【摘要】：糖尿病是一種慢性內(nèi)分泌代謝疾病,其病因是胰島β細(xì)胞受損傷或者胰島素拮抗引發(fā)的高血糖癥,它目前已經(jīng)成為世界性的致死疾病,嚴(yán)重危害著人類的健康。通過(guò)胚胎干細(xì)胞或胰腺干細(xì)胞等誘導(dǎo)分化成為胰島β細(xì)胞是糖尿病治療的新興方案,它優(yōu)于胰島素注射、胰島移植等傳統(tǒng)療法,現(xiàn)已取得快速發(fā)展。但是由于干細(xì)胞增殖和分化都受到復(fù)雜的調(diào)控,仍需要對(duì)胰腺祖細(xì)胞進(jìn)行更進(jìn)一步的深入研究,才能早日應(yīng)用于臨床,為糖尿病提供良好的治療方法胰腺祖細(xì)胞的增殖受到多種因子的調(diào)控,其中包括microRNA(miRNA)。miRNA是高度保守的非編碼微小RNA,通過(guò)結(jié)合到其靶基因mRNA的3UTR,在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá),參與調(diào)節(jié)生命體的各個(gè)過(guò)程,包括細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖、器官發(fā)育和腫瘤的發(fā)生等。miR-19b是miR-17-92基因簇cluster的重要成員之一,在腫瘤和干細(xì)胞中起著重要的調(diào)控作用。本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)miR-19b可以通過(guò)靶向NeuroDl抑制小鼠胰腺β細(xì)胞中insulin的表達(dá),這說(shuō)明miR-19b參與調(diào)控胰腺的發(fā)育過(guò)程;而另一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示miR-19b對(duì)胰腺祖細(xì)胞的增殖可能會(huì)有影響。本研究在胰腺祖細(xì)胞中過(guò)表達(dá)或抑制miR-19b,發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)miR-19b可以通過(guò)靶向抑制其靶基因PTEN促進(jìn)PI3K/AKT信號(hào)通路,從而顯著促進(jìn)胰腺祖細(xì)胞增殖,miR-19b不影響PTEN的mRNA,但明顯下調(diào)其蛋白水平;在胰腺祖細(xì)胞中抑制miR-19b雖然可以促進(jìn)PTEN的表達(dá),但是對(duì)細(xì)胞增殖并沒(méi)有明顯的影響。此外,miR-19b還促進(jìn)了 ERK信號(hào)通路的激活,但并不影響STAT3信號(hào)通路的活性。miR-19b也促進(jìn)了 Wnt信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白β-catenin的mRNA和蛋白水平;該miRNA還上調(diào)了 Hippo信號(hào)通路效應(yīng)因子YAP的mRNA和蛋白水平,YAP的主要下游靶基因CCNE1的水平也顯著升高,這說(shuō)明miR-19b也激活了 Wnt和Hippo這兩個(gè)通路。本實(shí)驗(yàn)室此前發(fā)現(xiàn)miR-18a可以顯著抑制胰腺祖細(xì)胞的增殖。在本研究發(fā)現(xiàn)miR-19b與miR-18a共同過(guò)表達(dá)可以逆轉(zhuǎn)并回復(fù)miR-18a對(duì)胰腺祖細(xì)胞增殖的抑制作用,且miR-18a靶向抑制的四個(gè)基因水平也發(fā)生了逆轉(zhuǎn)和上調(diào),這說(shuō)明在胰腺祖細(xì)胞中miR-19b與miR-18a有著相互拮抗的作用,但是其中的分子機(jī)制尚不明確,有待進(jìn)一步研究探討。
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R587.1
【圖文】：

５００吣滲透劑，在脫色搖床上清洗細(xì)，在脫色搖床上避光孵育５邋ｍｉｎ。逡逑Ｓ清洗細(xì)胞３次，每次５邋ｍｉｎ。逡逑０邋ｐＬ邋ＰＢＳ／甘油混合液（１：１），即可觀察，用熒光顯微鏡觀察并采集細(xì)胞圖片，用Ｉ３個(gè)復(fù)孔。逡逑細(xì)胞中的差異表達(dá)逡逑成體胰腺細(xì)胞中的表達(dá)模式，我們用ｑ和（３細(xì)胞系ＭＩＮ６中ｍｉＲ－１９ｂ的表達(dá)泡細(xì)胞中ｍｉＲ－１９ｂ的表達(dá)水平降低，的下降（圖２－１）。這種差異表達(dá)說(shuō)明ｍｉ胞的增殖或分化過(guò)程。逡逑

胰腺祖細(xì)胞的增殖情況。如圖所示，轉(zhuǎn)染后４８邋ｈ用ｑＲＴ－ＰＣＲ確認(rèn)ｍｉＲ－１９ｂ的過(guò)表達(dá)和逡逑被抑制（圖２－１邋Ａ），再通過(guò)光鏡觀察到ｍｉＲ－１９ｂ明顯的促增殖作用（圖２－１邋Ｂ）。隨后我逡逑們用ＣＣＫ８邋（圖２－１Ｃ）和Ｅｄｕ邋（圖２－１Ｄ）檢測(cè)過(guò)表達(dá)或抑制ｍｉＲ－１９ｂ后胰腺祖細(xì)胞的逡逑增殖情況，發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)ｍｉＲ－１９ｂ可以顯著促進(jìn)胰腺祖細(xì)胞增殖，但是抑制ｍｉＲ－１９ｂ的表逡逑達(dá)卻對(duì)增殖沒(méi)有影響。逡逑Ａ逡逑２00］邋＾逡逑｜邋邐逡逑Ｓ邋１５０＇邐ｐｃｊｗｗ逡逑Ｉ邋－邐Ｉ逡逑５邐ｔｆｗＨ邐＊★＊逡逑ａ：邐ｓｏ邋N邐邐逡逑0邋ｉ0ｉｍWW逡逑uk邋°－５ｌｌ邋１邋ｉ邋■逡逑？邋Ｖ、Ｖ，逡逑Ｂ逡逑ＮＣ邐ｍｉＲ－１９ｂ逡逑ｒｎｍｉｍ逡逑ＮＣＩＮ邐ｍｉＲ－１９ｂＩＮ逡逑－１３－逡逑

ｍｉＲ－１９ｂ的靶基因。逡逑３．４．２雙熒光素酶報(bào)告載體檢測(cè)ｍｉＲ－１９ｂ對(duì)于ＰＴＥＮ的靶向調(diào)控作用逡逑根據(jù)軟件的預(yù)測(cè)結(jié)果，ＰＴＥＮ的３＇ＵＴＲ上有兩個(gè)ｍｉＲ－１９ｂ的靶位點(diǎn)（圖３－１）。為了逡逑確定ｍｉＲ－１９ｂ對(duì)于ＰＴＥＮ的直接靶向作用，我們構(gòu)建了含有著兩個(gè)靶位點(diǎn)的熒光素酶報(bào)逡逑告載體以及海腎熒光素酶報(bào)告載體，將這兩個(gè)載體與ｍｉＲ－１９ｂ共同轉(zhuǎn)染至３Ｔ３細(xì)胞中，逡逑４８ｈ后再用儀器進(jìn)行熒光活性的測(cè)定

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本文編號(hào)：2782994