發(fā)布時(shí)間：2021-04-26 12:33

　　目的:百草枯（Paraquat,簡稱PQ）是一種廣泛使用的除草劑,對人畜均有較強(qiáng)的毒性,且無解毒劑,PQ中毒晚期可導(dǎo)致肺部纖維化直至呼吸衰竭而死亡。根據(jù)中毒后肺部上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為間質(zhì)細(xì)胞的生理過程。我們認(rèn)為缺氧誘導(dǎo)因子（HIF）在PQ中毒導(dǎo)致肺纖維化中起到了重要作用。在PQ中毒導(dǎo)致細(xì)胞嚴(yán)重缺氧的條件下,HIF通過結(jié)合缺氧反應(yīng)元件激活下游眾多靶基因,從而參與與肺部上皮細(xì)胞的血管生成和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的環(huán)節(jié)。HIF也可以直接與細(xì)胞信號通路發(fā)生反應(yīng)。本文旨在探索HIF-1α通過Notch1信號通路來調(diào)節(jié)PQ中毒所致肺部EMT的機(jī)制,從而控制纖維化的發(fā)生和進(jìn)展,為PQ中毒的治療尋找潛在的靶點(diǎn)。方法:1、PQ中毒的小鼠模型建立:以腹腔注射方式染毒,構(gòu)建PQ染毒后小鼠的肺纖維化模型。方法:A組（生理鹽水對照組）,B組10mg/kg（單次染毒組）,C組:20mg/kg（單次染毒組）,D組（10mg/kg隔日一次染毒組,共三次）染毒后觀察至第21天麻醉處死小鼠取肺組織,鏡下觀察病理組織變化,馬松染色,Ashcroft評分等方法來評估纖維化程度,提取小鼠肺組織蛋白以Western Blot檢測HIF... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 百草枯中毒致小鼠肺纖維化模型建立
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 動物與試劑
        2.2 處理方法
        2.3 蘇木精-伊紅染色（hematoxylin-eosin,HE染色）、馬松（Masson染色）三色染色及Ashcroft評分
        2.4 Western Blot蛋白檢測
        2.5 觀察指標(biāo)
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 一般情況
        3.2 生存分析
        3.3 蘇木精-伊紅（HE）染色
        3.4 Masson染色
        3.5 小鼠肺組織的Ashcroft評分
        3.6 Western Blot檢測
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 HIF-1α通過調(diào)控Notch1通路誘導(dǎo)百草枯中毒發(fā)生EMT機(jī)制研究
    1 材料與方法
        1.1 材料人肺腺癌A549細(xì)胞
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 細(xì)胞模型制備
        2.2 Western Blot
        2.3 Transwell實(shí)驗(yàn)
        2.4 MTT法檢測細(xì)胞活性檢測
        2.5 Realtime RT-PCR
        2.6 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
        2.7 免疫共沉（Co-IP）
    3 結(jié)果
        3.1 在體外模擬百草枯中毒致纖維化的細(xì)胞模型
        3.2 Transwell結(jié)果
        3.3 Western Blot結(jié)果
        3.4 MTT結(jié)果
        3.5 Realtime RT-PCR結(jié)果
        3.6 HIF-1α和Notch1的Co-IP結(jié)果
        3.7 HIF-1α通過調(diào)控Notch1 通路調(diào)節(jié)PQ誘導(dǎo)的EMT
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Hypoxia inducible factor（HIF） in the tumor microenvironment:friend or foe?[J]. Yanqing Huang,Daniel Lin,Cullen M.Taniguchi.  Science China（Life Sciences）. 2017(10)
[2]雷帕霉素對小鼠百草枯中毒導(dǎo)致肺纖維化的治療作用(英文)[J]. Xue SHAO,Meng LI,Chong LUO,Ying-ying WANG,Ying-ying LU,Shi FENG,Heng LI,Xia-bing LANG,Yu-cheng WANG,Chuan LIN,Xiu-jin SHEN,Qin ZHOU,Hong JIANG,Jiang-hua CHEN.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2015(01)



本文編號：3161420