【摘要】：目的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一類(lèi)慢性自身免疫病,患病人數(shù)占世界人口的1%以上。RA患病的主要特征是慢性的炎癥反應(yīng)以及關(guān)節(jié)軟骨和骨的破壞,嚴(yán)重時(shí)誘發(fā)其它并發(fā)癥甚至致殘。當(dāng)RA病理過(guò)程中,免疫紊亂引起異常的滑膜增生,生成血管翳侵入軟骨,進(jìn)而造成骨及軟骨的損傷,病情較重的會(huì)使關(guān)節(jié)病變畸形甚至使患者喪失運(yùn)動(dòng)機(jī)能。而免疫失調(diào)生成的多種細(xì)胞因子在RA復(fù)雜的病理進(jìn)程中發(fā)揮了不可或缺的作用。這些細(xì)胞因子中有的會(huì)促使滑膜細(xì)胞異常增殖,造成滑膜炎癥;有的會(huì)通過(guò)調(diào)控不同的信號(hào)通路,增加金屬基質(zhì)蛋白(Matrix metalloproteinase,MMPs)的產(chǎn)生,直接加重關(guān)節(jié)骨及軟骨的損傷。許多研究表明microRNAs(miRNAs)在疾病中發(fā)揮調(diào)控功能,特別是異常表達(dá)的miRNAs參與到RA病理的進(jìn)程。因而,本課題將miR-145-5p作為研究對(duì)象,目的是研究其在RA中對(duì)于細(xì)胞因子的調(diào)控作用以及在RA發(fā)生發(fā)展中的可能的作用。方法本實(shí)驗(yàn)使用Quantitative PCR(qPCR)對(duì)30例RA患者和23例正常人的PBMC中miR-145-5p表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定,比較其表達(dá)差異。同時(shí)測(cè)定其在RA(12例)和骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)(10例)病人的滑膜組織中的表達(dá)差異。之后在RA患者的RA-Fibroblast-like synovial cells(RA-FLS)中過(guò)表達(dá)miR-145-5p,通過(guò)qPCR、Western Blot檢測(cè)RA-FLS胞內(nèi)Interleukin(IL)-1β、IL-6、IL-17及MMPs(MMP-1、MMP-3、MMP-9和MMP-13)的分子及蛋白水平,再通過(guò)ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)實(shí)驗(yàn)分析了RA-FLS培養(yǎng)上清液中炎性因子(IL-1β、IL-6、IL-17)及MMPs(MMP-3、MMP-9和MMP-13)的表達(dá)量的變化。然后運(yùn)用生物信息學(xué)軟件結(jié)合查詢(xún)資料分析預(yù)測(cè)miR-145-5p潛在的靶基因,qPCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-145-5p與待測(cè)靶基因在mRNA水平的表達(dá)相關(guān)性,然后用Western blot驗(yàn)證其蛋白表達(dá),最終使用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)來(lái)驗(yàn)證miR-145-5p與相關(guān)靶基因的靶向關(guān)系。結(jié)果1.檢測(cè)RA病人和正常人PBMC中miR-145-5p的表達(dá)水平發(fā)現(xiàn),miR-145-5p在RA患者的PBMC中的表達(dá)明顯高于在正常人PBMC中水平。RA病人的滑膜組織及FLS中miR-145-5p的水平高于在OA病人中的表達(dá)。2.過(guò)表達(dá)miR-145-5p之后測(cè)定RA-FLS中IL-1β、IL-6和IL-17分子及蛋白的表達(dá)發(fā)現(xiàn),IL-17明顯高水平表達(dá),IL-1β、IL-6表達(dá)無(wú)明顯差異。3.過(guò)表達(dá)miR-145-5p之后測(cè)定RA-FLS中MMPs的表達(dá)發(fā)現(xiàn),MMP-3、MMP-9和MMP-13的表達(dá)升高,MMP-1表達(dá)無(wú)變化。4.生物信息學(xué)分析推測(cè)miR-145-5p的待測(cè)靶基因?yàn)镋ts-1,在RA-FLS中轉(zhuǎn)染miR-145-5p之后,qPCR和Western blot檢測(cè)Ets-1分子及蛋白水平發(fā)現(xiàn),其分子及蛋白水平在過(guò)表miR-145-5p之后降低,敲低miR-145-5p之后升高。5.雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-145-5p與Ets-1的靶向關(guān)系發(fā)現(xiàn),miR-145-5p確實(shí)是結(jié)合在Ets-1的3’UTR區(qū),結(jié)合位點(diǎn)為:為Ets-1的3’UTR的2710位點(diǎn)。結(jié)論miR-145-5p在RA患者的PBMC中的表達(dá)明顯高于在正常人PBMC中水平。RA病人的滑膜組織及FLS中miR-145-5p的水平也高于在OA病人中的表達(dá)。RA中高水平的miR-145-5p可能通過(guò)靶向調(diào)節(jié)Ets-1下調(diào)了其表達(dá),并且Ets-1可能升高了IL-17表達(dá)量,同時(shí)升高的IL-17可能通過(guò)調(diào)節(jié)p38 MAP和ERK1/2通路造成MMP-3、MMP-9、MMP-13的水平上調(diào)。從而影響RA中細(xì)胞因子的調(diào)控,對(duì)RA的病理進(jìn)程造成影響。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R593.22
【圖文】：

1. miR-145-5p 在 RA 患者與正常人 PBMC 中的相對(duì)表達(dá)A 患者的滑膜組織中 miR-145-5p 表達(dá)的測(cè)定部關(guān)節(jié)替換術(shù)的 12 例 RA 和 10 例 OA 病人，經(jīng)手術(shù)之后l 的滑膜組織經(jīng)提 RNA，反轉(zhuǎn)后用實(shí)時(shí)定量 PCR 測(cè)定各-5p 的水平。U6 作為內(nèi)定參照。如圖 2 中 qPCR 的結(jié)果位中 miR-145-5p 的表達(dá)量高于 OA 中的表達(dá)。并且該差

1. miR-145-5p 在 RA 患者與正常人 PBMC 中的相對(duì)表 患者的滑膜組織中 miR-145-5p 表達(dá)的測(cè)定關(guān)節(jié)替換術(shù)的 12 例 RA 和 10 例 OA 病人，經(jīng)手術(shù)之l 的滑膜組織經(jīng)提 RNA，反轉(zhuǎn)后用實(shí)時(shí)定量 PCR 測(cè)定5p 的水平。U6 作為內(nèi)定參照。如圖 2 中 qPCR 的結(jié)果中 miR-145-5p 的表達(dá)量高于 OA 中的表達(dá)。并且該

碩士學(xué)位論文 miR-145-5p 在 RA-FLS 中的調(diào)控 IL-17 及 MMl 的 FLS 從凍存環(huán)境拿出，提 RNA 后測(cè)定濃度，做反轉(zhuǎn)A 和 OA 病人的 FLS 中 miR-145-5p 的分子表達(dá)。U6 作為內(nèi)果顯示，與在 OA-FLS 的表達(dá)相比，miR-145-5p 在 RA-說(shuō)明 miR-145-5p 在 RA 患者中是異常表達(dá)的。OA 病人的 FLS 中 miR-145-5p 的水平的測(cè)定

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 陳軍祥;朱國(guó)英;;microRNAs對(duì)破骨細(xì)胞分化的調(diào)控[J];中華骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病雜志;2015年02期

2 李旭光;上官改珍;徐燕;費(fèi)佳;;IL-18和IL-8在類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者血清中的表達(dá)及其與抗CCP相關(guān)性的研究[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2014年08期

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本文編號(hào)：2786201