目的:皮膚橋蛋白(Dermatopontin,DPT)作為一種非膠原蛋白,參與調(diào)節(jié)其他細(xì)胞外基質(zhì)成分之間的相互作用。HtrA1(High temperature requirement A1,HtrA1)絲氨酸蛋白酶在應(yīng)激條件下被誘導(dǎo)合成和分泌,降解組織中生理或病理過程中的異常細(xì)胞外基質(zhì)成分。我們發(fā)現(xiàn)DPT和HtrA1在脂肪組織中的基礎(chǔ)表達(dá)較高,但目前尚不明確它們?cè)谥局械淖饔谩１狙芯恐荚谟^察DPT和HtrA1基因在不同代謝狀態(tài)的脂肪組織重構(gòu)過程中的表達(dá)變化。方法:利用公共數(shù)據(jù)庫觀察DPT和HtrA1的組織表達(dá)譜,并運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法驗(yàn)證小鼠中DPT和HtrA1的組織表達(dá)譜;檢測(cè)DPT和HtrA1在小鼠脂肪組織血管基質(zhì)細(xì)胞和脂肪細(xì)胞,以及3T3-L1細(xì)胞分化過程的表達(dá);比較正常和肥胖的小鼠脂肪組織中的DPT表達(dá)差異,比較正常、肥胖及短期高脂喂養(yǎng)不同階段的小鼠脂肪中的HtrA1表達(dá)差異;3T3-L1脂肪細(xì)胞分別給予一定濃度的羅格列酮和氯化鈷處理,檢測(cè)DPT和HtrA1的表達(dá)變化。結(jié)果:1)DPT在脂肪中的基礎(chǔ)表達(dá)較高;DPT主要由脂肪細(xì)胞合成和分泌;高脂飲食誘導(dǎo)小鼠白色脂肪組織中DPT表達(dá)明顯增高;羅格列酮下調(diào)3T3-L1脂肪細(xì)胞中DPT表達(dá)。2)HtrA1在脂肪中的基礎(chǔ)表達(dá)較高;HtrA1在脂肪中主要由脂肪細(xì)胞合成和分泌;短期高脂誘導(dǎo)小鼠皮下脂肪中的HtrA1表達(dá)明顯增高;缺氧上調(diào)3T3-L1脂肪細(xì)胞中的HtrA1表達(dá)。結(jié)論:我們的研究描述了不同代謝狀態(tài)下脂肪組織中的DPT和HtrA1表達(dá)差異明顯,這提示它們均可能參與肥胖發(fā)生的脂肪組織重構(gòu)過程,但其內(nèi)在機(jī)制尚不明確。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R589.2
【部分圖文】：

上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文實(shí)驗(yàn)結(jié)果T在人類和小鼠的白色脂肪中的基礎(chǔ)表達(dá)較高首先通過搜索《Science》上的一項(xiàng)人類蛋白質(zhì)圖譜研究和HPA數(shù)據(jù)庫，兩的數(shù)據(jù)來自RNA-sequence。結(jié)果發(fā)現(xiàn)DPT在大多數(shù)人類組織和器官中均有其mRNA表達(dá)水平在脂肪、輸卵管、心肌和平滑肌等組織中表達(dá)較高，但織中的基礎(chǔ)表達(dá)最高（圖1）。另外我們利用GEO數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)，DPT mRN各組織和器官中的表達(dá)與在人類類似，同樣在脂肪中表達(dá)最高（圖2）。DPT在小鼠中的組織表達(dá)譜，我們檢測(cè)6周齡小鼠皮下、內(nèi)臟、棕色脂肪腓腸肌和比目魚肌中DPT表達(dá)。RT-PCR和Western Blot結(jié)果顯示，DPT在脂肪中表達(dá)最高，其次是棕色脂肪，但在骨骼肌中的表達(dá)較低（圖3）。

各組織和器官中的表達(dá)與在人類類似，同樣在脂肪中表達(dá)最高（圖2）。DPT在小鼠中的組織表達(dá)譜，我們檢測(cè)6周齡小鼠皮下、內(nèi)臟、棕色脂肪腓腸肌和比目魚肌中DPT表達(dá)。RT-PCR和Western Blot結(jié)果顯示，DPT在脂肪中表達(dá)最高，其次是棕色脂肪，但在骨骼肌中的表達(dá)較低（圖3）。圖1 DPT在人類組織和器官中的表達(dá)譜Figure 1 Expression profile of DPT in tissues and organs of human

a：P＜0.001，與皮下脂肪組織組比較（n=6）；B. Western Blot圖3 DPT mRNA和蛋白在小鼠脂肪組織和骨骼肌中的表達(dá)Figure 3 Expression of DPT in adipose tissue and skeletal muscle of mouseT主要由脂肪細(xì)胞合成和分泌接下來為進(jìn)一步分析DPT在脂肪組織中的主要表達(dá)來源，我們分離了6周C57BL/6J雄性小鼠的白色（皮下及內(nèi)臟）脂肪組織的SVFs和脂肪細(xì)胞，檢基因在白色脂肪組織的主要表達(dá)來源。RT-PCT和Western Blot分別檢測(cè)DPs和脂肪細(xì)胞中的mRNA和蛋白表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無論是mRNA還是蛋白DPT在成熟脂肪細(xì)胞中的表達(dá)水平均明顯高于在SVF中的表達(dá)（圖4）。將脂肪組織中分離出的SVFs在體外誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞，首先檢測(cè)SV程的成脂分化標(biāo)志基因PPARγ和CEBP/α表達(dá)變化，兩者均隨著分化時(shí)間的

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6 孫q

本文編號(hào)：2833904