本文關(guān)鍵詞：苯丙酮尿癥常見突變位點檢測及中國人群PAH基因突變譜的調(diào)查，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：苯丙酮尿癥(phenylketonuria, PKU)是一種常見的常染色體隱性遺傳代謝病,嚴重危害著人類健康。該病主要是由于苯丙氨酸羥化酶(phenylalanine hydroxylase, PAH)基因突變所致,使得PAH活性下降或者缺乏,導致苯丙氨酸不能正常代謝,血液、組織中的苯丙氨酸及其旁路代謝產(chǎn)物堆積,最終導致中樞神經(jīng)系統(tǒng)受到不可逆的損害,而出現(xiàn)精神行為異常、癲癇和智力低下等癥狀。PKU是一種可通過飲食控制進行治療的遺傳病,早發(fā)現(xiàn)早治療是其治療的關(guān)鍵,但是昂貴的治療費用給家庭和社會帶來了沉重的經(jīng)濟負擔,而且不能從根本上降低PKU患兒的出生率。目前,解決這一系列問題的重要手段是積極地開展基因診斷和產(chǎn)前診斷。本論文利用實時PCR技術(shù)平臺,提出了一種快速、準確檢測PKU基因突變的新方法,并將該方法應用于中國人群PAH基因突變譜的研究當中,最終完善了中國人群的PAH基因突變譜,具有重要的臨床意義,為中國的PKU防控奠定了基礎(chǔ)。 第一章,分別對PKU的發(fā)現(xiàn)、分類和分子機制,以及PAH基因的特點進行綜述,并且介紹了臨床常用的生化檢測方法和基因診斷的研究進展,另外還對PKU的流行病學研究現(xiàn)狀,主要包括PKU的篩查與產(chǎn)前診斷開展現(xiàn)狀和PAH基因突變譜的研究狀況進行概述。最后,提出了本論文的研究目的、內(nèi)容及意義。 第二章,我們采用了多色探針熔解曲線分析技術(shù)用于PAH基因突變的快速檢測。首先對該技術(shù)的原理進行了詳細的介紹,之后針對中國人群PAH基因突變的特點,我們建立了三管四色的突變檢測體系,實現(xiàn)了對中國人群常見的27種PAH基因突變類型的檢測,并系統(tǒng)考察了該項技術(shù)應用于突變檢測的可行性。整個實驗過程可以在4小時內(nèi)完成,靈敏度達到100pg人類基因組DNA/reaction。最后對112份臨床標本進行雙盲實驗,其中除了17個等位基因在體系檢測范圍之外,剩余207個等位基因和DNA測序結(jié)果一致,驗證了該體系檢測PAH基因突變的準確性和可靠性。 第三章,為深入了解中國人群PAH基因的突變類型及突變頻率,繪制中國人群的PAH基因突變譜,我們聯(lián)合北京大愛天使苯丙酮尿癥罕見病關(guān)愛中心(PKU聯(lián)盟)和WHO遺傳病社區(qū)控制合作中心(中國醫(yī)學科學院基礎(chǔ)醫(yī)學研究所)開展了“輕吻一刻：中國PKU突變譜”大型公益研究項目。以多色探針熔解曲線分析技術(shù)為主,結(jié)合DNA測序技術(shù),對來自中國各地的307個PKU家系共929份唾液標本進行PAH基因突變檢測,并對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析,最終給出了目前覆蓋地域最廣、人群最大、突變類型最多、家系信息最為完整的中國人群PAH基因突變譜。
【關(guān)鍵詞】：苯丙酮尿癥 多色探針熔解曲線分析 PAH基因突變譜
【學位授予單位】：廈門大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R589
【目錄】：

• 目錄4-6
• Contents6-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 第一章 苯兩酮尿癥及其診斷概述12-30
• 第一節(jié) PKU概述12-15
• 第二節(jié) PKU診斷概述15-20
• 2.1 生化檢測方法16-17
• 2.2 分子生物學檢測方法17-20
• 第三節(jié) PKU的防治與研究現(xiàn)狀20-22
• 3.1 PKU的篩查與產(chǎn)前診斷20-21
• 3.2 PAH基因突變譜的調(diào)查21-22
• 第四節(jié) 本論文的研究內(nèi)容及意義22-24
• 參考文獻24-30
• 第二章 多色探針熔解曲線分析技術(shù)用于PKU的常見突變檢測30-61
• 第一節(jié) 引言30-32
• 第二節(jié) 材料和方法32-43
• 第三節(jié) 結(jié)果43-55
• 3.1 27種PAH基因突變質(zhì)粒的構(gòu)建43-44
• 3.2 人工合成的靶序列熔解曲線分析考察各探針檢測突變的能力44-45
• 3.3 單重單色實時PCR及熔解曲線分析體系的建立45-47
• 3.4 多重多色實時PCR及熔解曲線分析體系的建立47-48
• 3.5 多重多色突變檢測體系的檢測靈敏度48-50
• 3.6 臨床標本的雙盲檢測50-55
• 第四節(jié) 討論55-58
• 參考文獻58-61
• 第三章 中國人群PAH基因突變譜的調(diào)查61-76
• 第一節(jié) 引言61-62
• 第二節(jié) 材料和方法62-66
• 第三節(jié) 結(jié)果66-71
• 3.1 唾液基因組DNA的提取66-67
• 3.2 樣本檢測67-68
• 3.3 PAH基因突變譜的建立68-71
• 第四節(jié) 討論71-75
• 參考文獻75-76
• 英文縮寫索引76-77
• 致謝77-78

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張玉敏,秦金莉,裘蕾,李淑華,陸桂香,宋f ,金煜煒,王紅,張霆;北京地區(qū)PKU篩查、診療及基因分析[J];中國兒童保健雜志;2003年06期

2 靳憲蓮,朱建政,徐鵬;影響苯丙酮尿癥預后因素的探討[J];中國兒童保健雜志;2005年05期

3 顧學范;苯丙酮尿癥的診斷和治療[J];廣東醫(yī)學;2000年07期

4 朱月春,汪寧,況應敏;云南經(jīng)典型苯丙酮尿癥基因Exon-11突變的檢測[J];昆明醫(yī)學院學報;1999年04期

5 閆衛(wèi)東;;苯丙酮尿癥常用篩查方法的比較[J];生物學通報;2007年04期

6 顧學范;苯丙酮尿癥防治現(xiàn)狀及進展[J];實用兒科臨床雜志;2000年05期

7 賴有行;周才;黃瑞玉;周永賢;蘇桂芳;;先天性甲狀腺功能減低癥和苯丙酮尿癥的篩查結(jié)果分析[J];實用醫(yī)學雜志;2006年15期

8 宋力,孟英韜,高文英,徐風鐸,單忠敏;苯丙氨酸羥化酶基因內(nèi)短串聯(lián)重復序列多態(tài)性應用分析[J];天津醫(yī)藥;1998年03期

9 ;衛(wèi)生部關(guān)于印發(fā)《新生兒疾病篩查技術(shù)規(guī)范》的通知[J];中華人民共和國衛(wèi)生部公報;2005年01期

10 中華醫(yī)學會兒科學分會內(nèi)分泌遺傳代謝學組,沈永年;全國兒科內(nèi)分泌遺傳性疾病2000年學術(shù)會議(第七屆)紀要[J];中華兒科雜志;2001年03期

  本文關(guān)鍵詞：苯丙酮尿癥常見突變位點檢測及中國人群PAH基因突變譜的調(diào)查，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：311997