發(fā)布時(shí)間：2020-10-14 16:31

　　 目的 1.體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)觀察高糖環(huán)境下,足細(xì)胞極性標(biāo)志物desmin、nephrin的表達(dá)變化,探討高糖對(duì)足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的影響;2.體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)觀察足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過程中整合素連接激酶(integrin linked kinase,ILK)的表達(dá)變化,ILK阻斷后足細(xì)胞EMT的抑制情況,探討ILK在足細(xì)胞EMT中的作用;3.觀察中藥單體大黃素對(duì)高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞EMT及ILK表達(dá)變化的影響,探討大黃素治療糖尿病腎病的機(jī)制。方法細(xì)胞試驗(yàn):將條件性永生的小鼠足細(xì)胞隨機(jī)分為高糖組(HG)、正常對(duì)照組(NG)、HG+大黃素組30ug/ml,高糖刺激+ILK阻斷組(QLT0267)(1umol/l)干預(yù)組。采用免疫熒光、Western blot、real time RT-PCR檢測(cè)ILK、nephrin和desmin的表達(dá)變化,各項(xiàng)指標(biāo)間作相關(guān)分析。動(dòng)物試驗(yàn):雄性健康SD大鼠,STZ造模成功后隨機(jī)分為下列幾組:①DM組:予等量生理鹽水灌胃;②DM+大黃素組:予灌胃大黃素20 mg·kg-1·d-1;③DM+ILK阻斷組:腹腔注射QLT0267劑量10mg·kg-1·w-1;④正常對(duì)照組:每日給予等量生理鹽水。用藥12周取腎組織,免疫組化、Western blot及real time RT-PCR等方法檢測(cè)大足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化標(biāo)志物nephrin、desmin及ILK的表達(dá)變化,與大鼠生化指標(biāo)及尿ACR做相關(guān)分析。結(jié)果 1.和正常糖組比較,高糖組足細(xì)胞desmin表達(dá)增加,nephrin表達(dá)減少,高糖組足細(xì)胞發(fā)生EMT;和正常對(duì)照組比較,DM組腎臟足細(xì)胞desmin表達(dá)增加,nephrin表達(dá)減少,DM鼠足細(xì)胞發(fā)生EMT,尿ACR增高。2.高糖誘導(dǎo)EMT過程中ILK表達(dá)增加,阻斷ILK后高糖誘導(dǎo)EMT作用減弱;DM鼠腎臟足細(xì)胞ILK表達(dá)增加,ILK阻斷后足細(xì)胞EMT減弱,尿ACR減低。3.大黃素可減輕高糖誘導(dǎo)的EMT,同時(shí)使ILK表達(dá)減少;大黃素可使DM鼠足細(xì)胞EMT減輕,同時(shí)ILK表達(dá)減少,尿ACR減低。結(jié)論 1.高糖可誘導(dǎo)足細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)分化;糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)分化,尿蛋白增加。2.高糖通過調(diào)節(jié)ILK信號(hào)通路誘導(dǎo)足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化。3.大黃素通過阻斷ILK信號(hào)通路抑制高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化,減少蛋白尿。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R587.2;R692.9
【部分圖文】：

整合素連接激酶在早期糖尿病腎病足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用及大黃素對(duì)其的干預(yù) 結(jié) 果結(jié) 果4.1 足細(xì)胞極性標(biāo)志物 desmin 的免疫熒光檢查結(jié)果和正常對(duì)照組足細(xì)胞比較，30mmol/L 高糖環(huán)境下生長 72 小時(shí)，足細(xì)胞 desmin表達(dá)明顯增高（P=0.041）；高糖環(huán)境下同時(shí)加入 30ug/ml 大黃素后 desmin 表達(dá)量較高糖組明顯減少（P=0.033）；高糖環(huán)境下同時(shí)加入 QLT0267 阻斷 ILK 信號(hào)通路后 desmin表達(dá)量較高糖組明顯減少（P=0.025）。（見圖 1）

果 整合素連接激酶在早期糖尿病腎病足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用及大黃素對(duì)其的激的同時(shí)加入 30ug/ml 大黃素培養(yǎng) 72 小時(shí)，nephrin 蛋白表達(dá)較高糖組增P=0.034），desmin、ILK 蛋白表達(dá)較高糖組減少（P=0.044,0.034），說明大黃素可制高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，抑制 ILK 的表達(dá)。在高糖刺激的同時(shí)加入 ILK 受體組（QLT0267）1umol/l 培養(yǎng) 72 小時(shí)，nephrin 蛋白表達(dá)較高糖組增加（P=0.038smin 蛋白表達(dá)較高糖組減少（P=0.034），ILK 受體阻斷后本組 ILK 表達(dá)與高糖組異（P=0.18）（圖 2）。相關(guān)分析顯示 ILK 與 desmin 成正相關(guān)，與 nephrin 成負(fù)相此在蛋白水平證明高糖可以誘導(dǎo)足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，同時(shí)伴有 ILK 表達(dá)增加，大黃以減弱高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，減少 ILK 的表達(dá)。阻斷 ILK 可以減弱高糖誘足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化。大黃素通過阻斷 ILK 信號(hào)通路抑制高糖誘導(dǎo)的 EMT。

real time RT-PCR 結(jié)果顯示, 與正常對(duì)照組相比較，30mmol/L 的高糖刺激 72 小時(shí)足細(xì)胞 nephrin mRNA 表達(dá)明顯下降（P=0.034），desmin、ILK mRNA 表達(dá)明顯增多（P=0.041），說明高糖可以誘導(dǎo)足細(xì)胞 EMT，同時(shí)伴有 ILK 表達(dá)增加。在高糖刺激的同時(shí)加入30ug/ml大黃素培養(yǎng)72小時(shí)，nephrin mRNA表達(dá)較高糖組增加（P=0.038），desmin、ILK mRNA 表達(dá)較高糖組減少（P=0.020,0.031），說明大黃素可以抑制高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，抑制 ILK 的表達(dá)。在高糖刺激的同時(shí)加入 ILK 受體阻斷組（QLT0267）1umol/l 培養(yǎng) 72 小時(shí)，nephrin mRNA 表達(dá)較高糖組增加（P=0.038），desminmRNA 表達(dá)較高糖組減少（P=0.022），ILK 受體阻斷后本組 ILK 表達(dá)與高糖組無差異（P=0.235）（圖 3）。相關(guān)分析顯示 ILK 與 desmin 成正相關(guān)，與 nephrin 成負(fù)相關(guān)。由此在基因水平證明高糖可以誘導(dǎo)足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，同時(shí)伴有 ILK 表達(dá)增加，大黃素可以減弱高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，抑制 ILK 的表達(dá)。阻斷 ILK 可以減弱高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化。大黃素通過阻斷 ILK 信號(hào)通路抑制高糖誘導(dǎo)的 EMT。
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 陳廷芳;陳明;秦建華;王明勇;;轉(zhuǎn)化生長因子β1/整合素連接激酶信號(hào)通路在大鼠腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用及大黃素對(duì)其的干預(yù)效應(yīng)[J];中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào);2009年01期

本文編號(hào)：2840910