第一部分大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定、成骨誘導(dǎo)分化和USPIO標(biāo)記目的:通過體外法分離、培養(yǎng)、擴增、鑒定及成骨誘導(dǎo)分化BMSCs,并對擴增的BMSCs行USPIO標(biāo)記,觀察BMSCs的生物學(xué)特性及USPIO標(biāo)記后BMSCs的細(xì)胞活力。方法:1.在無菌條件下分離大鼠的股骨,采用全貼壁法培養(yǎng)、擴增BMSCs。2.通過流式細(xì)胞儀鑒定培養(yǎng)細(xì)胞的表面抗原,明確目的細(xì)胞的純度。3.對擴增的BMSCs行成骨誘導(dǎo)分化,并分別行堿性磷酸酶和茜素紅染色鑒定,觀察其成骨分化能力。4.擴增的BMSCs行PLL轉(zhuǎn)染的USPIO標(biāo)記,普魯士藍(lán)染色法驗證USPIO已成功轉(zhuǎn)染到BMSCs細(xì)胞內(nèi)。MTT法繪制標(biāo)記細(xì)胞的生長曲線,明確USPIO對BMSCs增殖能力的影響;臺盼藍(lán)拒染色法檢測標(biāo)記細(xì)胞的生物活性。結(jié)果:1.提取細(xì)胞在24h后形態(tài)大小不均一,多為類球形,部分貼壁;培養(yǎng)48h后,絕大部細(xì)胞貼壁生長,形態(tài)呈紡錘形或梭形。2.流式細(xì)胞儀抗原表型檢測結(jié)果示:培養(yǎng)細(xì)胞CD29(99.86%)、CD90(99.73%)陽性表達(dá),幾乎不表達(dá)CD34(6.48%)、CD45(0.94%),證明培養(yǎng)、擴增的細(xì)胞為BMSCs。3.BMSCs堿性磷酸酶染色后光鏡下可見細(xì)胞團(tuán)之間有灰黑色結(jié)節(jié);茜素紅染色后可見大片細(xì)胞紅染及細(xì)胞間有紅色礦化結(jié)節(jié)形成。4.USPIO標(biāo)記后的BMSCs胞內(nèi)可見淡黃色細(xì)小鐵顆粒;細(xì)胞普魯士藍(lán)染色后胞質(zhì)內(nèi)大部呈藍(lán)色。MTT法測得標(biāo)記細(xì)胞前2天增殖速度慢,第3天進(jìn)入增殖對數(shù)期,第4-5天為增殖平臺期。經(jīng)標(biāo)記后的細(xì)胞臺盼藍(lán)拒染率高達(dá)97%。結(jié)論:1.全貼壁培養(yǎng)法能夠成功培養(yǎng)、擴增合格的種子細(xì)胞。2.經(jīng)誘導(dǎo)后的BMSCs可以產(chǎn)生鈣結(jié)節(jié),證明其具有成骨分化能力。3.USPIO能夠高效的標(biāo)記BMSCs,且對其增殖能力及生物學(xué)特性無影響,可以有安全地進(jìn)行體外示蹤。第二部分大鼠骨質(zhì)疏松模型的構(gòu)建及鑒定目的:通過切除雌性大鼠雙側(cè)卵巢的方法來誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松模型并鑒定骨松造模是否成功。方法:1.切除雌性大鼠雙側(cè)卵巢。2.通過大鼠雌激素ELISA試劑盒檢測去勢大鼠雌激素水平及通過Micro-CT測定股骨頸相關(guān)骨性指標(biāo):骨體積分?jǐn)?shù)(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁數(shù)量(Tb.N)和骨小梁分離度(Tb.Sp)等指標(biāo)。結(jié)果:去勢大鼠的雌激素水平降低明顯;Micro-CT測定股骨頸骨性指標(biāo)發(fā)現(xiàn)Tb.Th、Tb.N、BV/TV降低,而Tb.Sp升高。結(jié)論:通過切除雌性大鼠雙側(cè)卵巢的方法可以成功地構(gòu)建大鼠骨質(zhì)疏松模型。第三部分BMSCs聯(lián)合PTH治療大鼠骨質(zhì)疏松的實驗研究目的:將USPIO標(biāo)記的BMSCs植入骨質(zhì)疏松大鼠的股骨頸內(nèi)并行MRI體外示蹤,證明目的細(xì)胞成功植入大鼠體內(nèi)。最后通過Micro-CT測定股骨頸骨性指標(biāo),觀察BMSCs與PTH對骨松大鼠的治療效果。方法:1.將50只雌性大鼠隨機分為5組,術(shù)后12周,A、B組大鼠不做干預(yù)處理,其中A組為正常對照組,B組為骨質(zhì)疏松空白對照組;C組(PTH干預(yù)組)按60μg/kg劑量背部皮下注射Rat PTH 1-34,隔日1次,連續(xù)注射12周;D組(BMSCs干預(yù)組)大鼠股骨頸注入0.5ml濃度為5×10~8個/ml的USPIO-BMSCs;E組(BMSCs聯(lián)合PTH干預(yù)組)在D組的BMSCs干預(yù)的基礎(chǔ)上同時施加PTH因素,注射濃度、劑量、頻率與C組一致。2.所有大鼠均在干預(yù)12周后處死,Micro-CT測量五組大鼠股骨頸的骨性指標(biāo),觀察成骨情況。結(jié)果:1.MRI示蹤發(fā)現(xiàn)USPIO標(biāo)記的BMSCs成功植入骨松大鼠股骨頸內(nèi)。2.聯(lián)合治療組與單獨治療組比較,骨小梁幾個參數(shù)明顯改善,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),但仍然達(dá)不到A組水平。結(jié)論:BMSCs聯(lián)合PTH治療局部骨質(zhì)疏松的效果優(yōu)于單獨使用治療的效果。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R580
【部分圖文】：

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文的旋渦狀細(xì)胞團(tuán)，以長梭形為主的細(xì)胞高倍鏡下可見粗細(xì)不一的細(xì)胞富，胞核清晰。7 天后細(xì)胞生長較 4 天時更為密集，融合成片狀，約的 80%-90%，呈旋渦狀同方向排列（見圖 1-1）。傳代培養(yǎng)的細(xì)胞較原快，12 h 后可全部貼壁，且細(xì)胞形態(tài)更為均一，3 天即可鋪占培養(yǎng)瓶試將細(xì)胞連續(xù)擴增至 19 代，其子代細(xì)胞形態(tài)仍呈梭形，且生長速度及降。

BMSCs 40× BMSCs 400×圖 1-1 光鏡不同放大倍數(shù)下的 BMSCsBMSCs 的成骨分化能力鑒定第三代 BMSCs 行成骨誘導(dǎo)分化約 10 d 后，堿性磷酸酶染色可見深藍(lán)色塊狀結(jié)節(jié)（如圖 1-2 所示）；誘導(dǎo)培養(yǎng)約 21d 后，行茜素紅染色后光鏡紅染礦化鈣結(jié)節(jié)（如圖 1-3 所示），兩種染色結(jié)果都證明所培養(yǎng)的 BM分化能力。

BMSCs 40× BMSCs 400×圖 1-1 光鏡不同放大倍數(shù)下的 BMSCsBMSCs 的成骨分化能力鑒定第三代 BMSCs 行成骨誘導(dǎo)分化約 10 d 后，堿性磷酸酶染色可見深藍(lán)色塊狀結(jié)節(jié)（如圖 1-2 所示）；誘導(dǎo)培養(yǎng)約 21d 后，行茜素紅染色后光鏡紅染礦化鈣結(jié)節(jié)（如圖 1-3 所示），兩種染色結(jié)果都證明所培養(yǎng)的 BM分化能力。
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 宋歌;呂月濤;狄林林;宗文納;陳伯旺;;早期腸內(nèi)營養(yǎng)對重癥肺炎大鼠免疫功能的影響分析[J];中國醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版);2017年01期

2 葉敏;陳達(dá)柔;陳宇中;杜少冰;杜展鑫;李玉鳳;唐珮瑜;楊昌山;朱曉琴;;右美托咪定后處理對大鼠肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J];臨床醫(yī)學(xué)工程;2017年02期

3 王雅樂;李文泉;姚鳳云;;黃連解毒湯對營養(yǎng)性肥胖大鼠的毒性研究[J];光明中醫(yī);2017年10期

4 關(guān)智宇;;三七總皂甙對骨折大鼠血管內(nèi)皮生長因子基因擴增及蛋白表達(dá)水平影響的研究[J];臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志;2017年51期

5 王帥;賈琦珍;陳根元;程勇;張玲;馬春暉;;小花棘豆中毒對大鼠下丘腦—垂體—卵巢軸α-甘露糖苷酶的影響[J];福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2016年01期

6 周挺;夏菁;李增攀;徐麗艷;韓文文;方建江;;法舒地爾對百草枯致大鼠肺纖維化的干預(yù)作用[J];浙江實用醫(yī)學(xué);2016年01期

7 王亞東;李東朋;郭德偉;宋及時;李紅偉;錢偉強;楊波;;富血小板血漿對創(chuàng)傷性顱腦損傷大鼠神經(jīng)功能的保護(hù)作用[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2016年05期

8 鄭國祥;于強;;白虎湯對全身炎癥反應(yīng)綜合征大鼠炎癥因子的影響[J];四川中醫(yī);2015年01期

9 符暉;王橋生;方志雄;劉雁;周斌;彭忠田;梁咸章;;辛伐他汀預(yù)處理對大鼠神經(jīng)源性肺水腫的作用及其機制[J];中國動脈硬化雜志;2015年10期

10 商明紅;何龍其;;西維來司鈉對大鼠腦出血保護(hù)作用機制的實驗研究[J];現(xiàn)代養(yǎng)生;2017年10期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉堃;NTRK1修飾的人外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植入帕金森病模型大鼠模型的效應(yīng)[D];山東大學(xué);2019年

2 范孟坡;前軟骨干細(xì)胞療法對膝關(guān)節(jié)炎大鼠模型的治療作用研究[D];山東大學(xué);2019年

3 賈磊;ERK-TRPV4通路在大鼠背根神經(jīng)節(jié)持續(xù)受壓致痛覺敏感中的作用機制研究[D];山東大學(xué);2019年

4 卞藝斐;馬齒莧對實驗性腸炎大鼠的保護(hù)作用及其機制研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

5 白方會;正天丸和川芎嗪對偏頭痛模型大鼠三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

6 頓晶晶;補腎中藥更康顆粒的藥效學(xué)及急性毒理實驗研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

7 穆道周;芍藥苷抗抑郁促動力作用的實驗研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

8 王躍旗;楓寥腸胃康對腹瀉型腸易激綜合征大鼠結(jié)腸動力及氯離子分泌的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2017年

9 王成書;Apelin改善RUPP大鼠模型妊娠結(jié)局的作用機制探討[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

10 李少源;耳甲區(qū)電刺激對CUMS模型大鼠抗抑郁效應(yīng)及ERK信號通路作用機制[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2018年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 金偉中;出生前尼古丁暴露對新生大鼠orexin A呼吸調(diào)節(jié)作用的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

2 馬逸超;Angiopoietin2經(jīng)PI3K/AKT途徑促心梗大鼠血管新生的信號通路研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2019年

3 賀曉鳴;木棉花的抗糖尿病作用及其主要成分在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2019年

4 臧樹成;miR-383在急性冷暴露誘導(dǎo)大鼠肝臟氧化應(yīng)激中的作用[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2019年

5 蘇本玉;Calpeptin對丙烯酰胺中毒大鼠微管損傷的干預(yù)作用及機制[D];山東大學(xué);2019年

6 孟祥蕾;“調(diào)神暢情三六九”針法對PD伴便秘大鼠血清及腦組織中CCK、VIP含量影響的研究[D];黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院;2019年

7 呂暢;山楂不同炮制品對高脂膳食誘導(dǎo)肥胖大鼠的預(yù)防作用研究[D];山東大學(xué);2019年

8 孫紅林;CD40siRNA下調(diào)c-Jun氨基末端激酶對EAM大鼠心肌細(xì)胞自噬的影響[D];山東大學(xué);2019年

9 劉子琳;人臍血單個核細(xì)胞及臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對大鼠腓腸肌失神經(jīng)損傷的治療作用及療效比較[D];山東大學(xué);2019年

10 宋其其;海馬CA1區(qū)βCaMKⅡ通過COX2-PGE2信號途徑調(diào)控大鼠神經(jīng)炎癥及抑郁癥狀的發(fā)生[D];山東大學(xué);2019年

本文編號：2891864