【摘要】：目的:無機(jī)砷是廣泛存在于地球土壤和基巖中的環(huán)境污染物。飲用水砷中毒已成為全球范圍內(nèi)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。越來越多的研究表明,砷暴露與多種疾病密切相關(guān),可導(dǎo)致肝、腎、脾和肺等多臟器損傷。砷誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激是目前砷毒性被廣泛接受和研究的機(jī)制之一,而ROS的過量產(chǎn)生也可能會誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展,成為機(jī)體炎癥反應(yīng)發(fā)生的關(guān)鍵信號傳導(dǎo)分子。研究表明,肝臟和腎臟均為砷代謝過程中的重要靶器官,長期砷暴露會提高肝腎疾病的發(fā)病率。而近年來的研究表明,肝臟和腎臟中含有多種免疫細(xì)胞,具有免疫功能;且砷具有免疫毒性的假說已經(jīng)被廣泛研究并逐漸得到認(rèn)可。姜黃素作為一種植物多酚,也是姜黃發(fā)揮藥理作用最重要的活性成分,具有廣泛的藥理活性,包括抗腫瘤、抗炎、和抗氧化等多種調(diào)節(jié)作用。本研究通過建立實(shí)驗(yàn)動物模型,擬觀察亞砷酸鈉和姜黃素共同處理對小鼠免疫功能紊亂的調(diào)節(jié)效應(yīng)及其可能機(jī)制,并為慢性砷中毒所致肝腎損傷的有效控制和治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法:1、實(shí)驗(yàn)動物和分組:選擇SPF級雌性昆明小鼠54只作為實(shí)驗(yàn)對象。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后根據(jù)體重按隨機(jī)數(shù)字表,分為6組,每組9只。分組情況如下:對照組、單純砷染毒組(10 mg/L As、25 mg/L As)、單純姜黃素組(200mg/kg,1%羧甲基纖維素鈉配制)和姜黃素干預(yù)組(10 mg/L As+200 mg/kg姜黃素、25 mg/L As+200 mg/kg姜黃素)。采用NaAsO_2自由飲水方式染毒,同時給予姜黃素干預(yù),每周兩次灌胃,共6周。染毒結(jié)束后,麻醉后處死,采集全血并分離血清、尿液、完整的肝腎組織樣品待測。2、檢測指標(biāo)與方法:(1)血清及肝組織中ALT和AST的活力測定:南京建成試劑盒;(2)小鼠尿蛋白含量測定:BCA試劑盒法;(3)肝腎炎癥因子和細(xì)胞因子Il-1β、Il-6、Tnf-α、Ifn-γ、Tgf-β以及Nf-κb的mRNA水平檢測:RT-PCR檢測;(4)肝腎組織MPO活性測定:南京建成試劑盒;(5)肝臟和腎臟中MAPK和NF-κB信號通路的蛋白水平:western blot分析。(6)肝臟和腎臟中NRF2信號通路的mRNA和蛋白含量檢測:RT-PCR和western blot分析。結(jié)果:1、姜黃素對飲水砷暴露小鼠肝腎功能損傷的調(diào)節(jié)效應(yīng)實(shí)驗(yàn)期間所有小鼠均存活并無明顯的系統(tǒng)毒性,各組之間小鼠體重均無明顯差異;姜黃素可顯著下調(diào)砷誘導(dǎo)的小鼠血清和肝組織中ALT和AST活力的升高,且能逆轉(zhuǎn)砷所致的小鼠尿蛋白含量上升。2、姜黃素對飲水砷暴露小鼠肝腎免疫功能紊亂的調(diào)節(jié)效應(yīng)姜黃素能明顯降低砷誘導(dǎo)的肝腎炎癥因子和細(xì)胞因子Il-1β、Il-6、Tnf-α、Ifn-γ、Tgf-β以及Nf-κb的mRNA水平上升;與對照組相比,25 mg/L As染毒組的肝腎組織勻漿中的MPO活性顯著上升,姜黃素干預(yù)后MPO活性顯著下降;各染砷組小鼠肝腎組織中P-JNK、P-ERK、P-P38和P-IκB、NF-κB的蛋白含量表達(dá)明顯增加,Nf-κb的mRNA水平也明顯增加。且姜黃素能下調(diào)肝腎組織中砷誘導(dǎo)的MAPK、NF-κB信號通路的蛋白表達(dá)和Nf-κb的轉(zhuǎn)錄水平。3、姜黃素對飲水砷暴露小鼠肝腎Nrf2信號通路的影響姜黃素能進(jìn)一步顯著上調(diào)Nrf2信號通路的表達(dá),各染砷組小鼠肝臟和腎臟的Nrf2、Gsto1/2和Gclm的基因表達(dá)水平,以及NRF2及其下游蛋白GCLC、NQO1和HO-1的蛋白表達(dá)含量均明顯升高。結(jié)論:1、姜黃素可能對飲水砷暴露小鼠的肝腎免疫功能紊亂有一定的調(diào)節(jié)效應(yīng)。2、姜黃素可能通過調(diào)節(jié)飲水砷暴露小鼠肝臟和腎臟中MAPK、NF-κB和NRF2信號通路的表達(dá)從而發(fā)揮其調(diào)節(jié)效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R595.2
【圖文】：

而25 mg/L染砷組、單純姜黃素組及10 mg/LAs+200 mg/kg Cur干預(yù)組的腎臟臟器系數(shù)與對照組相比均下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。圖1. 姜黃素對飲水砷暴露小鼠體重的影響（Mean±SD，n=9）表1. 不同組別小鼠經(jīng)計算的As日均攝入量和每日攝食量、肝腎組織重量及臟器系數(shù)（Mean±SD，n=9）組別砷濃度(mg/L)經(jīng)計算的As日均攝入量(mg/kg bodyweight/day)經(jīng)計算的日均攝食量(g/kg bodyweight/day)肝臟重量(g)肝臟臟器系數(shù)(%)腎臟重量(g)腎臟臟器系數(shù)(%)

染砷組10 1.64±0.17 141.38±38.12 1.45±0.24 3.95±0.43 0.42±0.05 1.13±25 3.23±0.43 145.13±37.89 1.41±0.19 3.72±0.33 0.41±0.04 1.08±姜黃素干預(yù)組0 0 145.51±38.87 1.27±0.07 3.53±0.21*0.38±0.02*1.06±10 1.67±0.14 150.45±33.52 1.31±0.16 3.73±0.24 0.37±0.03*a1.07±25 3.14±0.38 146.48±34.96 1.39±0.08 3.70±0.34 0.43±0.03 1.14±注：與對照組比，*P < 0.05；與對應(yīng)單純?nèi)旧榻M比，aP < 0.05。3.2 姜黃素對飲水砷暴露小鼠肝腎功能損傷的調(diào)節(jié)效應(yīng)3.2.1 姜黃素對飲水砷暴露小鼠肝功能的影響血清和肝組織的 ALT 和 AST 水平反映小鼠肝功能的變化。如圖 2 所示，10mg/L 和 25 mg/L 砷染毒均引起血清和肝組織 ALT 及 AST 活性顯著升高。采用200 mg/kg 姜黃素的灌胃干預(yù)后，血清和肝組織勻漿 ALT 和 AST 活力的增加顯著減弱，除肝組織 10 mg/LAs+200 mg/kg Cur 干預(yù)組與 10 mg/LAs 單純?nèi)旧榻M相比沒有統(tǒng)計學(xué)差異外，其余姜黃素干預(yù)各組的 ALT 和 AST 水平與單純?nèi)旧榻M相比均有明顯下降（P < 0.05）。

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文.2 姜黃素對飲水砷暴露小鼠腎功能的影響通過測定小鼠尿液中蛋白水平可以在一定程度上反映小鼠腎臟的見，25 mg/L 砷染砷組小鼠的尿蛋白含量顯著升高。采用 200 m胃干預(yù)后小鼠尿蛋白含量顯著下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P <組相比，單獨(dú)用 200 mg/kg 姜黃素處理小鼠后，尿蛋白含量未見

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本文編號：2789436