目的:糖尿病是一種復(fù)雜的、受多因素影響的慢性代謝性疾病,主要表現(xiàn)為持續(xù)的高血糖,而持續(xù)的高血糖又是加重糖尿病以及誘發(fā)各種并發(fā)癥的主要因素之一。晚期糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycation end products,AGEs)是指在長(zhǎng)期高糖環(huán)境下,蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸、脂類等大分子物質(zhì)上游離的氨基和果糖與葡萄糖等還原糖上的醛基或酮基,在無酶促的條件下,發(fā)生縮合、重排、分解和氧化等反應(yīng)而生成一類穩(wěn)定不可逆的終末產(chǎn)物。AGEs在組織器官內(nèi)逐漸蓄積,進(jìn)而誘導(dǎo)一系列氧化應(yīng)激等級(jí)聯(lián)反應(yīng),因而在糖尿病及其并發(fā)癥,如糖尿病腎病、動(dòng)脈粥樣硬化和血管病變等的發(fā)生發(fā)展中起重要致病作用。新近研究表明,AGEs對(duì)胰島β細(xì)胞具有直接的毒性作用,可以直接引起胰島β細(xì)胞凋亡,胰島素合成和分泌功能障礙,是誘發(fā)和加重糖尿病的重要因素之一,但其內(nèi)在機(jī)制還有待深入探討。白藜蘆醇(resveratrol,RSV),一種多酚類化合物,是花生、葡萄、桑果、虎杖等的活性成分,最早于1924年被發(fā)現(xiàn)。研究表明,RSV是一種天然的自由基清除劑和抗氧化劑,此外,還具有改善糖尿病,降低血糖的作用。其保護(hù)機(jī)制被認(rèn)為與抗氧化應(yīng)激、促進(jìn)胰島素分泌和提高胰島素敏感性等有關(guān)。但是RSV是否通過減少靶器官上AGEs的生成及其誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷,從而發(fā)揮保護(hù)作用未見報(bào)道。鑒于此,本研究將展開RSV對(duì)AGEs誘導(dǎo)的胰島損傷及其可能的保護(hù)作用機(jī)制研究,即,在胰島組織中RSV能否降低AGEs的蓄積以及RSV對(duì)AGEs誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激是否具有調(diào)節(jié)作用。方法:1.建立乙二醛-牛血清白蛋白的非酶糖基化反應(yīng)體系,氨基胍(Aminoguanidine,AG)為陽性對(duì)照,梯度濃度RSV為受試物,采用熒光比色法,在體外初步探討RSV對(duì)AGEs生成的抑制作用,為后續(xù)的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和依據(jù);2.以D-葡糖糖和胎牛血清為反應(yīng)物,37℃條件下避光反應(yīng)3周。制備能夠模擬糖尿病病人體內(nèi)AGEs的糖化血清(glycated serum,GS)。以大鼠胰島素瘤(INS-1)細(xì)胞為研究對(duì)象,并使用含有AGEs的GS構(gòu)建INS-1細(xì)胞損傷模型,在細(xì)胞水平上,探討不同劑量RSV對(duì)AGEs損傷INS-1細(xì)胞的保護(hù)作用并探討其抗氧化應(yīng)激作用機(jī)制;3.以C57BL/6J小鼠為研究對(duì)象,通過給予60%的高脂飼料飲食并腹腔注射鏈脲佐菌素構(gòu)建胰島素抵抗的2型糖尿病模型小鼠,二甲雙胍(Metformin,MET)為陽性對(duì)照,梯度濃度RSV為受試物,給予小鼠每天一次連續(xù)灌胃40天,在動(dòng)物整體水平上,考察RSV對(duì)2型糖尿病小鼠各項(xiàng)糖尿病相關(guān)生化指標(biāo)的改善,并進(jìn)一步探討RSV的抗氧化應(yīng)激保護(hù)作用機(jī)制。結(jié)果:1.在體外非酶糖基化體系中,在實(shí)驗(yàn)開始后第5天,RSV(500μM)組AGEs抑制率逐漸增強(qiáng),在第11天時(shí)其抑制率與AG陽性對(duì)照組相近,在第23天時(shí)達(dá)到了86.23%,明顯超過了AG陽性組。說明RSV能明顯抑制AGEs的生成,是一種較好的AGEs抑制劑;2.在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn),AGEs對(duì)INS-1細(xì)胞具有明顯生長(zhǎng)抑制作用,并能促進(jìn)INS-1細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)。25μM和50μM的RSV能顯著提高AGEs損傷的INS-1細(xì)胞的增殖率,顯著抑制AGEs誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng),表明了RSV對(duì)AGEs誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞損傷具有顯著的保護(hù)作用,其機(jī)制可能是RSV增強(qiáng)了INS-1細(xì)胞清除自由基的能力,提高了INS-1細(xì)胞的抗氧化能力;3.在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn),RSV可以有效降低糖尿病小鼠血糖,改善糖耐量和胰島素耐量,降低血脂、減輕胰島素抵抗;此外還可降低AGEs在胰腺組織中的蓄積,減輕胰腺組織損傷,促進(jìn)胰島素分泌。其保護(hù)性作用與減少糖尿病小鼠胰島中氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。結(jié)論:1.RSV在體外可以明顯裂解非酶促形成的AGEs,是一種較好的AGEs裂解劑;2.RSV對(duì)AGEs誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞損傷具有顯著的保護(hù)作用,作用機(jī)制可能是通過減少INS-1細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)實(shí)現(xiàn)的;3.RSV通過減少AGEs在胰腺組織中的蓄積,降低2型糖尿病小鼠胰島中氧化應(yīng)激反應(yīng),減少胰島β細(xì)胞損傷,改善胰島分泌功能,最終通過降低血糖,改善胰島素抵抗,改善糖耐量和胰島素耐量,而發(fā)揮對(duì)糖尿病小鼠的保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：江漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R587.1
【部分圖文】：

晚期糖基化終末產(chǎn)物的生化特性GEs 是一類結(jié)構(gòu)復(fù)雜、穩(wěn)定不可逆且呈高度異質(zhì)性的棕黃色化道的 AGEs 有二十多種，其中包括羧甲基賴氨酸[Nε-（Carb，CML]、羧乙基賴氨酸[Nε（-Carboxyethyl）lysine，CEL]、吡咯素（（Crosslines）和戊糖素（Pentosidine）等[9-13]。部分常見的 AGE分 AGEs 具有特征性的熒光，部分 AGEs 不具有熒光特性。因具有熒光特性的 AGEs，如戊糖素[11]。不具備熒光特性的 AGraline[14, 15]。雖然 AGEs 存在多種各結(jié)構(gòu)不相同的形式，但它們結(jié)構(gòu)形成，均可與蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)發(fā)生長(zhǎng)期穩(wěn)定的結(jié)合圖 1-1AGEs 形成的途徑之一

與模型組大鼠相比，發(fā)現(xiàn)正常大鼠體內(nèi)丙二醛水平、血糖和RAGE均顯著降低，總抗氧化能力和胰島素水平顯著提高，說明 RSV 能夠提高糖大鼠抗氧化能力，減少氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生，下調(diào) RAGE 的表達(dá)，從而起護(hù)作用[98]。但是關(guān)于 RSV 對(duì) AGEs 誘導(dǎo)的靶向胰島 β 細(xì)胞損傷是否具有保用，未見相關(guān)報(bào)道。

5 88.59±0.08 1.51±0.27 0.35±0.44 4.34±0.7 83.08±0.13 1.11±0.16 0.35±0.28 24.08±09 78.57±0.07 1.65±0.36 1.78±0.25 52.88±011 68.6±0.06 2.16±0.34 0.87±0.37 61.87±013 68.72±0.06 0.43±0.21 8.13±1.07 76.6±0.15 70.41±0.14 7.31±0.27 7.59±2.49 81.5±0.17 66.47±0.89 0.82±0.52 8.73±0.69 81.43±019 68.04±0.12 10.83±3.22 15.59±1.16 82.48±021 67.83±0.11 4.79±1.13 10.25±1.94 83.93±023 68.73±0.16 6.81±0.64 15.24±.69 86.23-025 66.07±0.23 1.18±0.53 3.1-1.41 81.24±027 68.89±0.09 11.62±1.1 15.19±0.53 83.39±0
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄭國華;陳錦秀;葛莉;于紅虹;張文霞;鄭良樸;;白藜蘆醇對(duì)不同飼料喂養(yǎng)小鼠血脂水平的影響[J];中國自然醫(yī)學(xué)雜志;2008年05期

2 許良元;劉勇;張弓;孔曉玲;吳路生;;晚期糖基化終末產(chǎn)物檢測(cè)方法的研究[J];傳感器與微系統(tǒng);2008年10期

3 黃達(dá)明;張志才;連賓;崔鳳杰;趙杰文;;22種中藥醇提物抑制蛋白質(zhì)非酶糖基化作用的研究[J];食品科學(xué);2007年05期

4 徐群;劉正湘;;糖基化終末產(chǎn)物在心血管病變中的作用機(jī)制[J];實(shí)用心腦肺血管病雜志;2006年08期

5 姚煜;田濤;南克俊;;白藜蘆醇抗衰老免疫機(jī)制的研究[J];中藥材;2006年05期

6 歐陽昌漢;范巧;吳基良;;白藜蘆醇對(duì)雌性小鼠化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用[J];時(shí)珍國醫(yī)國藥;2006年05期

7 王志強(qiáng),趙艷;白藜蘆醇抗蛋白質(zhì)非酶糖基化和抗氧化活性研究[J];首都醫(yī)藥;2004年20期

8 高路,袁育康,呂卓人,范桂香,王軍陽,任會(huì)勛;白藜蘆醇的免疫調(diào)節(jié)作用[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年02期

9 高巖;高級(jí)糖化終產(chǎn)物(AGEs)形成及其致病機(jī)理[J];中國分子心臟病學(xué)雜志;2002年03期

10 戎健,陳文緣,邱鴻鑫,王立兵,汪恕萍,曾昭淳,楊致邦;血紅蛋白晚期糖基化終末產(chǎn)物的酶聯(lián)免疫吸附分析法檢測(cè)[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2000年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 喻佩;美拉德反應(yīng)中羧甲基賴氨酸和羧乙基賴氨酸的形成及調(diào)控機(jī)理的研究[D];華南理工大學(xué);2016年

2 張玉鳳;SIRT1和HMGB1在AEGs誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用研究[D];武漢大學(xué);2016年

3 王猛;TRB3在糖基化終末產(chǎn)物誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞氧化損傷和凋亡中的作用及機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

4 朱云霞;高級(jí)糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）對(duì)糖尿病胰島β細(xì)胞損傷的作用研究[D];南京師范大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2861097