RAGE/galectin-3通過(guò)sortilin介導(dǎo)斑塊內(nèi)鈣化轉(zhuǎn)歸的研究
發(fā)布時(shí)間：2021-06-19 09:48
目的探討sortilin在RAGE/galectin-3調(diào)控斑塊內(nèi)鈣化轉(zhuǎn)歸中的作用機(jī)制。方法（1）臨床研究選取2016年3月至2017年12月因“糖尿病足”在江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院骨科接受截肢手術(shù)的患者共30名,根據(jù)脛前動(dòng)脈鈣含量分為少鈣化組（﹤5μmol/mg）和多鈣化組。分析兩組患者的臨床資料,包括年齡,性別,BMI,糖尿病病程,既往疾病史、空腹血糖,膽固醇、甘油三酯和血清CML水平。Von Kossa鈣鹽染色顯示各組患者脛前動(dòng)脈鈣結(jié)節(jié)形態(tài)并分析鈣結(jié)節(jié)長(zhǎng)徑,免疫組織化學(xué)染色顯示各組脛前動(dòng)脈RAGE及galectin-3表達(dá)水平。（2）體外實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)原代小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,利用成骨培養(yǎng)基、CML及oxLDL構(gòu)建糖尿病血管鈣化體外模型。在病毒沉默表達(dá)RAGE及galectin-3后,利用鈣鹽染色顯示鈣化形態(tài),統(tǒng)計(jì)分析鈣結(jié)節(jié)長(zhǎng)徑并判定鈣化類(lèi)型。利用Western blot明確RAGE、galectin-3沉默對(duì)于sortilin表達(dá)的影響。接著,在沉默RAGE/galectin-3的基礎(chǔ)上,利用siRNA或重組蛋白分別阻斷或增加sortiln的表達(dá),行鈣鹽染色及鈣定量分析,進(jìn)一步探究sorti...
【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省
【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
糖尿病足患者截肢后脛前動(dòng)脈鈣化類(lèi)型及RAGE/galectin-3表達(dá)水平
< 0.05 compared with microcalcification of the less calcification group. Cith macrocalcifications or microcalcifications was detected by ELISA.化與微鈣化血管中RAGE、galectin-3表達(dá)的情況內(nèi)大鈣化與微鈣化患者的血清 CML 水平?jīng)]有差異，因而我兩個(gè)主要受體 RAGE 與 galectin-3 在大鈣化與微鈣化血管。通過(guò)免疫組織化學(xué)染色及其定量結(jié)果可知（圖 1.1 第 2、3 行血管中 RAGE 表達(dá)明顯少于 galectin-3，而微鈣化的血管中 于 galectin-3。由此我們推測(cè)可能是 RAGE 和 galectin-3 在血揮了調(diào)控大鈣化/微鈣化轉(zhuǎn)歸的作用，為此我們?cè)O(shè)計(jì)了體外討。
本部分所有數(shù)據(jù)分析均利用 SPSS 22.0 軟件進(jìn)行，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( ±s)的形式表示，兩組正態(tài)分布的計(jì)量資料間差異比較采用 t 檢驗(yàn)，非正態(tài)分布計(jì)量資料間差異比較采用 Wilcoxon 秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和百分?jǐn)?shù)表示，兩組計(jì)數(shù)資料間的差異比較采用卡方檢驗(yàn)。p<0.05 代表差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1 原代小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定取 C57 小鼠胸主動(dòng)脈中膜平滑肌層，剪成組織塊置于培養(yǎng)皿后，加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)約 3 天后鏡下觀察（圖 2.1）�？梢�(jiàn)組織塊邊緣少許細(xì)胞爬出，形態(tài)多不規(guī)則。定期 2 天換液一次，可見(jiàn)爬出的細(xì)胞逐漸增多，并逐漸融合成片，此時(shí)細(xì)胞多成梭形，符合血管平滑肌細(xì)胞形態(tài)。利用 αSMA 抗體行免疫熒光染色標(biāo)記平滑肌細(xì)胞，可見(jiàn)胞質(zhì)中絲狀物，且陽(yáng)性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù) 90%以上，提示原代小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞提取培養(yǎng)成功，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Vascular calcification in chronic kidney disease: Pathogenesis and clinical implication[J]. Sinee Disthabanchong. World Journal of Nephrology. 2012(02)
本文編號(hào)：3237583
【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省
【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
糖尿病足患者截肢后脛前動(dòng)脈鈣化類(lèi)型及RAGE/galectin-3表達(dá)水平
< 0.05 compared with microcalcification of the less calcification group. Cith macrocalcifications or microcalcifications was detected by ELISA.化與微鈣化血管中RAGE、galectin-3表達(dá)的情況內(nèi)大鈣化與微鈣化患者的血清 CML 水平?jīng)]有差異，因而我兩個(gè)主要受體 RAGE 與 galectin-3 在大鈣化與微鈣化血管。通過(guò)免疫組織化學(xué)染色及其定量結(jié)果可知（圖 1.1 第 2、3 行血管中 RAGE 表達(dá)明顯少于 galectin-3，而微鈣化的血管中 于 galectin-3。由此我們推測(cè)可能是 RAGE 和 galectin-3 在血揮了調(diào)控大鈣化/微鈣化轉(zhuǎn)歸的作用，為此我們?cè)O(shè)計(jì)了體外討。
本部分所有數(shù)據(jù)分析均利用 SPSS 22.0 軟件進(jìn)行，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( ±s)的形式表示，兩組正態(tài)分布的計(jì)量資料間差異比較采用 t 檢驗(yàn)，非正態(tài)分布計(jì)量資料間差異比較采用 Wilcoxon 秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和百分?jǐn)?shù)表示，兩組計(jì)數(shù)資料間的差異比較采用卡方檢驗(yàn)。p<0.05 代表差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1 原代小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定取 C57 小鼠胸主動(dòng)脈中膜平滑肌層，剪成組織塊置于培養(yǎng)皿后，加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)約 3 天后鏡下觀察（圖 2.1）�？梢�(jiàn)組織塊邊緣少許細(xì)胞爬出，形態(tài)多不規(guī)則。定期 2 天換液一次，可見(jiàn)爬出的細(xì)胞逐漸增多，并逐漸融合成片，此時(shí)細(xì)胞多成梭形，符合血管平滑肌細(xì)胞形態(tài)。利用 αSMA 抗體行免疫熒光染色標(biāo)記平滑肌細(xì)胞，可見(jiàn)胞質(zhì)中絲狀物，且陽(yáng)性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù) 90%以上，提示原代小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞提取培養(yǎng)成功，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Vascular calcification in chronic kidney disease: Pathogenesis and clinical implication[J]. Sinee Disthabanchong. World Journal of Nephrology. 2012(02)
本文編號(hào)：3237583
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