【摘要】：研究背景:肥胖是冠狀動脈疾病的危險因素之一,同時肥胖參與多種疾病的病理生理過程,比如多發(fā)性硬化癥、糖尿病、胰島素抵抗[1-3]。脂肪組織不僅能夠儲存能量,同時還可分泌多種激素、細胞因子以及代謝產(chǎn)物(比如脂肪因子),這些物質(zhì)通過調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的攝食信號和外周組織的代謝活動來控制全身性能量平衡[4]。在多種病理狀態(tài)下(如冠心病、肥胖等),ROS生成過多,體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)平衡被打破,則會引發(fā)一系列病理反應。腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)對于血管有多種生物效應,有研究證明通過RNA干擾血管緊張素原基因表達會抑制3T3-L1前脂肪細胞的分化,提示脂肪組織中的腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)與脂肪代謝有重要關聯(lián)[5]。由于肥胖狀態(tài)下,脂肪組織中亢進的腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)在高血壓、2型糖尿病等肥胖相關性疾病中發(fā)揮著重要的作用。脂肪組織局部的RAS通過旁分泌或自分泌方式調(diào)節(jié)脂肪細胞自身的增殖分化、因子分泌以及糖脂代謝等,繼而加劇胰島素抵抗,影響機體整體糖脂代謝狀態(tài)[6]。他汀類藥物在治療血脂異常中至關重要,而自噬在脂肪細胞分化成熟過程中是必需的一個關鍵步驟[7]。有研究發(fā)現(xiàn)RAS阻斷劑可促進人前脂肪細胞分化、改善細胞的胰島素敏感性[8]。辛伐他汀和血管緊張素受體拮抗劑的協(xié)同作用是否可以做為治療血脂代謝異常的新策略是非常有意義的。在脂肪細胞代謝過程中AngⅡ與自噬都是非常重要的一部分,而NOX4、LC3B-Ⅱ、p62等蛋白表達的情況及這些因子之間的相互作用及影響,均未見報道。目的:本研究旨在探討AngⅡ在脂肪細胞中誘導的氧化應激反應和脂肪因子分泌情況,觀察辛伐他汀在此過程中表現(xiàn)的生物學效應和分子作用機制。方法:(1)體外培養(yǎng)3T3-L1前體脂肪細胞誘導分化成熟后加藥干預;(2)應用CCK8試劑盒檢測用不同劑量的AngⅡ和不同作用時間干預的脂肪細胞活性變化;(3)應用流式細胞術檢測不同藥物干預后脂肪細胞內(nèi)ROS生成量;(4)應用ELISA試劑盒檢測細胞上清液中l(wèi)eptin、Adiponectin水平;(5)Western Blot(免疫蛋白印跡法)檢測NOX4、LC3B-Ⅱ、p62表達水平。結果:(1)AngⅡ呈濃度/濃度依賴性降低3T3-L1脂肪細胞活性;(2)AngⅡ促進3T3-L1脂肪細胞分泌leptin可被辛伐他汀抑制;(3)AngⅡ促進3T3-L1脂肪細胞中活性氧自由基生成可被辛伐他汀抑制;(4)AngⅡ誘導3T3-L1脂肪細胞中NOX4過表達;(5)辛伐他汀抑制AngⅡ誘導的LC3B-Ⅱ、p62/SQSTM1蛋白表達上調(diào)。結論:AngII誘導的3T3-L1脂肪細胞NOX4過表達會引起ROS生成增多、脂肪因子leptin分泌量升高,辛伐他汀可能通過抑制自噬蛋白LC3B-II和p62表達來抑制Ang II誘導的ROS生成和瘦素分泌從而發(fā)揮保護作用。
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R589.2
【圖文】：

圖 1 光鏡下成熟脂肪細胞（左 20X，右 40X，黑色箭頭所示橘紅色花環(huán)形細胞）2.3 CCK8 試劑盒檢測 3T3-L1 脂肪細胞活性（1）將誘導分化第 10 天左右的成熟脂肪細胞從培養(yǎng)箱中取出，在無菌超凈工作臺內(nèi)用胰蛋白酶消化液消化后接種在 96 孔板中，平均每孔接種 10000 個細胞，過夜。第二天吸去孔內(nèi)完全培養(yǎng)基，向其中加入 100μl 含 1%FBS 的條件培養(yǎng)基進行饑餓處理 12h 后，再改用完全培養(yǎng)基后分別加入不同濃度的 AngⅡ（0、20、40、80、100、120、140μmol/L）進行干預，之后將 96 孔板放入 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 24h。（2）同（1）中將成熟脂肪細胞進行消化、種板、饑餓處理，再改用完全培養(yǎng)基后加入 AngⅡ（80μmol/L）給予不同時間（0、2、4、6、12、24h）在 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中共孵育。（3）在（1）或（2）步驟處理后的細胞從培養(yǎng)箱中取出，在無菌超凈工作臺內(nèi)用 1ml 無菌注射器吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)基，每孔加入 100μl 完全培養(yǎng)基、10μl CCK8

AngⅡ處理組降低（圖 3B）1.25 倍（P<0.05）。然而，在相同條件下檢測 adiponect并未發(fā)現(xiàn)相似改變；與對照組相比，adiponectin 的分泌量與 AngⅡ的濃度改變無關性。根據(jù)以上結果，在后續(xù)實驗中，AngⅡ的作用時間均選取為 2h，作用濃為 80μmol/L。A B

圖 3. AngⅡ促進 3T3-L1 脂肪細胞分泌瘦素可被辛伐他汀抑制。n=3 ,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,****P<0.00013．AngⅡ促進 3T3-L1 脂肪細胞中活性氧自由基生成可被辛伐他汀抑制在實驗中，我們發(fā)現(xiàn)與對照組相比，AngⅡ處理組的 ROS 生成量增加了近 1.4倍（圖 4A,B），而 NAC+AngⅡ和 GKT137831+AngⅡ處理組的 ROS 生成量雖較對照組稍高，但與 AngⅡ組相比都是降低的（P<0.01，圖 4CD,G），具有統(tǒng)計學意義。AngⅡ+辛伐他�。�1μmol/L）組的 ROS 生成量較 AngⅡ組是降低的（P<0.05），而辛伐他�。�10μmol/L）組則沒有類似改變（圖 4E,F,G），說明在此實驗中，不同濃度的辛伐他汀對于 AngⅡ誘導的 ROS 生成的抑制作用是不同的。A B C

【參考文獻】

相關期刊論文 前4條

1 黃志立;張麗君;伍麗華;王妍;楊汝德;;RNA干擾血管緊張素原基因表達對前脂肪細胞3T3-L1分化的影響[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2015年06期

2 高燕;尚文斌;;局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)對脂肪細胞功能的影響[J];醫(yī)學綜述;2013年11期

3 熊力;王南麗;;腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)與心血管病的研究進展[J];中國循證心血管醫(yī)學雜志;2013年02期

4 潘偉男;封芬;陳鋒;陳臨溪;;腎素-血管緊張素系統(tǒng)的新認識[J];中國心血管病研究雜志;2006年10期

相關碩士學位論文 前1條

1 趙志強;RAS阻斷劑對人前脂肪細胞分化及脂聯(lián)素表達的影響[D];天津醫(yī)科大學;2009年

本文編號：2782421