目的:針對卵巢衰老,目前臨床治療的主要手段為激素補充療法,但多項臨床研究表明,激素補充療法會增加子宮內膜癌、浸潤性乳腺癌、冠心病、腦卒中等一系列疾病的患病風險。多年來關于免疫與生殖功能相關關系的研究結果表明,機體自出生前至出生后的整個生命過程,生殖功能受免疫系統(tǒng)的調節(jié)。殼寡糖(Chitosan Oligosaccharide,COS),是天然糖中唯一大量存在的堿性氨基寡糖,其對免疫功能有增強作用,對哺乳動物的胚胎發(fā)育有促進作用,并且對子宮和卵巢功能有保護作用。本研究擬通過規(guī)律且連續(xù)的灌胃方式,在體觀察:COS對卵巢衰老是否具有一定的保護和拯救作用,以及該作用與免疫功能的相關性。方法:實驗分為兩個部分:(1)COS在預防卵巢衰老中的作用(預防組):以環(huán)磷酰胺/白消安(Cyclophosphamide/Busulfan,CY/BUS),聯(lián)合用藥模擬病理性卵巢衰老之前,分組分別給予低劑量(Prevention-low,100mg/kg/d)、中劑量(Prevention-mid,200mg/kg/d)及高劑量(Prevention-high,300 mg/kg/d)的COS灌胃;(2)COS在治療卵巢衰老中的作用(治療組):以CY/BUS制備病理性卵巢衰老模型后,分組給予低劑量(Treatment-low,100mg/kg/d)、中劑量(Treatment-mid,200mg/kg/d)及高劑量(Treatment-high,300 mg/kg/d)的COS灌胃。單純COS組(200COS,200mg/kg/d)為給予正常小鼠COS灌胃。給藥結束后,通過測定卵巢指數(shù)、卵泡數(shù)、雌孕激素水平、生殖細胞標志物MVH/Fragilis的表達量、β-半乳糖甘酶染色等檢測卵巢功能及卵巢衰老狀況,通過計胸腺指數(shù)、計脾臟指數(shù)、觀察胸腺和脾臟的形態(tài)及腹腔巨噬細胞吞噬中性紅實驗和測定免疫因子等方法監(jiān)測小鼠機體的免疫功能,并觀察卵巢功能、卵巢衰老狀況和免疫功能的相關關系。結果:(1)在預防組,通過COS灌胃,胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、觀察胸腺和脾臟的形態(tài)及腹腔巨噬細胞吞噬功能,免疫因子IL-2、TNF-α的表達量均增高;免疫因子IL-4降低;保護了CY/BUS對胸腺和脾臟結構的破壞。在治療組,上述指標呈現(xiàn)同樣的變化趨勢。(2)在預防組,通過COS灌胃,反應卵巢功能的指標,如卵巢指數(shù)、卵泡數(shù)、雌孕激素水平、生殖細胞標志物MVH/Fragilis的表達量均在灌胃后表現(xiàn)不同程度的增高;反映卵巢衰老的指標,如卵巢中衰老基因p16、p21、p53表達量和β-半乳糖苷酶染色程度灌胃后均下降。在治療組,上述指標呈現(xiàn)同樣的變化趨勢。(3)分析卵巢功能、卵巢衰老狀況和免疫功能的相關關系時發(fā)現(xiàn),各因子m RNA表達量相關性分析結果為,MVH/Fragilis mRNA與IL-2/TNF-αmRNA變化趨勢一致;p16/p21/p53 mRNA與IL-4 mRNA變化趨勢一致并與MVH/Fragilis mRNA和IL-2/TNF-αmRNA負相關。結論:(1)COS通過維持胸腺及脾臟的正常內部形態(tài)保證其功能,活化巨噬細胞,提高T淋巴細胞和B淋巴細胞的活性,以及平衡細胞免疫與體液免疫等機制維護雌性小鼠免疫功能;(2)COS可能通過提高免疫功能在保護和拯救雌性小鼠卵巢功能損傷及衰老中發(fā)揮作用。
【學位單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：R711.75
【部分圖文】：

圖 1.1 殼寡糖結構式殼寡糖對生殖功能的影響寡糖已較廣泛運用于維持雌性動物生殖系統(tǒng)的保健。2013 年[35]已螯合鋅對雌性昆明小鼠繁殖性能、子宮卵巢組織結構以及對雄性小、睪丸附睪結構的影響，結果顯示實驗小鼠生殖系統(tǒng)狀況都有所改殼寡糖可影響小鼠胚胎體外發(fā)育，研究者通過向體內受精和體外受

15圖 3.1 COS 對小鼠胸腺及脾臟指數(shù)的影響Fig 3.1 Effect of COS on thymus and spleen index in miceontrol 組及 COS（200 mg/kg.d）組脾臟、胸腺指數(shù)的變化；ontrol 組、CY/BUS 組及不同劑量 COS 預防組（100-300 mg/kg.d）胸腺指數(shù)的變ontrol 組組、CY/BUS 組及不同劑量 COS 預防組（100-300 mg/kg.d）脾臟指數(shù)的ontrol 組組、CY/BUS 組及不同劑量 COS 治療組（100-300 mg/kg.d）胸腺指數(shù)的ontrol 組組、CY/BUS 組及不同劑量 COS 治療組（100-300 mg/kg.d）脾臟指數(shù)的0.01，***p<0.001，與 Control 組比較；##p<0.01，###p<0.001，與 CY/BUS 組比.2 對免疫臟器胸腺及脾臟形態(tài)學的影響圖 3.2A 顯示，COS (200mg/kg/d)能使脾臟紅髓中的皮索有增多趨勢，明顯變化，巨噬細胞數(shù)量及形態(tài)也無明顯變化。從圖 3.2B 可見，CY

圖 3.2 COS 對小鼠脾臟結構的影響Fig 3.2 Effect of COS on spleen structure in miceA：Control 組及 COS（200 mg/kg.d）組脾臟結構變化；B：Control 組、CY/BUS 組及不同劑量 COS 預防組（100-300 mg/kg.d）脾臟結構變化；C：Control 組、CY/BUS 組及不同劑量 COS 治療組（100-300 mg/kg.d）脾臟結構變化。BA

【參考文獻】

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本文編號：2830104