目的:觀察反油酸暴露致人脂肪細胞發(fā)生胰島素抵抗情況,并探討內質網應激在其中的作用。研究方法:體外培養(yǎng)人脂肪間質干細胞,誘導分化為成熟脂肪細胞。使其暴露于100μmol/L的反油酸(EA)及其同分異構體油酸(OA)24h。Western blot方法檢測胰島素受體底物-1的絲氨酸蛋白表達水平及葡萄糖轉運蛋白-4的表達量。透射電鏡下觀察人成熟脂肪細胞超微結構,Western blot實驗檢測內質網應激相關蛋白(免疫球蛋白重鏈結合蛋白、肌醇需求激酶-1α、c-Jun氨基末端激酶)的表達。脂肪細胞事先于內質網應激抑制劑4-苯丁酸鈉(4-PBA)中孵育2h,再使其暴露于反油酸(EA)24h,提取細胞總蛋白,采用Western blot方法再次檢測內質網應激相關蛋白以及胰島素受體底物-1的絲氨酸蛋白的表達水平。結果:人成熟脂肪細胞暴露于100μmol/L的反油酸(EA)及其同分異構體油酸(OA)24h后發(fā)現,100μmol/L EA暴露組的胰島素受體底物-1的絲氨酸的磷酸化比例明顯高于載體(1‰DMSO)組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。通過檢測葡萄糖轉運蛋白-4,結果表明100μmol/L EA暴露對人成熟脂肪細胞的葡萄糖轉運能力無影響(P0.05)。透射電鏡下可見100μmol/L EA暴露組的人成熟脂肪細胞內質網發(fā)生擴張,局部擴張成池。與載體組相比,100μmol/L OA暴露未造成內質網應激相關蛋白表達發(fā)生明顯差異;而100μmol/L EA暴露致使內質網應激相關蛋白的表達有明顯差異且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。內質網應激抑制劑4-苯丁酸鈉(4-PBA)干預后,與EA暴露組相比,EA+4PBA暴露組的內質網應激相關蛋白表達水平均有所下調(P0.05),胰島素受體底物-1的絲氨酸蛋白磷酸化比例也降低(P0.05),差異具有統(tǒng)計學意義。結論:反油酸暴露致人成熟脂肪細胞發(fā)生胰島素抵抗,這可能是由內質網應激介導的。
【學位單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R589.2
【部分圖文】：

中國醫(yī)科大學碩士學位論文3 結果脂肪細胞暴露于 EA 和 OA 的鏡下表現圖 1 所示：人脂肪間質干細胞培養(yǎng)初期呈細長梭形狀散亂分布如圖 1A導分化為人成熟脂肪細胞后出現較大脂滴，排列緊密如圖 1B 所示；細理 24h 后，不論是空白對照組（blank）、載體組（vehicle）、OA 暴露組露組，人成熟脂肪細胞形態(tài)仍未發(fā)生明顯改變，細胞形態(tài)依然完整，，狀態(tài)良好。

A、OA 暴露對人脂肪細胞胰島素受體底物-1 蛋白表達F12，vehicle- 1‰DMSO，OA- 100μmol/L OA，EA-100μ**P＜0.01。暴露對人成熟脂肪細胞葡萄糖轉運能力的提示，人脂肪細胞暴露于 100μmol/L EA 時，接下來我們進一步觀察是否對葡萄糖轉運蛋白示 EA 暴露組與 vehicle 組相比 GLUT-4 蛋白

2 EA、OA 暴露對人脂肪細胞胰島素受體底物-1 蛋白表達的變/F12，vehicle- 1‰DMSO，OA- 100μmol/L OA，EA-100μmol/L5，**P＜0.01。 暴露對人成熟脂肪細胞葡萄糖轉運能力的影果提示，人脂肪細胞暴露于 100μmol/L EA 時，IRS-，接下來我們進一步觀察是否對葡萄糖轉運蛋白 GLU 所示 EA 暴露組與 vehicle 組相比 GLUT-4 蛋白表達
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本文編號：2835137