目的:觀察反油酸暴露致人脂肪細(xì)胞發(fā)生胰島素抵抗情況,并探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在其中的作用。研究方法:體外培養(yǎng)人脂肪間質(zhì)干細(xì)胞,誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞。使其暴露于100μmol/L的反油酸(EA)及其同分異構(gòu)體油酸(OA)24h。Western blot方法檢測胰島素受體底物-1的絲氨酸蛋白表達(dá)水平及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-4的表達(dá)量。透射電鏡下觀察人成熟脂肪細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),Western blot實驗檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白(免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白、肌醇需求激酶-1α、c-Jun氨基末端激酶)的表達(dá)。脂肪細(xì)胞事先于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑4-苯丁酸鈉(4-PBA)中孵育2h,再使其暴露于反油酸(EA)24h,提取細(xì)胞總蛋白,采用Western blot方法再次檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白以及胰島素受體底物-1的絲氨酸蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:人成熟脂肪細(xì)胞暴露于100μmol/L的反油酸(EA)及其同分異構(gòu)體油酸(OA)24h后發(fā)現(xiàn),100μmol/L EA暴露組的胰島素受體底物-1的絲氨酸的磷酸化比例明顯高于載體(1‰DMSO)組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。通過檢測葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-4,結(jié)果表明100μmol/L EA暴露對人成熟脂肪細(xì)胞的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)能力無影響(P0.05)。透射電鏡下可見100μmol/L EA暴露組的人成熟脂肪細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生擴(kuò)張,局部擴(kuò)張成池。與載體組相比,100μmol/L OA暴露未造成內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)發(fā)生明顯差異;而100μmol/L EA暴露致使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的表達(dá)有明顯差異且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑4-苯丁酸鈉(4-PBA)干預(yù)后,與EA暴露組相比,EA+4PBA暴露組的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)水平均有所下調(diào)(P0.05),胰島素受體底物-1的絲氨酸蛋白磷酸化比例也降低(P0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:反油酸暴露致人成熟脂肪細(xì)胞發(fā)生胰島素抵抗,這可能是由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R589.2
【部分圖文】：

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 結(jié)果脂肪細(xì)胞暴露于 EA 和 OA 的鏡下表現(xiàn)圖 1 所示：人脂肪間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)初期呈細(xì)長梭形狀散亂分布如圖 1A導(dǎo)分化為人成熟脂肪細(xì)胞后出現(xiàn)較大脂滴，排列緊密如圖 1B 所示；細(xì)理 24h 后，不論是空白對照組（blank）、載體組（vehicle）、OA 暴露組露組，人成熟脂肪細(xì)胞形態(tài)仍未發(fā)生明顯改變，細(xì)胞形態(tài)依然完整，，狀態(tài)良好。

A、OA 暴露對人脂肪細(xì)胞胰島素受體底物-1 蛋白表達(dá)F12，vehicle- 1‰DMSO，OA- 100μmol/L OA，EA-100μ**P＜0.01。暴露對人成熟脂肪細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)能力的提示，人脂肪細(xì)胞暴露于 100μmol/L EA 時，接下來我們進(jìn)一步觀察是否對葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白示 EA 暴露組與 vehicle 組相比 GLUT-4 蛋白

2 EA、OA 暴露對人脂肪細(xì)胞胰島素受體底物-1 蛋白表達(dá)的變/F12，vehicle- 1‰DMSO，OA- 100μmol/L OA，EA-100μmol/L5，**P＜0.01。 暴露對人成熟脂肪細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)能力的影果提示，人脂肪細(xì)胞暴露于 100μmol/L EA 時，IRS-，接下來我們進(jìn)一步觀察是否對葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 GLU 所示 EA 暴露組與 vehicle 組相比 GLUT-4 蛋白表達(dá)
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本文編號：2835137