【摘要】：研究背景系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)是一種自身免疫病,患者體內(nèi)產(chǎn)生多種抗體,累及多個系統(tǒng)。如不早期發(fā)現(xiàn)并積極治療,容易造成心、腦、腎、肺等重要臟器的嚴重并發(fā)癥,嚴重危害患者生命及健康。而且SLE多發(fā)于年青育齡女性,影響患者的受孕及胎兒的發(fā)育和分娩。這些不僅給患者個人帶來極大的痛苦,還給家庭和社會帶來沉重的負擔。由于目前SLE的病因及發(fā)病機制尚未完全清晰,因此治療效果欠佳。進一步探索SLE的發(fā)病機制,積極尋找干預治療的靶點一直是醫(yī)學免疫學家和臨床風濕免疫科醫(yī)生面臨的一項挑戰(zhàn)性任務。目前一般認為在SLE的發(fā)病機制中,免疫細胞的活化和炎性因子的產(chǎn)生扮演著重要的角色。調(diào)節(jié)性B細胞(regulatory B cell,Bregs)的概念最初是在20世紀60年代由Morris等提出的,他們認為體內(nèi)存在一群發(fā)揮免疫抑制功能的B淋巴細胞,可以分泌具有抑制作用的抗體。此后多種疾病模型中均觀察到有可調(diào)節(jié)免疫反應的B細胞存在,這些B細胞的表型、來源、作用機制等差異較大。2006年,Mizoguchi等提出調(diào)節(jié)性B細胞這一概念,即一類不依賴于分泌免疫球蛋白且具有免疫調(diào)節(jié)功能的B細胞亞型。而Yanaba等在研究小鼠CHS模型時首次證實這種特殊細胞亞群的存在。這種調(diào)節(jié)性B細胞亞群又名B10細胞,在小鼠以CD19+CDldhighCD5+為表型特點,在人類以CD19+CD24highCD38high為表型特點。這些Bregs亞群可通過產(chǎn)生白細胞介素10(IL-10)或轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)等抑制性細胞因子介導免疫耐受,抑制過度炎癥反應。本研究擬通過流式細胞術(shù)及ELISA等技術(shù)檢測SLE患者外周血CD19+CD24highCD38highBregs、IL-10 受體以及 IL-10、TGF-β1 等細胞因子的表達。將為深入、全面了解SLE發(fā)病機制,并通過Bregs信號通路干預治療SLE等自身免疫病提供理論依據(jù)。目的本文目的旨在檢測CD19+CD24highCD38high調(diào)節(jié)性B細胞(Bregs),血清白細胞介素(IL)-10,轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β,和IL-10受體(IL-10R)在SLE患者外周血的表達。方法1、本研究入組了 56例SLE患者和35例健康志愿者。根據(jù)SLE患者是否合并狼瘡腎炎(lupus nephritis,LN),將56例SLE患者分為兩組:合并LN組(LNgroup;N = 24),不合并 LN 組(nonLNgroup;N = 32)。2、收集了 SLEDAI等臨床資料及實驗室檢查(血常規(guī)、尿常規(guī)、生化常規(guī)、紅細胞沉降率、免疫球蛋白IgG\IgM\IgA補體C3\C4、間接熒光法抗核抗體\抗ds-DNA抗體半定量檢測、免疫印跡法ANA譜12項定性檢測)。流式細胞術(shù)檢測了 CD19+CD24highCD38highBregs 和 IL-10R+細胞的比例。血清 IL-10 和 TGF-βl的檢測采用了 ELISA方法。將上述檢測指標與SLEDAI等臨床資料及實驗室檢查指標作相關(guān)性分析。3、統(tǒng)計分析采用SPSS 18.0軟件(GraphPad,La Jolla公司,CA,USA)。Kolmogorov-Smimov test檢驗數(shù)據(jù)是否正態(tài)分布。正態(tài)分布的計量資料,描述用均數(shù)±標準差(x±s)表示,兩組間差異用two-tailed t-test檢驗。相關(guān)性檢驗(計算相關(guān)系數(shù)及P值)用two-tailed Pearson correlation檢驗。對于非正態(tài)分布的計量資料,描述用中位數(shù)[25th-75th百分位數(shù)]表示,兩組間差異用Mann-Whitney U-test檢驗。相關(guān)性檢驗(計算相關(guān)系數(shù)及P值)用two-tailed Spearman's Rho correlation檢驗。P值0.05視為有統(tǒng)計學意義。結(jié)果1、SLE患者組CD19+CD24highCD38high Bregs在外周血中表達的比例,即CD19+CD24highCD38high Bregs細胞數(shù)/CD19+細胞數(shù),高于正常對照組(39.83 ±21.39%vs.8.74 ± 3.97%;P0.001)。在狼瘡合并腎炎組與不合并腎炎組之間對比,無統(tǒng)計學差異。CD19+CD24highCD38high Bregs的表達與臨床指標的相關(guān)性:與SLEDAI無明顯相關(guān)性(r =-0.111,= 0.416),與外周血血清補體C3負相關(guān)(r =-0.432,P=0.002),與外周血血清補體C4負相關(guān)(r =-0.497,P0.0.01),與外周血血清間接膽紅素表達水平負相關(guān)(r =-0.335,P = 0.035)。2、SLE患者組IL-10R+細胞的比例明顯低于正常對照組(23.76 ± 0.62%vs.51.01 ± 16.03%;P0.001)。但IL-10R+細胞的比例在狼瘡合并腎炎組與不合并腎炎組之間對比,無統(tǒng)計學差異(P0.05)。另外,就IL-10R+細胞的平均熒光強度(MFI)比較,SLE患者組也明顯低于正常對照組(20.18 ±3.88 vs.23.23 ±3.66;P0.001)。進一步作相關(guān)性分析顯示:IL-10R+細胞比例與SLEDAI無明顯相關(guān)性(r = 0.093,P = 0.494),與ALT無明顯相關(guān)性(r = 0.254,P = 0.075),與血清堿性磷酸酶(ALP)無明顯相關(guān)性(r = 0.252,P=0.077);但與紅細胞沉降率(ESR)呈負相關(guān)(r =-0.389,P= 0.016)。3、外周血血清IL-10濃度:SLE患者組高于健康對照組(3.65[2.22-9.17]pg/mLvs.1.04[0.43-1.46]pg/mL;P0.001)。但外周血血清IL-10在狼瘡合并腎炎組與不合并腎炎組之間對比,無統(tǒng)計學差異(P0.05)。血清IL-10濃度與SLEDAI無明顯相關(guān)性(P0.05),但與血沉、ANA滴度、IgG、IgM和AST、ALT呈正相關(guān),有統(tǒng)計學意義(P0.05),與外周血淋巴細胞計數(shù)及紅細胞計數(shù)呈負相關(guān),有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4、外周血血清TGF-β1的濃度:在SLE患者組與正常對照組之間無明顯差異(11262.02 ± 7784.17 pg/mLvs.13143.27 ±5559.21 pg/mL,P=0.239)。不過,我們發(fā)現(xiàn)SLE合并LN患者組外周血血清TGF-β1的表達低于健康對照組(9382.07 ±7558.16pg/mLvs.13143.27±5559.21 pg/mL,P= 0.038)。在SLE患者組,合并與未合并LN組之間TGF-β1的濃度沒有統(tǒng)計學差異(9382.07 ± 7558.16 pg/mL vs.12671.98 ± 7767.39 pg/mL,P = 0.118)。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn):患者外周血血清TGF-β1的濃度與SLEDAI無明顯相關(guān)性,但是與外周血RBC計數(shù)呈正相關(guān),與24小時尿蛋白定量、血清IgM和AST的濃度呈負相關(guān)。5、CD19+CD24highCD38high Bregs 的比例與IL-10R+ 淋巴細胞的比例及MFI均正相關(guān),與外周血血清IL-10濃度正相關(guān)。另外,IL-10R+淋巴細胞的比例與其MFI正相關(guān)。而外周血血清TGF-β1濃度與IL-10濃度負相關(guān)。以上統(tǒng)計學分析均P0.05。結(jié)論1、與正常對照相比,SLE患者組CD19+CD24highCD38high Bregs和IL-10在外周血中表達上調(diào),IL-10 R的表達下調(diào)。這些指標參與SLE的免疫調(diào)節(jié),CD19+CD24highCD38hig Bregs、IL-10的高表達可能是機體對IL-I0R低表達的代償或中和。2、外周血血清TGF-β1的濃度在SLE患者組與正常對照組之間無明顯差異,但SLE合并LN患者組外周血血清TGF-β1的表達低于健康對照組。TGF-β1對于LN具有一定的保護作用。3、CD19+CD24highCD38highBregs的表達與外周血血清補體C3、C4負相關(guān)。血清IL-10濃度與SLEDAI無明顯相關(guān)性,但與血沉、ANA滴度、IgG、IgM和AST、ALT呈正相關(guān),與外周血淋巴細胞計數(shù)及紅細胞計數(shù)呈負相關(guān)。SLE患者組IL-10R的表達與ESR呈負相關(guān)。TGF-β1的濃度與外周血RBC計數(shù)呈正相關(guān),與24小時尿蛋白定量負相關(guān)。因而,這些指標可以部分反映SLE患者病情活動情況。研究背景系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一種異質(zhì)性疾病且并發(fā)癥多見。SLE相關(guān)的骨損害包括骨量減少、骨質(zhì)疏松(osteoporosis,0P)、骨壞死(osteonecrosis,ON)和骨折。OP是一種以骨量減少和骨組織的細微結(jié)構(gòu)破壞為特征的全身性疾病,最終導致骨脆性增加和骨折。ON是骨細胞成分死亡、骨結(jié)構(gòu)破壞,繼而導致關(guān)節(jié)疼痛及功能喪失。SLE的另一特點就是免疫紊亂,包括抗體和細胞因子的產(chǎn)生。有研究認為白細胞介素10(IL-10)和轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)等抑制性細胞因子可以介導免疫耐受,抑制過度炎癥反應,可能參與調(diào)節(jié)骨代謝和骨損害。但與SLE骨損害的相關(guān)性研究較少。本研究擬檢測并比較SLE合并骨損害患者外周血IL-10、TGF-β1表達的的差異。將為深入、全面了解細胞因子參與SLE發(fā)病機制,并通過調(diào)節(jié)細胞因子表達干預治療SLE等自身免疫病提供理論依據(jù)。目的本文目的旨在檢測IL-10、TGF-β1在SLE合并骨損害患者外周血的表達并分析其臨床意義。方法1、本研究入組了56例SLE患者。血清IL-10和TGF-β1的檢測采用了ELISA方法。2、對56例患者臨床資料進行回顧性分析,主要記錄合并骨質(zhì)疏松癥及骨壞死情況。根據(jù)不同骨量分為:骨量正常組(14例),骨量減少組(26例),骨質(zhì)疏松組(16例)。根據(jù)是否合并骨壞死分為:未發(fā)現(xiàn)骨壞死組(49例)和骨壞死組(7例)。3、統(tǒng)計分析采用SPSS 18.0軟件(GraphPad,La Jolla公司,CA,USA)。Kolmogorov-Smirnov test檢驗數(shù)據(jù)是否正態(tài)分布。正態(tài)分布的計量資料,描述用均數(shù)±標準差(x±s)表示,兩組間差異用two-tailed t-test檢驗。對于非正態(tài)分布的計量資料,描述用中位數(shù)[25th-75th百分位數(shù)]表示,兩組間差異用Mann-Whitney U-test檢驗。P值0.05視為有統(tǒng)計學意義。結(jié)果1、TGF-β1的表達,骨量正常組骨量減少組骨質(zhì)疏松組,但差異僅在骨量正常組與骨質(zhì)疏松組間有統(tǒng)計學意義(14778.93 ± 5188.10 vs 9289.53 ±6752.73 pg/mL,P=0.020)。IL-10的表達,骨量正常組骨量減少組骨質(zhì)疏松組,但差異僅在骨量正常組與骨質(zhì)疏松組間有統(tǒng)計學意義(0.12[0.01-2.74]vs 2.57[0.52-8.52]pg/mL,P=0.012)。2、TGF-β1的表達,無骨壞死組(11960.43 ±768.55 pg/mL)有骨壞死組(6373.13 ± 5315.75 pg/mL),但差異無統(tǒng)計學意義(P=0.075)。IL-10的表達,無骨壞死組(0.87[0.21-4.56]pg/mL)有骨壞死組(8.03[1.61-9.56]pg/mL),差異有統(tǒng)計學意義(P=0.017)。結(jié)論1、伴有骨質(zhì)疏松的SLE患者組外周血血清TGF-β 1要明顯低于骨量正常的SLE患者組。伴有骨壞死的SLE患者組外周血血清TGF-β 1要低于未伴有骨壞死的SLE患者組,盡管差異尚無統(tǒng)計學意義,但伴有骨壞死的SLE患者TGF-β 1表達有降低的趨勢。提示我們TGF-β1表達的降低可能是SLE合并骨質(zhì)代謝異常的發(fā)病環(huán)節(jié)之一。2、伴有骨質(zhì)疏松的SLE患者組外周血血清IL-10要明顯高于骨量正常的SLE患者組。伴有骨壞死的SLE患者組外周血血清IL-10要高于未伴有骨壞死的SLE患者組。這種IL-10表達增加可能是一種慢性炎癥下的補償性合成增加。研究背景系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一種異質(zhì)性疾病。骨壞死(osteonecrosis,ON)是骨細胞成分死亡、骨結(jié)構(gòu)破壞,繼而導致關(guān)節(jié)疼痛及功能喪失。ON是SLE的常見臨床表現(xiàn),致殘率高。除了糖皮質(zhì)激素治療,其他臨床指標也可能成為骨壞死的危險因素。目的評估分析除了糖皮質(zhì)激素治療外,SLE合并骨壞死的主要危險因素,為防控骨壞死提供決策依據(jù)。方法在 Cochrane library,PubMed,Ovid,和 Science Direct 等數(shù)據(jù)庫檢索關(guān)于 SLE合并ON的危險因素已發(fā)表的病例對照研究。對23篇符合納入標準的文獻進行了數(shù)據(jù)提取,共包含病例組(SLE合并ON)1071例和對照組(SLE不合并ON)23065例,應用Revman 5.3軟件進行Meta分析。經(jīng)過異質(zhì)性分析,計算了每一個危險因素的OR值和95%可信區(qū)間。結(jié)果主要危險因素的OR[95%可信區(qū)間]如下:關(guān)節(jié)炎1.69[1.32,2.17],中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害 1.34[1.06,1.71]、糖尿病 1.59[1.03,2.46]、高血壓 1.69[1.42,2.02]、口腔潰瘍 1.48[1.06,2.08]、腎損害 1.53[1.27,1.83]、血管炎 2.45[1.54,3.89]、吸煙史 1.64[1.01,2.65]、白細胞下降 1.54[1.11,2.13]、血小板下降 1.63[1.14,2.32]、細胞毒藥物1.79[1.25,2.57]、環(huán)磷酰胺治療3.13[1.58,6.21]以及抗Sm抗體0.48[0.27,0.85]。結(jié)論除了糖皮質(zhì)激素治療,SLE合并ON的危險因素還包括:關(guān)節(jié)炎、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害、糖尿病、高血壓、口腔潰瘍、腎損害、血管炎、吸煙史、白細胞下降、血小板下降、細胞毒藥物、環(huán)磷酰胺治療�？古八帉LE合并ON沒有保護作用。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R593.241
【圖文】：

ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ檢驗。Ｐ值＜邋０．０５視為有統(tǒng)計學意義。逡逑結(jié)果逡逑１邋ＳＬＥ患者外周血中ＣＤ１９＋ＣＤ２４ｈｉｇｈＣＤ３８ｈｉｇｈＢｒｅｇ細胞的比例高逡逑于正常對照逡逑為了了解Ｂｒｅｇｓ在ＳＬＥ發(fā)生發(fā)展中的作用，我們首先檢測了ＳＬＥ患者組和正逡逑常對照組ＣＤ１９＋ＣＤ２４ｈｌｇｈＣＤ３８ｈｉ§ｈＢｒｅｇＳ在外周血中表達的比例。如圖１所示：ＳＬＥ逡逑患者組ＣＤ１９＋ＣＤ２４ｈｉｇｈＣＤ３８ｈｉｇｈ邋Ｂｒｅｇｓ在外周血中表達的比例，即逡逑ＣＤ１９＋ＣＤ２４ｈｉｇｈＣＤ３８ｈｉｇｈ邋Ｂｒｅｇｓ細胞數(shù)／邋ＣＤ１９＋邋細胞數(shù)，高于正常對照組（３９．８３邋士逡逑２１．３９％邋ｖｓ．邋８．７４邋±邋３．９７％；尸＜邋０．００１；圖１）。逡逑１00＜

逑３）：與血清ＩｇＧ正相關(guān)（ｒ邋＝邋０．２８１，尸＝０．０４６；表３），與ＳＬＥＤＡＩ無明顯相關(guān)性逡逑（ｒ邋＝－０．１１１，Ｐ邋＝邋０．４１６；圖２Ａ），與外周血血清補體Ｃ３負相關(guān)（ｒ邋＝－０．４３２，尸＝逡逑０．００２；圖２８），與外周血血清補體匚４負相關(guān)（１＇邋＝邋－０．４９７，尸＜０．００１；圖２0，逡逑與外周血血清間接膽紅素表達水平負相關(guān)（ｒ邋＝－０．３３５，尸＝邋０．０３５；圖２Ｄ）。逡逑表３．邋ＣＤ１９＋ＣＤ２４ｈｉｇｈＣＤ３８ｈｉｇｂＢｒｅｇｓ的表達與臨床檢測指標的相關(guān)性分析逡逑ＳＬＥＤＡＩ邐ＥＳＲ邐ＡＮＡ邐ＣＲＰ邐ｄｓ－ＤＮＡ邐ＩｇＧ邐ＩｇＭ邐ＩｇＡ邐Ｃ３邐Ｃ４邐ＩＢＩＬ邐ＡＳＴ邐ＡＬＴ逡逑ｒ邐－０．１１１邐０．０１８邐０．０８９邐－０．０３３邐０．２８１邐０．２８１邐－０．１０９邐－０．０２０邐－０．４３２邐－０．４９７邐－０．３３５邐－０．００３邐－０，０９１逡逑Ｐ邋０．４１６邐０．９１０邐０．６０６邐０．８２８邐０．１０２邐０．０４６邐０．４４６邐０．８９０邐０．００２邐＜０．００１邐０．０３５邐０．９８４邐０．５２２逡逑Ｎｏｔｅ：邋ＳＬＥＤＡＩ，邋Ｓｙｓｔｅｍｉｃ邋Ｌｕｐｕｓ邋Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ邋Ｄｉｓｅａｓｅ邋Ａｃｔｉｖｉｔｙ邋Ｉｎｄｅｘ；邋ＥＳＲ，逡逑ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ邋ｓｅｄｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ邋ｒａｔｅ；邋ＡＮＡ，邋ａｎｔｉｎｕｃｌｅａｒ邋ｍｉｔｉｂｏｄｙ；邋ｄｓ－ＤＮＡ，邋ｄｏｕｂｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄ逡逑ＤＮＡ；邋ＣＲＰ

山東大學博士學位論文逡逑７５５８．１６邐ｐｇ／ｍＬ邋ｖｓ＿邋１３１４３．２７邋±邋５５５９．２１邋ｐｇ／ｍＬ，Ｐ邋＝邋０．０３８；如圖４Ｂ所示）。在ＳＬＥ逡逑患者組，合并與未合并ＬＮ組之間ＴＧＦ－ｐｌ的濃度沒有統(tǒng)計學差異（９３８２．０７邋±逡逑７５５８．１６邐ｐｇ／ｍＬｖｓ．邋１２６７１．９８邋±邋７７６７．３９邋ｐｇ／ｍＬ，Ｐ邋＝邋０．１１８；如圖邋４Ｃ）。逡逑Ａ邐ｐ＝0．２３９邐Ｂ邐Ｐ＝０．０３８逡逑２００００＊１邐邐邋２００００＊１邐ｉ邐Ｉ逡逑羞邐１邐Ｅ邐——逡逑ｇ１５０００－邐ｇ邋１５０ＤＧ－逡逑二邐知NB，邐二邐。、士ｍ逡逑＞０００■■■邐Ｊ邋１００００－逡逑６０００－邐ＳＯＯＯ－逡逑ｓ邐０－ＬＢＢＨ—，——ｓ邐ＪＪＢＢ＿＿：：．．．．．．．．．．逡逑ＳＬ￡邐ＨＣ邐ＬＮ邐ＨＣ逡逑（ｎ＝５６＞邐（ｎ＝３１）邐（ｎ＝２４）邐（ｎ＝３１）逡逑ｃ逡逑２５０００１邐Ｐ＝０．１１８逡逑ｆ邐＊邐＾逡逑■￥，邋２００００－邋一邋一逡逑三sE０■邐——逡逑ｍｍｍｍ逡逑５００Ｄ－逡逑邐Ｌ＜ｉ二點／廠：金冗，逡逑ＳＬＥ邋ｗｉｔｈｏｕｔ邋ＬＮ邐ＬＮ逡逑（ｎ＝３２）邐（ｎ＝２４）逡逑圖４邋ＴＧＦ－ｐｌ在不同組別間的表達逡逑相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)？？患者外周血血清ＴＧＦ－ｐ邋１的濃度與ＳＬＥＤＡＩ無明顯相關(guān)性，逡逑但是與外周血ＲＢＣ計數(shù)呈正相關(guān)

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 鄂維建;趙玲莉;李玉玲;;外周血中CD19~+ CD5~+ B細胞和白細胞介素-10對系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者病情的影響[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2016年11期

2 趙瑩;龐宇軒;敦欣卉;馮兆賀;費鴻博;費瑞;隋曉光;;白細胞介素-10對骨質(zhì)疏松小鼠牙槽骨吸收的保護作用[J];中國老年學雜志;2016年11期

3 馮錦山;楊正;朱宇珍;遲宏罡;鄭學寶;;效應性B細胞的功能作用和調(diào)節(jié)性B細胞的調(diào)節(jié)作用研究進展[J];細胞與分子免疫學雜志;2016年03期

4 楊芬;黃德暉;程辰;吳衛(wèi)平;;CD1d~(hi)CD~(5+)CD19~+調(diào)節(jié)性B細胞在視神經(jīng)脊髓炎患者外周血中的數(shù)量及意義[J];細胞與分子免疫學雜志;2015年03期

5 ;mRNA Expression of Chemokine Receptors on Peripheral Blood Mononuclear Cells and Correlation with Clinical Features in Systemic Lupus Erythematosus Patients[J];Chinese Medical Sciences Journal;2010年03期

本文編號：2796019