目的:比較類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)患者與高危人群及健康人群的外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中miRNA-16,miRNA-150和miRNA-155表達(dá)水平的差異,分析患者miRNA-16,miRNA-150和miRNA-155表達(dá)水平與其抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(CCP),類風(fēng)濕因子(RF),C-反應(yīng)蛋白(CRP),紅細(xì)胞沉降率(ESR)的結(jié)果是否存在相關(guān)性,初步探索miRNA-16,miRNA-150和miRNA-155在RA中的作用機(jī)制,為RA的診斷提供可靠的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。方法:選取符合類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者71例,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎高危人群(EULAR評(píng)分小于6分者)46例,健康對(duì)照人群40例作為對(duì)照組,取空腹外周血2ml,應(yīng)用差速密度梯度離心法分離得到外周血單個(gè)核細(xì)胞后再提取總RNA。對(duì)得到的總RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到cDNA,然后應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time PCR)技術(shù)檢測(cè)miRNA-16,miRNA-150和miRNA-155的含量。與常規(guī)臨床診斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)CCP,RF,CRP,ESR的結(jié)果進(jìn)行比較,進(jìn)一步分析miRNA-16,miRNA-150和miRNA-155與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的關(guān)系。構(gòu)建受試者工作特征曲線(ROC曲線),通過比較曲線下面積(area under the curve,AUC)分析miRNA-16,miRNA-150和miRNA-155及三者的聯(lián)合檢測(cè)診斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的價(jià)值。結(jié)果:1.RA患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中的miRNA-16表達(dá)量與其CCP,RF,CRP,ESR的結(jié)果正相關(guān)(p0.05);miRNA-150的表達(dá)量也與其CCP,RF,CRP,ESR的結(jié)果正相關(guān)(p0.05);而miRNA-155的表達(dá)量與CCP,RF,CRP的結(jié)果正相關(guān)(p0.05),與ESR無相關(guān)性(p0.05)。2.高危人群組外周血單個(gè)核細(xì)胞中的miRNA-16表達(dá)量與其CCP,RF的結(jié)果正相關(guān)(p0.05),與CRP和ESR的結(jié)果不相關(guān)性(p0.05);mi RNA-150的表達(dá)量與其CCP結(jié)果正相關(guān)(p0.05),與RF,CRP,ESR的結(jié)果不相關(guān)(p0.05);而miRNA-155表達(dá)量與其CCP,RF,CRP,ESR的結(jié)果不相關(guān)(p0.05)。3.外周血單個(gè)核細(xì)胞中的miRNA-16表達(dá)量在RA患者和健康對(duì)照組,以及高危人群和健康對(duì)照組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),在RA患者與高危人群無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);miRNA-150的表達(dá)量在RA患者和健康對(duì)照組,以及高危人群和健康對(duì)照組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),在RA患者與高危人群之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);miRNA-155的表達(dá)量在RA組與高危組,RA組和健康對(duì)照組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),在高危人群和健康對(duì)照組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。4.在EULAR評(píng)分的基礎(chǔ)上,構(gòu)建的ROC曲線,miRNA-16,miRNA-150和miRNA-155以及三者聯(lián)合,應(yīng)用于診斷RA時(shí),AUC分別為0.662,0.650,0.544和0.814,靈敏度分別為67.6%,70.4%,64.3%和82.9%,特異性分別為54.5%,51.7%,53.8%和65.5%。.結(jié)論:1.mi RNA-16、mi RNA-150和miRNA-155在RA患者及RA高危組PBMCs中表達(dá)升高,提示miRNA-16、miRNA-150和miRNA-155可能與RA發(fā)病有關(guān)。2.RA患者組的miRNA-16、miRNA-150和miRNA-155與CCP,RF,CRP是正相關(guān),提示三者可能與RA的活動(dòng)程度相關(guān)。3.在EULAR評(píng)分的基礎(chǔ)上,mi RNA-16,mi RNA-150和miRNA-155聯(lián)合應(yīng)用于診斷RA相較于三者的單獨(dú)應(yīng)用具有更好的診斷價(jià)值。
【學(xué)位單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R593.22
【部分圖文】：

⑴ 起始模板變性反應(yīng)（1 個(gè)循環(huán)）：95℃ 15 分鐘⑵ 高富集低豐度目標(biāo) miRNA，無需收集熒光信號(hào)（5 個(gè)循環(huán)）：94℃ 20 秒62℃ 30 秒72℃ 34 秒⑶PCR 循環(huán)中模板變型（40 個(gè)循環(huán)）:94℃ 20 秒⑷退火延伸（40 個(gè)循環(huán)）：72℃ 34 秒⑸為了能夠觀察到擴(kuò)增曲線是否出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，所以要對(duì)擴(kuò)增曲線進(jìn)行分析，特別需要注意的是以下兩點(diǎn)：首先，熔解曲線的波峰有且只有一個(gè)；再次，不同樣本檢測(cè)同一個(gè)目的 miRNA，該 miRNA 的熔解曲線的峰值所對(duì)應(yīng)的溫度必須為同一溫度。每個(gè)樣本應(yīng)做 3 個(gè)復(fù)孔，共計(jì) 4 孔，其中 U6 作為內(nèi)參基因檢測(cè) miRNA-16，miRNA-150 和 miRNA-155 的 Ct 值。

miRNA-16熔解曲線

miRNA-150 和 miRNA-155 在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)蘭州大學(xué)碩士論文 炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)及臨床相關(guān)性研究圖 3.2 miRNA-16 熔解曲線
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2 劉琦;馬平川;林婉君;朱穎軍;;子宮內(nèi)膜異位癥間質(zhì)細(xì)胞中miRNA-150的表達(dá)及其對(duì)CXCR4的影響[J];實(shí)用婦產(chǎn)科雜志;2017年06期

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1 李春蒔;miRNA-16，miRNA-150和miRNA-155在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)及臨床相關(guān)性研究[D];蘭州大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2851515