【摘要】：研究背景及目的重癥肌無力(myasthenia gravis,MG)是由抗乙酰肌堿受體抗體(acetylcholine receptor antibody,AChR-Ab)介導(dǎo),針對(duì)神經(jīng)肌肉接頭(neuromuscular junction,NMJ)突觸后膜上乙酰膽堿受體(acetylcholine receptor,AChR)進(jìn)行性破壞的一種自身免疫性疾病。目前MG尚無特異性治療方法,因此迫切需要明確MG的發(fā)病機(jī)制。實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無力(experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)是MG的一種可靠動(dòng)物模型,兩者在臨床表現(xiàn)、電生理學(xué)及免疫學(xué)上都具有很大的相似性。EAMG多以電鰻器官AChR為免疫抗原,但其在國(guó)內(nèi)很難獲得,故需要一種簡(jiǎn)單易行成功率高的建立重癥肌無力模型的方法。研究表明Th17在MG/EAMG的發(fā)病機(jī)制中具有十分重要的作用,在EAMG發(fā)病機(jī)制中Th17輔助B細(xì)胞產(chǎn)生自身抗體不依賴于Th1。CXCL13是一種在免疫反應(yīng)中其重要作用的趨化細(xì)胞因子,在B淋巴細(xì)胞尋靶和遷移到淋巴組織中T和B細(xì)胞區(qū)起重要作用。最近報(bào)道體外人Th17克隆表達(dá)CXCL13,而Th1和Th2不表達(dá)。那么在大鼠EAMG中IL-17與CXCL13表達(dá)水平的關(guān)系需進(jìn)一步證實(shí)。10%~20%的MG患者合并有胸腺瘤,33%-75%的胸腺瘤患者同時(shí)合并有重癥肌無力。行胸腺切除術(shù)后重癥肌無力的臨床癥狀減輕以及痊愈的患者占70%。因此我們認(rèn)為胸腺瘤和重癥肌無力的發(fā)生有著密切的關(guān)系。但胸腺瘤合并MG的機(jī)制目前還不是很清楚,探討IL-17和CXCL-13及CD4+T在人胸腺瘤合并MG發(fā)病機(jī)制中的作用非常重要。本研究以大鼠eamg和27例胸腺瘤患者為研究對(duì)象,探討結(jié)核桿菌h37ra劑量與eamg發(fā)病相關(guān)性,il-17和cxcl13在eamg和胸腺瘤合并mg中的表達(dá)及相關(guān)性,旨在探討建立高成功率eamg的方法,揭示il-17和cxcl13在mg發(fā)病機(jī)制中的作用,為臨床治療提供新靶點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)方法1.h37ra在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無力模型中的作用:用大鼠achrα亞單位97 116肽段(dgdfaivkftkvlldytghi)、完全弗氏佐劑并輔以結(jié)核桿菌h37ra作抗原建立lewis大鼠eamg動(dòng)物模型。通過對(duì)大鼠eamg的臨床評(píng)分觀察來發(fā)現(xiàn)結(jié)核菌素在模型建立中的作用。2.il-17和cxcl-13在eamg發(fā)病機(jī)制中的作用:在用肽段免疫建立大鼠eamg同時(shí)給予外源性il-17,elisa法檢測(cè)大鼠脾、淋巴結(jié)上清液和血清cxcl13水平,大鼠血清igg1,igg2a,igg2b抗體水平,與pbs對(duì)照組比較。3.il-17和cxcl-13在胸腺瘤合并mg中的作用:回顧分析患者的相關(guān)臨床資料,并對(duì)胸腺瘤組織蠟塊進(jìn)行il-17、cxcl-13和cd4+免疫組化研究,然后將結(jié)果與相關(guān)臨床資料進(jìn)行比較,探討il-17和cxcl-13在胸腺瘤合并重癥肌無力中的作用。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用spssl7.0統(tǒng)計(jì)軟件分析,組間比較采用t檢驗(yàn),以p0.05為差異有顯著性意義。結(jié)果1.用大鼠achr-α亞單位97 116肽段免疫lewis大鼠后,出現(xiàn)兩個(gè)發(fā)病時(shí)相,分別開始于免疫后第7天、第35天左右,并分別于第15天和第40天左右達(dá)到發(fā)病高峰。增加h37ra的劑量,大鼠eamg發(fā)病率高達(dá)75%,且其癥狀明顯加重。2.eamg大鼠脾、淋巴結(jié)細(xì)胞上清液和血清中的cxcl13水平均高于空白對(duì)照組。給予外源性il-17的實(shí)驗(yàn)組大鼠血清achr特異性抗體ig2b明顯高于給予pbs注射的對(duì)照組,脾、淋巴結(jié)細(xì)胞上清液和血清中的cxcl13水平均高于給予pbs注射的對(duì)照組。3.b1、b2和b3型為主的胸腺瘤合并mg的可能性較大分別為50%、60%和66.7%,而c型同時(shí)合并mg的可能性非常小,而良性的胸腺瘤并發(fā)重癥肌無力的概率越大,且主要為Ⅱ型,淋巴細(xì)胞型胸腺瘤易伴發(fā)重癥肌無力。胸腺瘤合并MG的胸腺瘤組織高表達(dá)細(xì)胞因子IL-17和CXCL-13以及CD4+細(xì)胞。結(jié)論1.研究證實(shí)本方法建立的Lewis大鼠EAMG動(dòng)物模型可廣泛用于今后的相關(guān)研究,且H37RA可以顯著的提高模型的成功率。2.IL-17和CXCLl3在EAMG發(fā)病中起重要作用。3.胸腺瘤合并MG高表達(dá)IL-17和CXCLl3和CD4+細(xì)胞。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R746.1

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本文編號(hào)：2800991