發(fā)布時(shí)間：2021-03-05 22:34

　　目的探討硫代乙酰胺（TAA）體外誘導(dǎo)BMSCs向破骨樣細(xì)胞的分化,分析誘導(dǎo)過程中破骨樣細(xì)胞形態(tài)、蛋白表達(dá)和骨代謝標(biāo)志物表達(dá)水平的變化,為TAA導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥的毒性研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1.體外無菌分離,培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行表面分子檢測(cè)。2.CCK-8實(shí)驗(yàn)篩選硫代乙酰胺誘導(dǎo)BMSCs細(xì)胞分化的最佳作用濃度;CFSE檢測(cè)硫代乙酰胺對(duì)BMSCs細(xì)胞分裂的影響。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TAA對(duì)細(xì)胞凋亡,周期的影響;Western Blot法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)的變化4.抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色對(duì)BMSCs分化的破骨細(xì)胞進(jìn)行特異性形態(tài)學(xué)染色5.Western Blot法檢測(cè)破骨細(xì)胞特異性蛋白表達(dá)的變化6.免疫熒光法檢測(cè)破骨細(xì)胞特異性蛋白表達(dá)的變化7.Fluo-3 AM熒光檢測(cè)BMSCs細(xì)胞內(nèi)鈣離子的變化8.電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)BMSCs骨代謝標(biāo)志物的變化結(jié)果1.在體外無菌分離并培養(yǎng)具有干細(xì)胞標(biāo)志物的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）,可以用于本次實(shí)驗(yàn)研究。2.CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:TAA能抑制BMSCs細(xì)胞增殖,并且呈劑量-時(shí)間依賴性;CFSE結(jié)果顯示TAA能抑... 

【文章來源】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

光鏡下觀察原代培養(yǎng)的BMSCs生長(zhǎng)形態(tài)

圖 2：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) BMSCs 表面 CD 分子注：a， b，c， d 分別是檢測(cè) CD90-FITC，CD29-PE，CD45-FITC，CD11b/c-PE 結(jié)果；Iso Con 即為相應(yīng) CD 分子的同型對(duì)照組；control 為未加任何一抗的空白對(duì)照組。（三）TAA 對(duì) BMSCs 細(xì)胞增殖活力的影響CCK-8 結(jié)果顯示，TAA 作用于細(xì)胞能抑制細(xì)胞的增殖，導(dǎo)致細(xì)胞存活率下降。較低濃度 TAA（0.5mg/mL，1mg/mL）作用細(xì)胞 24h 后，細(xì)胞存活率下降幅度較��；較高濃度 TAA（1.5 mg/mL，2mg/mL）作用細(xì)胞后導(dǎo)致存活率下降至50％；TAA 作用 72h 后細(xì)胞存活率達(dá)到穩(wěn)定平臺(tái)�？紤]到 TAA 對(duì)細(xì)胞的損傷作用，我們選擇 0.5 mg/mL，1mg/mL 作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)中 TAA 的給藥濃度。

圖 3 硫代乙酰胺對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響注：圖中以時(shí)間為橫坐標(biāo)，細(xì)胞活力（與對(duì)照組相比）為縱坐標(biāo)，實(shí)驗(yàn)分組中硫代乙胺的濃度分別為 0.5 mg/mL, 1 mg/mL, 1.5 mg/mL, 2mg/mL；設(shè)立空白對(duì)照組。（四）TAA 對(duì) BMSCs 細(xì)胞分裂的影響CFSE 結(jié)果顯示 TAA 濃度為 0.5 mg/mL，1 mg/mL 時(shí)細(xì)胞分裂指數(shù)分別為54.1%±1.5%和 51.8%±1.9%，與對(duì)照組(63.2%±3.3%)比較具有顯著差異（P＜0.0

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]骨關(guān)節(jié)病變及骨折患者圍術(shù)期骨代謝標(biāo)志物檢測(cè)及骨密度變化[J]. 李士紅,劉陽.  中國(guó)組織工程研究. 2016(35)
[2]肝纖維化動(dòng)物模型制備的常用方法及其MRI檢測(cè)的研究進(jìn)展[J]. 趙廣強(qiáng),張閩光.  醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志. 2015(03)
[3]Cytokines as biochemical markers for knee osteoarthritis[J]. Thomas Mabey,Sittisak Honsawek.  World Journal of Orthopedics. 2015(01)
[4]骶髂關(guān)節(jié)紊亂與腰椎間盤退變之間相關(guān)性的流行病學(xué)研究與生物力學(xué)分析[J]. 師寧寧,沈國(guó)權(quán),何水勇,郭汝寶.  中國(guó)骨傷. 2014(07)
[5]硫代乙酰胺誘導(dǎo)的斑馬魚急性肝損傷模型[J]. 齊玉娟,張靖溥.  藥物分析雜志. 2014(05)
[6]Protective effect of omeprazole on gastric mucosal of cirrhotic portal hypertension rats[J]. Wei Gao,Hai-Ying Li,Li-Xin Wang,Li-Jun Hao,Jian-Li Gao,Rong-Juan Zheng,Chun-Jiang Cai,Yan-Ling Si.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2014(05)
[7]骨質(zhì)疏松的發(fā)病機(jī)制與危險(xiǎn)因素[J]. 王寧,劉玉杰.  中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志. 2013(05)
[8]重組人骨保護(hù)素與重組核因子κb活化因子受體蛋白對(duì)破骨前體細(xì)胞分化的影響[J]. 熊琦,張里程,張立海,姚琦,唐佩福.  中國(guó)骨傷. 2013(04)
[9]RNAi:antiviral therapy against dengue virus[J]. Sobia Idrees,Usman A Ashfaq.  Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 2013(03)
[10]絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥患者血清β-Crosslaps、PINP和N-MID檢測(cè)的評(píng)價(jià)[J]. 歐萌萌,黃建榮.  標(biāo)記免疫分析與臨床. 2011(04)



本文編號(hào)：3065984