目的探討sortilin在RAGE/galectin-3調(diào)控斑塊內(nèi)鈣化轉(zhuǎn)歸中的作用機制。方法（1）臨床研究選取2016年3月至2017年12月因“糖尿病足”在江蘇大學附屬醫(yī)院骨科接受截肢手術的患者共30名,根據(jù)脛前動脈鈣含量分為少鈣化組（﹤5μmol/mg）和多鈣化組。分析兩組患者的臨床資料,包括年齡,性別,BMI,糖尿病病程,既往疾病史、空腹血糖,膽固醇、甘油三酯和血清CML水平。Von Kossa鈣鹽染色顯示各組患者脛前動脈鈣結(jié)節(jié)形態(tài)并分析鈣結(jié)節(jié)長徑,免疫組織化學染色顯示各組脛前動脈RAGE及galectin-3表達水平。（2）體外實驗培養(yǎng)原代小鼠主動脈平滑肌細胞,利用成骨培養(yǎng)基、CML及oxLDL構建糖尿病血管鈣化體外模型。在病毒沉默表達RAGE及galectin-3后,利用鈣鹽染色顯示鈣化形態(tài),統(tǒng)計分析鈣結(jié)節(jié)長徑并判定鈣化類型。利用Western blot明確RAGE、galectin-3沉默對于sortilin表達的影響。接著,在沉默RAGE/galectin-3的基礎上,利用siRNA或重組蛋白分別阻斷或增加sortiln的表達,行鈣鹽染色及鈣定量分析,進一步探究sorti... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

糖尿病足患者截肢后脛前動脈鈣化類型及RAGE/galectin-3表達水平

< 0.05 compared with microcalcification of the less calcification group. Cith macrocalcifications or microcalcifications was detected by ELISA.化與微鈣化血管中RAGE、galectin-3表達的情況內(nèi)大鈣化與微鈣化患者的血清 CML 水平?jīng)]有差異，因而我兩個主要受體 RAGE 與 galectin-3 在大鈣化與微鈣化血管。通過免疫組織化學染色及其定量結(jié)果可知（圖 1.1 第 2、3 行血管中 RAGE 表達明顯少于 galectin-3，而微鈣化的血管中 于 galectin-3。由此我們推測可能是 RAGE 和 galectin-3 在血揮了調(diào)控大鈣化/微鈣化轉(zhuǎn)歸的作用，為此我們設計了體外討。

本部分所有數(shù)據(jù)分析均利用 SPSS 22.0 軟件進行，計量資料以均數(shù)±標準差( ±s)的形式表示，兩組正態(tài)分布的計量資料間差異比較采用 t 檢驗，非正態(tài)分布計量資料間差異比較采用 Wilcoxon 秩和檢驗。計數(shù)資料以頻數(shù)和百分數(shù)表示，兩組計數(shù)資料間的差異比較采用卡方檢驗。p<0.05 代表差異具有統(tǒng)計學意義。4 實驗結(jié)果4.1 原代小鼠主動脈平滑肌細胞培養(yǎng)及鑒定取 C57 小鼠胸主動脈中膜平滑肌層，剪成組織塊置于培養(yǎng)皿后，加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)約 3 天后鏡下觀察（圖 2.1）�？梢娊M織塊邊緣少許細胞爬出，形態(tài)多不規(guī)則。定期 2 天換液一次，可見爬出的細胞逐漸增多，并逐漸融合成片，此時細胞多成梭形，符合血管平滑肌細胞形態(tài)。利用 αSMA 抗體行免疫熒光染色標記平滑肌細胞，可見胞質(zhì)中絲狀物，且陽性細胞占細胞總數(shù) 90%以上，提示原代小鼠主動脈平滑肌細胞提取培養(yǎng)成功，可用于后續(xù)實驗。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Vascular calcification in chronic kidney disease: Pathogenesis and clinical implication[J]. Sinee Disthabanchong.  World Journal of Nephrology. 2012(02)



本文編號：3237583