背景:關(guān)節(jié)軟骨和骨組織的破壞是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatic arthritis,RA)致殘的病變節(jié)點(diǎn),有效的預(yù)防和治療關(guān)節(jié)軟骨和骨組織的破壞是治療RA的關(guān)鍵環(huán)節(jié),可以阻止RA病理發(fā)展進(jìn)程、降低RA致殘率。Hedgehog(Hh)信號(hào)通路在動(dòng)物體內(nèi)普遍存在且進(jìn)化保守,可調(diào)節(jié)組織分化、腫瘤形成等。研究表明,在骨性關(guān)節(jié)炎患者的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中明顯存在Hh信號(hào)通路的激活,而Hh信號(hào)通路抑制劑環(huán)巴胺(cyclopamine)特異性阻斷或基因沉默后,可有效緩解骨性關(guān)節(jié)炎患者的病情,防治骨關(guān)節(jié)性疾病,但該通路在RA中研究較少。目的:本研究擬建立SD大鼠的佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis,AA)動(dòng)物模型,觀察Hh通路抑制劑環(huán)巴胺體外對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖的影響,為RA的發(fā)病機(jī)制提供新的科學(xué)依據(jù)。方法:SD大鼠40只,隨機(jī)分為2組,正常組和模型組,每組20只。(1)評(píng)價(jià)建模后AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨受損情況:弗氏完全佐劑足趾皮內(nèi)注射誘導(dǎo)AA大鼠動(dòng)物模型,正常組足趾皮內(nèi)注射等量生理鹽水,定期檢測(cè)并記錄關(guān)節(jié)炎指數(shù)和繼發(fā)性足腫脹度;(2)HE染色:觀察正常組、模型組兩組關(guān)節(jié)腔滑膜組織和滑膜下軟骨組織生長(zhǎng)情況;(3)體外培養(yǎng)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞、鑒定和細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn):取AA大鼠踝關(guān)節(jié)軟骨組織,采用胰酶-膠原酶法分離、培養(yǎng),細(xì)胞化學(xué)甲苯胺藍(lán)染色和免疫細(xì)胞化學(xué)II型膠原染色鑒定培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞;(4)電鏡觀察:透射電鏡觀察培養(yǎng)的正常組和模型組大鼠軟骨細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn);(5)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn):環(huán)巴胺(0、0.03、0.3、3、10、30μmol/L)體外給藥,CCK-8法檢測(cè)環(huán)巴胺處理對(duì)AA大鼠軟骨細(xì)胞增殖的影響;(6)環(huán)巴胺體外對(duì)軟骨細(xì)胞的凋亡影響:體外培養(yǎng)軟骨細(xì)胞,環(huán)巴胺(0、0.3、3、10μmol/L)體外給藥,應(yīng)用Hoechst 33258檢測(cè)環(huán)巴胺對(duì)AA大鼠軟骨細(xì)胞凋亡影響;(7)環(huán)巴胺體外干預(yù)對(duì)Hh信號(hào)通路的影響:對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的軟骨細(xì)胞,加入不同濃度的環(huán)巴胺(環(huán)巴胺終濃度0、0.3、3、10μmol/L)體外培養(yǎng),Western blot檢測(cè)環(huán)巴胺體外阻斷Hh信號(hào)通路后,AA大鼠踝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Shh、Ptch1、Gli1的蛋白表達(dá),圖像分析環(huán)巴胺體外對(duì)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Shh、Ptch1、Gli1的蛋白的影響。結(jié)果:(1)與正常大鼠相比,AA大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)和繼發(fā)性足腫脹度明顯升高,(2)HE染色顯示,AA大鼠踝關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)腔狹窄,關(guān)節(jié)滑膜組織增生和血管翳形成,炎細(xì)胞浸潤(rùn),滑膜下軟骨組織有破壞;(3)軟骨細(xì)胞鑒定,甲苯胺藍(lán)和II型膠原染色軟骨細(xì)胞均著色,表明成功體外培養(yǎng)AA大鼠踝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞;(4)透射電鏡下,AA模型大鼠軟骨細(xì)胞胞質(zhì)中有粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體腫脹,線粒體的嵴消失;(5)CCK-8法觀察關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖結(jié)果表明,環(huán)巴胺(0.3、3、10μmol/L)體外給藥可升高AA模型大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖;(6)Hoechst 33258染色結(jié)果顯示,環(huán)巴胺(0.3、3、10μmol/L)能降低AA模型大鼠軟骨細(xì)胞凋亡率;(7)Western blot檢測(cè)結(jié)果表明,與模型對(duì)照組相比較,環(huán)巴胺(0.3、3、10μmol/L)對(duì)AA大鼠軟骨細(xì)胞中Hh信號(hào)通路相關(guān)蛋白(Shh、Ptch1、Gli1)表達(dá)顯著下降。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用弗氏完全佐劑誘導(dǎo)成功建立AA大鼠模型,體外培養(yǎng)獲得AA大鼠踝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,環(huán)巴胺體外給藥可促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖,抑制軟骨細(xì)胞的凋亡,該作用與阻逆AA大鼠軟骨細(xì)胞Hh信號(hào)通路有關(guān)。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R593.22
【部分圖文】：

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文22圖1 大鼠體征結(jié)構(gòu)改變 A 正常組；B 模型組繼發(fā)性后爪炎癥；C 模型組繼發(fā)性前爪炎癥Figure 1 The symptoms of structures change in rat. A: normal group, B:secondaryinflammatoryof back paw inmodel group, C: secondary inflammation of fore paw in modelgroup4.2 大鼠繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎評(píng)價(jià)應(yīng)用足趾容量?jī)x排水法，通過觀察兩組大鼠繼發(fā)側(cè)關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)，與同期正常組大鼠做比較，測(cè)量和記錄足爪腫脹度的改變來評(píng)價(jià)SD大鼠繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎。足爪腫脹度觀察和比較兩組大鼠左側(cè)（繼發(fā)性）的足爪腫脹情況，本組每4天測(cè)量一次繼發(fā)側(cè)足腫脹度，研究表明，與同期正常組比較，AA大鼠于d12左右出現(xiàn)繼發(fā)側(cè)足腫脹，至3周左右腫脹程度呈逐漸加重趨勢(shì)，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，正常組大鼠繼發(fā)側(cè)（未注射PBS側(cè)）的足爪容積基本無異常改變，見圖2。

發(fā)側(cè)足腫脹度，研究表明，與同期正常組比較，AA大鼠于d12左右出現(xiàn)繼發(fā)側(cè)足腫脹，至3周左右腫脹程度呈逐漸加重趨勢(shì)，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，正常組大鼠繼發(fā)側(cè)（未注射PBS側(cè)）的足爪容積基本無異常改變，見圖2。

可見單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，滑膜組織增生后向其下方的軟骨和軟骨下骨組織浸潤(rùn)，造成軟骨基質(zhì)中軟骨細(xì)胞的連續(xù)性有破壞，排列紊亂，關(guān)節(jié)腔狹窄（圖3B）。

【參考文獻(xiàn)】

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1 朱旭;吳學(xué)建;肖鵬;;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎肌腱自發(fā)性斷裂兔動(dòng)物模型的構(gòu)建[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2017年09期

2 杜尚明;陳光獻(xiàn);馮康倪;岳媛;姚尖平;梁孟亞;吳鐘凱;;ABT-737通過上調(diào)NIX介導(dǎo)的線粒體自噬緩解大鼠低氧性肺動(dòng)脈高壓[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2017年06期

3 李盛春;衛(wèi)小春;衛(wèi)定祿;趙瑞鵬;陳勇;吳松;魏壘;;Ihh信號(hào)通路對(duì)骨關(guān)節(jié)炎的影響及其做為一種生物標(biāo)記物的應(yīng)用前景[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2016年10期

4 崔兆輝;滕元君;姜金;夏亞一;汪靜;安麗萍;馬靖琳;萬麟;;Sonic Hedgehog信號(hào)通路在成年大鼠脊髓損傷后的表達(dá)[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2015年05期

5 丁婧;李榮;胡向陽;蔡莉;張曉亮;汪巧;;環(huán)巴胺對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖凋亡的影響及其抗凋亡機(jī)制[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2015年04期

6 黃鑫;高雪靜;王淵;張瑩;唐莎;鄒麗云;王莉;張靜波;;分子伴侶性自噬參與LAMP-2抗體誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞胞外捕網(wǎng)形成[J];免疫學(xué)雜志;2015年03期

7 劉發(fā)元;李西海;葉蕻芝;劉獻(xiàn)祥;;獨(dú)活寄生湯干預(yù)骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡的機(jī)制[J];中華中醫(yī)藥雜志;2014年07期

8 王嵐;沈偉;蘇艷偉;;氧化應(yīng)激條件下多巴胺能細(xì)胞自噬的變化[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2014年03期

9 王琪琳;蘇玲;劉相國(guó);;Hedgehog信號(hào)通路與腫瘤[J];生命的化學(xué);2011年01期

10 余偉;梁廷波;;Hedgehog信號(hào)通路與腫瘤的關(guān)系[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2007年36期

本文編號(hào)：2820734