RNF（RING finger）家族包含有眾多成員,其中的一些蛋白質(zhì)具有E3泛素連接酶（RING finger E3）活性,大量研究表明它們?cè)谘装Y反應(yīng)和癌癥的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。RNF186是RNF家族的一員,參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ER Stress）介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和不同細(xì)胞類型（例如HeLa細(xì)胞和結(jié)腸上皮細(xì)胞）的炎癥發(fā)生過程,然而,RNF186在外周組織中的生理功能尚未明確。在本研究中,我們探討了RNF186在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的生理功能以及在調(diào)節(jié)小鼠胰島素敏感性中的作用。我們的研究結(jié)果證實(shí)在糖尿病、肥胖和高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖（DIO）小鼠肝臟中RNF186表達(dá)水平顯著增加;分離小鼠肝原代細(xì)胞體外培養(yǎng),并用腺病毒上調(diào)RNF186的表達(dá),結(jié)果證實(shí)上調(diào)RNF186的表達(dá)將增加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激傳感器肌醇需要激酶1（IRE1）和C/EBP同源蛋白（CHOP）的表達(dá)水平,并且真核起始因子2α（eIF2α）的磷酸化水平也有所增加。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)在肝原代細(xì)胞中上調(diào)RNF186可促進(jìn)c-Jun N-末端激酶（JNK）介導(dǎo)的胰島素受體底物1（IRS1）的磷酸化,降低了胰島素的敏感性。同時(shí),RNF186的過表達(dá)也顯著增... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

肝臟RNF186基因表達(dá)水平在糖尿病和肥胖小鼠中失調(diào)(A-B)qPCR（A）和westernblot（B）結(jié)果顯示db/m和db/db小鼠肝臟中RNF186的

RNF186 過表達(dá)誘導(dǎo) IRE1α 和 CHOP 蛋白水平增加（圖 2B 和 C）并促進(jìn) eIF2α 蛋白的磷酸化（圖2D-E）。然而，剪接的 X-box 結(jié)合蛋白 1（XBP1s）和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白 78（GRP78）的 mRNA 及蛋白質(zhì)水平未發(fā)生變化（圖 3）。除此之外，我們也在 HepG2 細(xì)胞中進(jìn)行了相同的實(shí)驗(yàn)，得到了與肝臟原代細(xì)胞中的相似的結(jié)果（圖 4A）。Ad-RNF186處理組的 IRE1α 磷酸化水平顯著高于對(duì)照組（圖 4B）。在肝原代細(xì)胞中，過表達(dá)RNF186 后 IRE1α 的磷酸化水平并沒有明顯變化（數(shù)據(jù)未展示）。通過以上結(jié)果，我們觀察到在不同的細(xì)胞類型中，RNF186 的功能有相同也有不同。

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文F186 for 24 h.) The protein expression levels of IRE1α and CHOP were quantified after normalization to β-) The phosphorylation levels of eIF2α were analysed by western blot in mouse primary hepatoected with Ad-GFP or Ad-RNF186 for 24 h.) eIF2α phosphorylation densitometry in (D).l experiments were conducted at least three times and included three technical replicateperiment. Data are presented as the means ±SEM. **p <0.01, ***p <0.001.


本文編號(hào)：3211474