本文關(guān)鍵詞：GLP-1對(duì)氧化激誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:糖尿病(diabetes mellitus,DM)以長(zhǎng)期慢性高血糖為發(fā)病基礎(chǔ),胰島素分泌缺陷和(或)胰島素抵抗為特征的一組代謝性疾病。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,人們生活方式的改變,糖尿病患病率顯著增加。多種代謝紊亂會(huì)導(dǎo)致糖尿病血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙,從而引起一系列的糖尿病血管并發(fā)癥,據(jù)統(tǒng)計(jì)糖尿病血管并發(fā)癥已成為糖尿病致殘致死的主要原因,因此保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)糖尿病患者具有重要意義。糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制主要包括多元醇通路、蛋白激酶C活化、糖基化終產(chǎn)物形成及其受體活化、己糖胺途徑和氧化應(yīng)激水平升高等,其中氧化應(yīng)激被認(rèn)為是始動(dòng)環(huán)節(jié)及關(guān)鍵因素。因此本研究采用H2O2刺激內(nèi)皮細(xì)胞制備氧化應(yīng)激模型模擬糖尿病血管病變。胰高血糖素樣肽-1(Glucagon-like peptide 1,GLP-1)是由腸道L細(xì)胞分泌的一種肽類激素,通過葡萄糖依賴的方式作用于胰島β細(xì)胞,促進(jìn)胰島素的生物合成和分泌。研究表明GLP-1還可刺激胰島β細(xì)胞的增殖和分化,抑制胰島β細(xì)胞凋亡,增加胰島β細(xì)胞數(shù)量,同時(shí)還可抑制胰高血糖素的分泌、減少肝糖原的輸出等。GLP-1不僅能夠降低血糖、維持血糖穩(wěn)定,還能抑制食欲,但是因其半衰期極短,易被體內(nèi)二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidy1 proteaseⅣ,DPP-Ⅳ)降解,因此在臨床應(yīng)用方面受到了限制。GLP-1類似物及DPP-Ⅳ抑制劑克服了其半衰期短的缺陷,因此逐漸應(yīng)用于2型糖尿病的臨床治療。近年來有研究表明GLP-1不僅能夠降低血糖,維持血糖穩(wěn)定,同時(shí)對(duì)心血管具有重要的保護(hù)作用,不僅可減輕血管的炎性損傷,其受體激動(dòng)劑還可刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖,對(duì)損傷的血管進(jìn)行修復(fù),但其對(duì)H2O2所致內(nèi)皮細(xì)胞的損傷是否具有保護(hù)作用尚不清楚。因此,本研究以H2O2刺激原代培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞制備氧化應(yīng)激細(xì)胞模型,觀察經(jīng)GLP-1(7-36)干預(yù)后是否能降低H2O2所致的內(nèi)皮細(xì)胞損傷。方法:①人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng):采用膠原酶灌注消化法分離人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,接種至包被有多聚賴氨酸的25cm2的培養(yǎng)瓶中,24h后更換培養(yǎng)液,以后每隔2d換液1次。當(dāng)原代細(xì)胞融合85%-90%以上后,加入0.05%胰蛋白酶-0.02%EDTA溶液消化,傳代培養(yǎng)。第四代內(nèi)皮細(xì)胞用于測(cè)定細(xì)胞活力。②人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的鑒定:應(yīng)用兔抗人Ⅷ因子單克隆抗體對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色,鑒定人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。③CCK-8法測(cè)定細(xì)胞活力:顯微鏡下觀察,將長(zhǎng)至大約70%的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,隨機(jī)分為5組,每組中分別加入0μM、100μM、200μM、400μM、800μM的H2O2,繼續(xù)培養(yǎng)8、16、24 h,到達(dá)規(guī)定時(shí)間,于450nm處用多功能酶標(biāo)儀測(cè)定各孔吸光度值,計(jì)算各組別細(xì)胞存活率,選定合適的刺激濃度及時(shí)間。⑤GLP-1(7-36)干預(yù)后CCK-8法測(cè)定細(xì)胞活力:將長(zhǎng)至70%的內(nèi)皮細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組及刺激組,刺激組加入200μM的H2O2的同時(shí)分別加入0n M、100n M、200n M、400n M、800n M的GLP-1(7-36)孵育24小時(shí),測(cè)定吸光度值,計(jì)算細(xì)胞存活率。⑤統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:所有數(shù)據(jù)采用x±s表示。用SPSS 13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,采用方差分析和獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,以P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞鑒定:兔抗人Ⅷ因子單克隆抗體免疫細(xì)胞化學(xué)染色,陽性反應(yīng)物呈棕黃色,反應(yīng)物分布于內(nèi)皮細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)。染色結(jié)果顯示,第一代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞胞體飽滿,呈梭形或多邊形,細(xì)胞表面光滑,邊界清楚。2細(xì)胞活力測(cè)定:不同濃度的H2O2刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞不同時(shí)間后,細(xì)胞活力明顯降低(P0.05),并且表現(xiàn)出一定的劑量依賴性,其中給予200μM H2O2刺激24h細(xì)胞存活率降低至67%。3給予GLP-(7-36)干預(yù)后內(nèi)皮細(xì)胞的活力明顯上升,從200n M GLP-1(7-36)干預(yù)濃度其具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),并且表現(xiàn)出一定的劑量依賴性,其中200n M GLP-1(7-36)干預(yù)后細(xì)胞活力上升至88%。結(jié)論:1 H2O2刺激可引起內(nèi)皮細(xì)胞活力明顯下降,提示氧化應(yīng)激引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷可能是DM微血管及大血管并發(fā)癥的主要機(jī)制之一。2 GLP-1(7-36)可降低氧化應(yīng)激所致的內(nèi)皮細(xì)胞損傷,從而預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 氧化應(yīng)激 GLP-1(7-36)
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-14
• 結(jié)果14-16
• 附圖16-18
• 討論18-21
• 結(jié)論21
• 參考文獻(xiàn)21-25
• 綜述 氧化應(yīng)激與心血管疾病25-35
• 參考文獻(xiàn)30-35
• 致謝35-36
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷36

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 胡珂;晏新民;胡志雄;鄒勇;;關(guān)于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化氧化應(yīng)激方面指標(biāo)的研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2010年25期

  本文關(guān)鍵詞：GLP-1對(duì)氧化激誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：315904