目的驗(yàn)證白花鬼針草花粉變應(yīng)原的致敏性,分離純化其花粉變應(yīng)原,分別建立各純化變應(yīng)原過(guò)敏性哮喘及鼻炎模型并用葎草花粉粗提液致敏組作為對(duì)照,驗(yàn)證模型建立的成功與否,比較各組模型之間過(guò)敏反應(yīng)程度,分析各純化變應(yīng)原的致敏性。方法采集新鮮白花鬼針草花粉,液氮研磨提取白花鬼針草花粉粗蛋白及律草花粉粗蛋白,離子交換層析法純化百花鬼針草花粉粗蛋白,十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)及免疫印跡法(Western-blotting)驗(yàn)證花粉粗提液變應(yīng)原及純化變應(yīng)原的免疫原性。分別建立白花鬼針草花粉粗蛋白和純化蛋白及葎草花粉粗蛋白小鼠過(guò)敏性哮喘模型,比較各組之間過(guò)敏性哮喘及過(guò)敏性鼻炎的癥狀、氣道高反應(yīng)性、血清特異性IgE、IgG(sIgE、sIgG),脾臟細(xì)胞因子白介素4及干擾素Y (IL-4、INF-γ)水平、肺組織和鼻粘膜病理學(xué)和組織學(xué)改變來(lái)評(píng)估白花鬼針草花粉的變應(yīng)原性。結(jié)果1.SDS-PAGE結(jié)果顯示,在120kDa到12.5kDa之間廣泛分布了20余條蛋白條帶。其中主帶7條,其中分子量為12kDa和12.5kDa的條帶蛋白含量最多,余下的范圍內(nèi)還還有約10余條次帶。2.westen blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn)白花鬼針草花粉變應(yīng)原的致敏性較強(qiáng),與花粉過(guò)敏患者血清IgE結(jié)合能力較大。離子交換層析出6類(lèi)主要變應(yīng)原蛋白,其分子質(zhì)量分別為70kDa、65kDa、54kDa、49kDa、39kDa、33kDa。3、小鼠各動(dòng)物模型組較空白對(duì)照組氣道高反應(yīng)性、血清sIgE、sIgG,脾臟細(xì)胞因子IL-4、INF-γ水平均顯著增高,各模型組肺組織和鼻粘膜石蠟切片蘇木精-伊紅染色(H＆E)示其較空白對(duì)照組炎癥改變明顯,且百花鬼針草花粉粗蛋白及純化蛋白致敏組較葎草花粉粗蛋白致敏組各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)明顯差異p0.05。結(jié)論白花鬼針草花粉變應(yīng)原有較強(qiáng)的致敏性,其花粉粗提液和純化變應(yīng)原均能成功建立小鼠過(guò)敏性哮喘及鼻炎模型。為白花鬼針草花粉過(guò)敏性急病的診斷和治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類(lèi)】：R593.1
【部分圖文】：

綜合各組小鼠情況評(píng)分比較，并行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析ｗ。??（十六）數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析??計(jì)量資料均用＾＋ＳＤ表示，結(jié)果采用ＳＰＳＳ統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，??各均數(shù)間兩兩比較時(shí)采用ｔ檢驗(yàn)，Ｐ〈０．?０５差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Ｐ〈０．?０１為差異有??明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)學(xué)意義，Ｐ＞〇．?０５差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。??實(shí)驗(yàn)結(jié)果??一、白花鬼針草花朵及花粉觀察??左側(cè)為花期中的白花鬼針草，右側(cè)為１００Ｘ光學(xué)顯微鏡下堿性復(fù)紅染色后的?＊??白花鬼針草花粉，新鮮的花粉粒呈球狀，表面有毛刺樣凸起，伴有新鮮脂質(zhì)沉積??于花粉粒表面。??

、白花鬼針草花粉變應(yīng)原離子交換層祈??將已用ＤＥ－５２離子交換層析緩沖液充分透析白花鬼針草花粉粗提液上柱。??結(jié)果顯示粗提液有６個(gè)主蛋白峰，如下圖所示（圖３）。??？Ｍｔ??ｍ??ｍ??ＭＭ?ｍ￥?ｗ?ｔｖ？?ｍ??圖３白花鬼針草花粉離子交換層析圖??注：１－６分別為白花鬼針草的純化蛋白峰??四、白花鬼針草巧紛粗提液及純化液ＳＤＳ－ＰＡ化及ＷＢ檢測(cè)??集各峰的樣品進(jìn)斤Ｓ胳－ＰＡＧＥ，結(jié)果如圖４．?１。分析表明，離子交換層析后??蛋白主要分布在２峰、３峰、４峰。Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ結(jié)果顯示主要變應(yīng)原組分??在第在１到６峰中均有分布，與患者血清結(jié)合陽(yáng)性條帶約６條，分子量分別為??１５??

陰性對(duì)照組結(jié)果示：在?３、４?峰?７０?ｋＤａ??帶處有弱顯色（圖４．?３），結(jié)果表明白花鬼針草花粉粗提液及純化蛋白均具有較強(qiáng)??的致敏性，其中純化蛋白２－４峰免疫原性較接近。??ｋＤａ?Ｍ?１?２?３?４?５?６?Ｍ?ＣＰ??麵誦??斯幽瞧帽??１５?戶(hù)潘?‘＊‘；、．襄讀??化?：遊與扣？?／．?‘泉＇獨(dú)??圖４．１白花鬼針草花粉粗提液離子交換層析后各峰液的甜Ｓ－ＰＡＧＥ??注：Ｍ：為ｍａｋｅｒ，?１－６分別為離子交換層祈的６峰蛋白，ＧＰ為白花鬼針草花粉粗提液??ｋＤａ?Ｍ?１?２?３?４?５?６?Ｍ?ＣＰ??？?Ｖ?■’與叫．Ｓ皆Ｉ．巧．??圖４．?２白花鬼針草花粉粗蛋白和離子交換層析蛋白ＷＢ結(jié)果??注：Ｍ：為ｍａｋｅｒ，１－６分別為離子交換層析的６峰蛋白，ＣＰ為白花鬼針草花紛粗提液??１６??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蔣聰利;肖小軍;馬莉;張昕昕;劉志剛;;軟葉針葵花粉疫苗治療小鼠過(guò)敏性鼻炎的效果和機(jī)制[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2014年02期

2 李瑩;肖小軍;柴文戍;謝水祥;何韶衡;楊平常;劉志剛;;葎草花粉主要過(guò)敏原的分離鑒定與純化[J];江西師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2014年01期

3 陳建中;葛水蓮;肖玉菲;;菊科植物鬼針草浸提物抑菌活性研究[J];北方園藝;2012年21期

4 吳媛媛;孫秀珍;李滿(mǎn)祥;劉昀;王貴佐;盧家美;;重組葎草花粉主要變應(yīng)原免疫特性研究[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2012年10期

5 李巧蘭;黨博;褚代芳;吳愷;侯杰軍;薛會(huì)芳;張雪然;;鬼針草煎液對(duì)DM大鼠模型血糖水平及肝HK、血清FFA含量影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2012年09期

6 黃桂紅;鄧航;付翔;童東錫;廖曾珍;鄒勇;;鬼針草醇提物對(duì)糖尿病小鼠糖耐量及胸腺、脾臟指數(shù)的影響[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2012年08期

7 陳志云;梁水鳳;李東文;馮卓森;李偉華;彭長(zhǎng)連;田興山;周先葉;;假臭草等12種植物對(duì)白花鬼針草幼苗的化感作用[J];熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào);2011年05期

8 田興山;岳茂峰;馮莉;楊彩宏;楊紅梅;;外來(lái)入侵雜草白花鬼針草的特征特性[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年05期

9 黃川鋒;馬瑜紅;周新;李玲;郝海鷗;;鬼針草提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血脂和NO及NOS的影響[J];中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用;2009年17期

10 姚敏;;熱帶植物花粉過(guò)敏原的研究進(jìn)展[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2009年07期

本文編號(hào)：2836269