3.ADSC 聯(lián)合 PRP 促進糖尿病創(chuàng)面愈合ADSC 與 PRP 均能促進創(chuàng)面愈合，為進一步研究二者聯(lián)用對糖尿病創(chuàng)面愈合的影響，本研究在糖尿病大鼠中構(gòu)建創(chuàng)面模型，并分別采用 ADSC 單用、PRP 單用與 ADSC 聯(lián)合 PRP 法治療創(chuàng)面。實驗結(jié)果表明，單用 ADSC 或 PRP均對糖尿病創(chuàng)面有治療效果，然而當(dāng)聯(lián)合 ADSC 與 PRP 時，對糖尿病創(chuàng)面愈合的治療效果最佳（圖 1.3），二者呈協(xié)同作用。

29圖 1.3 脂肪干細(xì)胞聯(lián)合富血小板血漿促進糖尿病大鼠皮膚創(chuàng)面修復(fù)Figure 1.3 Adipose-derived stem cells combined with platelet-rich plasma promote the healingof wound in diabetic ratsA．糖尿病大鼠皮膚創(chuàng)面構(gòu)建術(shù)后 1、3、7、10、14 天創(chuàng)面閉合情況，(標(biāo)尺 1cm).B.創(chuàng)面閉合率曲線，ADSC+PRP 組創(chuàng)面閉合顯著快于 PBS 組，在術(shù)后 10 天創(chuàng)面閉合，而其余各組在術(shù)后 14 天均未閉合（*,P<0.05;**,P<0.01;***,P<0.001）4. ADSC 聯(lián)合 PRP 調(diào)控糖尿病創(chuàng)面愈合的多個生物學(xué)進程創(chuàng)面愈合包括凝血期、炎癥期、增殖期和重塑期，其中涉及血管形成、組織再上皮化、炎癥應(yīng)答、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化以及瘢痕形成等多個有序而重疊的階段。為觀察 ADSC 聯(lián)合 PRP 在促進糖尿病創(chuàng)面愈合過程中所發(fā)揮的作用，本研究依次研究二者對多個創(chuàng)面修復(fù)進程的影響。采用 HE 染色法觀察 ADSC與 PRP 對糖尿病創(chuàng)面組織血管化的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn) ADSC 聯(lián)合 PRP 組能明顯

【參考文獻】：
期刊論文
[1]人脂肪干細(xì)胞復(fù)合富血小板血漿治療裸鼠放射性皮膚損傷的實驗研究[J]. 張琳,富澤龍,馮銳.  醫(yī)學(xué)研究雜志. 2015(07)



本文編號：3301415