1型糖尿病（T1D）是一種主要以胰島β細胞受損為特征的自身免疫性疾病。作為世界性醫(yī)療難題,幾十年來一直缺乏有效的治療方法。大量研究表明,腸道穩(wěn)態(tài)失衡是誘發(fā)T1D的重要因素,同時,低酯果膠（LMP）具有維持腸道穩(wěn)態(tài)的作用,但是幾乎沒有LMP與T1D的相關報道。為了探究LMP膳食干預對T1D發(fā)病的影響及作用機制,首先,本文通過對4周齡雌性非肥胖糖尿�。∟OD）小鼠進行持續(xù)40周的5%LMP膳食干預,觀察日常膳食中添加LMP對NOD小鼠發(fā)病率及腸道穩(wěn)態(tài)的影響并初步探究LMP的作用機理。隨后,通過體外模擬腸道炎癥環(huán)境,篩選到LMP作用靶點并初步確認LMP維持腸道穩(wěn)態(tài)依賴于組蛋白去甲基化酶KDM5a。由于腸道穩(wěn)態(tài)失衡會誘發(fā)炎癥性腸病,接下來,我們抑制或過表達KDM5a,以此確認KDM5a表達對結腸炎小鼠腸道穩(wěn)態(tài)的影響及闡明潛在作用機理。最后,我們在NOD小鼠中抑制或過表達KDM5a,觀察KDM5a的表達對NOD小鼠發(fā)病率及免疫調(diào)節(jié)的影響,并闡明潛在作用機理。本研究主要結果如下:經(jīng)40周的膳食干預,53.8%的膳食干預組小鼠發(fā)病而正常膳食組小鼠全部發(fā)病。膳食干預小鼠胰島炎嚴重程度、胰腺和盲腸炎癥水... 

【文章來源】：江南大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

腸屏障示意圖

江南大學博士學位論文142.2.4動物實驗設計與實驗操作首先，將小鼠分為兩組：正常膳食組（NOD）和低酯果膠干預組（NOD+LMP）。小鼠無限制飲水和采食，從第10周起進行每周一次的空腹血糖監(jiān)測，直到其中一組小鼠全部發(fā)病則停止監(jiān)測（n=20）。同期進行的平行試驗中，于第22周處死小鼠，收集樣本進行實驗（n=10）。其次，確認LMP的作用后按如圖2-1中時間節(jié)點對小鼠進行抗生素和糞菌移植的實驗（n=6）。圖2-1實驗設計Fig.2-1ExperimentaldesignofLMP,ABXandMTtreatment將4周齡雌性NOD小鼠隨機分為以下7組，具體分組信息見下表。表2-2小鼠分組Table2-2Groupinformation組別名稱組別標記備注正常對照組NOD抗生素處理組NOD+ABX糞菌移植組NOD+ABX+MT低酯果膠干預組NOD+LMP低酯果膠干預抗生素處理組NOD+LMP+ABX低酯果膠干預糞菌移植對照組NOD+LMP+ABX+MT(NC)糞菌來源為正常飼料喂飼的NOD小鼠盲腸內(nèi)容物低酯果膠干預糞菌移植組NOD+LMP+ABX+MT糞菌來源為低酯果膠喂飼的NOD小鼠盲腸內(nèi)容物NOD小鼠從第4周起分別喂飼正常飼料和5%LMP添加飼料，于第6周進行為期一周的抗生素灌胃處理，無需進行抗生素處理的小鼠灌胃等體積PBS。于第7周進行為期一周的糞菌移植實驗，無需進行抗生素處理的小鼠灌胃等體積甘油/PBS溶液。

江南大學博士學位論文202.3.1016srDNA擴增子測序收集小鼠糞便后，提取小鼠腸道內(nèi)容物中的基因組。送樣至華大基因公司進行測序及進行數(shù)據(jù)分析。其流程為：PCR擴增細菌V4區(qū)；回收PCR產(chǎn)物定量；混樣，構建文庫；測序及生物信息學分析。2.3.11數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析所有生物學實驗皆重復3次后，將數(shù)據(jù)用GraphPadSoftware7.0（SanDiego，USA）統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，實驗結果均以平均值±標準誤差（Mean±SEM）。兩組間數(shù)據(jù)顯著性分析用t值檢驗（two-tailedStudent’st-test），多組數(shù)據(jù)兩兩比較采用單因素方差分析（OneWayANOVA分析）。如果p<0.05則用*表示,p<0.01則用**表示,p<0.001則用***表示，都表示有顯著差異。2.4結果與討論2.4.1LMP膳食干預對NOD鼠發(fā)病率的影響1型糖尿病（T1D）是一種機體胰島細胞遭受自身免疫細胞攻擊的而受損引發(fā)高血糖癥的自身免疫性疾病，低酯果膠（LMP）具有抑制炎癥、改善免疫調(diào)節(jié)的作用，于是為了測試LMP膳食干預對NOD小鼠發(fā)病率的影響，我們將4周齡雌性NOD小鼠隨機分為兩組：喂飼AIN-93G基礎飼料的對照組（NOD組）及5%LMP膳食纖維添加組（NOD+LMP組）。經(jīng)過40周喂飼，發(fā)現(xiàn)NOD組小鼠全部發(fā)病而只有53.8%的LMP干預小鼠發(fā)�。▓D2-1A）。對比第22周兩組小鼠的空腹血糖發(fā)現(xiàn)喂飼LMP小鼠的空腹血糖顯著低于NOD組小鼠（圖2-1B）。由此表明LMP膳食干預能夠顯著降低NOD小鼠空腹血糖及發(fā)病率。圖2-1LMP干預降低NOD小鼠發(fā)病率及空腹血糖Fig.2-1LMPinterventionreducestheincidenceofT1Dandfastingbloodglucose注：（A）發(fā)病率曲線；（B）第22周非發(fā)病小鼠空腹血糖2.4.2LMP膳食干預對NOD鼠胰腸區(qū)域炎癥及免疫反應的影響T1D的發(fā)病主要是由于小鼠胰腺組織中胰島細胞受到損傷，于是LMP干預對小鼠

【參考文獻】：
碩士論文
[1]產(chǎn)共軛亞油酸乳酸菌對DSS誘導小鼠結腸炎的改善作用[D]. 王俊通.江南大學 2016



本文編號：3112154