目的:在本實(shí)驗(yàn)室前期生物信息學(xué)和實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上,本研究通過在體外誘導(dǎo)分泌白細(xì)胞介素17的輔助性T（Interlukin-17 producing helper T,Th17）細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T（regulatory T,Treg）細(xì)胞,探討腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）及白細(xì)胞介素6（Interlukin-6,IL-6）等通過調(diào)控miR-34a和miR-31的表達(dá),繼而miRNAs引起Treg細(xì)胞中叉頭/翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3（Forkhead/winged helix transcription factor 3,Foxp3）的表達(dá)水平的變化,使得表達(dá)Foxp3的Treg細(xì)胞與表達(dá)維甲酸相關(guān)核孤兒受體γt（RAR-related orphan receptor gamma,RORγt）的Th17細(xì)胞間的比例失衡,進(jìn)一步導(dǎo)致以異常炎癥反應(yīng)為特征的自身免疫性疾病的發(fā)生。部分闡明在炎癥因子的作用下miRNAs導(dǎo)致Treg/Th17細(xì)胞失衡的機(jī)制有助于更深入地揭示一些自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制,為自身免疫性疾病的治療提供理論依據(jù)。方法:在以往生物信... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 自身免疫性疾病
        1.1.1 Treg細(xì)胞與自身免疫性疾病
        1.1.2 Th17細(xì)胞與自身免疫性疾病
        1.1.3 炎癥微環(huán)境與Treg/Th17比例失衡
    1.2 miRNA
        1.2.1 miRNA的生物合成與作用機(jī)制
        1.2.2 miRNA與免疫
        1.2.3 miRNA與自身免疫性疾病
    1.3 NF-κB及其信號通路
        1.3.1 NF-κB通路概述
        1.3.2 NF-κB與免疫
        1.3.3 NF-κB與自身免疫性疾病
    1.4 小結(jié)
第二章 本研究的目的、內(nèi)容、方法、實(shí)驗(yàn)方案以及意義
    2.1 研究目的
    2.2 研究內(nèi)容
    2.3 研究方法
    2.4 實(shí)驗(yàn)方案
        2.4.1 體外驗(yàn)證miR-34a和miR-31對Foxp3表達(dá)水平的調(diào)控
+細(xì)胞中miR-34a和miR-31的表達(dá)水平">        2.4.2 探討Foxp3⁺細(xì)胞中miR-34a和miR-31的表達(dá)水平
        2.4.3 IL-6、TNF-α 介導(dǎo)miR-34a和miR-31調(diào)控Foxp3的機(jī)制初探
    2.5 研究意義
第三章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與試劑
        3.1.2 主要儀器和耗材
        3.1.3 主要溶液配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法
        3.2.1 體外驗(yàn)證miR-34a和miR-31對Foxp3表達(dá)水平的調(diào)控
            3.2.1.1 相關(guān)質(zhì)粒圖譜及引物
            3.2.1.2 小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒重組質(zhì)粒MGP-31構(gòu)建
            3.2.1.3 小鼠慢病毒重組質(zhì)粒p LV-miR-31構(gòu)建
            3.2.1.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞
            3.2.1.5 qPCR檢測miR-34a、miR-31和Foxp3 mRNA水平
            3.2.1.6 Immunoblot技術(shù)檢測Foxp3蛋白水平
+細(xì)胞中miR-34a和miR-31的表達(dá)水平">        3.2.2 Foxp3⁺細(xì)胞中miR-34a和miR-31的表達(dá)水平
            3.2.2.1 體外誘導(dǎo)iTreg細(xì)胞
            3.2.2.2 qPCR檢測Foxp3 mRNA、miR-34a和miR-31的表達(dá)水平
+ EL4細(xì)胞">            3.2.2.3 體外Foxp3⁺ EL4細(xì)胞
            3.2.2.4 普通PCR檢測Foxp3基因水平，qPCR檢測Foxp3 mRNA、miR-34a和miR-31
        3.2.3 IL-6、TNF-α 介導(dǎo)miR-34a和miR-31調(diào)控Foxp3的機(jī)制初探
            3.2.3.1 體外誘導(dǎo)小鼠Th17細(xì)胞
            3.2.3.2 qPCR檢測miR-34a和miR-31的表達(dá)水平
+T和EL4細(xì)胞">            3.2.3.3 IL-6 及TNF-α 分別刺激小鼠CD4⁺T和EL4細(xì)胞
            3.2.3.4 qPCR檢測miR-34a和miR-31的表達(dá)水平
            3.2.3.5 IL-6 刺激Treg細(xì)胞
            3.2.3.6 流式細(xì)胞術(shù)鑒定Treg細(xì)胞
+ EL4細(xì)胞">            3.2.3.7 IL-6、TNF-α 及NF-κB抑制劑分別刺激Foxp3⁺ EL4細(xì)胞
            3.2.3.8 Immunoblot技術(shù)檢測NF-κB活性以及Foxp3表達(dá)水平
            3.2.3.9 qPCR檢測miR-34a和miR-31的表達(dá)水平
        3.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論
    4.1 體外驗(yàn)證miR-34a和miR-31對Foxp3表達(dá)水平的調(diào)控
        4.1.0 aMGP-31逆轉(zhuǎn)錄病毒重組質(zhì)粒構(gòu)建成功
        4.1.1 bpLV-miR-31慢病毒重組質(zhì)粒構(gòu)建成功
        4.1.2 miR-31抑制Foxp3 mRNA水平
        4.1.3 miR-34a和miR-31抑制Foxp3的蛋白水平
        4.1.4 小結(jié)
+細(xì)胞中miR-34a和miR-31的表達(dá)水平">    4.2 Foxp3⁺細(xì)胞中miR-34a和miR-31的表達(dá)水平
        4.2.1 iTreg細(xì)胞中Foxp3與miR-34a和miR-31的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)
+ EL4細(xì)胞中Foxp3與miR-34a和miR-31的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)">        4.2.2 Foxp3⁺ EL4細(xì)胞中Foxp3與miR-34a和miR-31的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)
        4.2.3 小結(jié)
    4.3 IL-6、TNF-α 介導(dǎo)miR-34a和miR-31調(diào)控Foxp3的機(jī)制初探
        4.3.1 Th17細(xì)胞中miR-34a和miR-31的表達(dá)水平上調(diào)
        4.3.2 IL-6 和TNF-α 上調(diào)miR-34a和miR-31的表達(dá)水平
        4.3.3 IL-6 和TNF-α 抑制Foxp3蛋白水平
        4.3.4 NF-κB參與miR-34a和miR-31對Foxp3表達(dá)的調(diào)控
        4.3.5 小結(jié)
    4.4 討論
第五章 主要結(jié)論與展望
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
綜述：小鼠Treg細(xì)胞治療自身免疫性疾病的實(shí)驗(yàn)室研究進(jìn)展
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章及參加的會議



本文編號：3054191