【摘要】：研究背景:肥胖是冠狀動(dòng)脈疾病的危險(xiǎn)因素之一,同時(shí)肥胖參與多種疾病的病理生理過程,比如多發(fā)性硬化癥、糖尿病、胰島素抵抗[1-3]。脂肪組織不僅能夠儲(chǔ)存能量,同時(shí)還可分泌多種激素、細(xì)胞因子以及代謝產(chǎn)物(比如脂肪因子),這些物質(zhì)通過調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的攝食信號和外周組織的代謝活動(dòng)來控制全身性能量平衡[4]。在多種病理狀態(tài)下(如冠心病、肥胖等),ROS生成過多,體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)平衡被打破,則會(huì)引發(fā)一系列病理反應(yīng)。腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)對于血管有多種生物效應(yīng),有研究證明通過RNA干擾血管緊張素原基因表達(dá)會(huì)抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化,提示脂肪組織中的腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)與脂肪代謝有重要關(guān)聯(lián)[5]。由于肥胖狀態(tài)下,脂肪組織中亢進(jìn)的腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)在高血壓、2型糖尿病等肥胖相關(guān)性疾病中發(fā)揮著重要的作用。脂肪組織局部的RAS通過旁分泌或自分泌方式調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞自身的增殖分化、因子分泌以及糖脂代謝等,繼而加劇胰島素抵抗,影響機(jī)體整體糖脂代謝狀態(tài)[6]。他汀類藥物在治療血脂異常中至關(guān)重要,而自噬在脂肪細(xì)胞分化成熟過程中是必需的一個(gè)關(guān)鍵步驟[7]。有研究發(fā)現(xiàn)RAS阻斷劑可促進(jìn)人前脂肪細(xì)胞分化、改善細(xì)胞的胰島素敏感性[8]。辛伐他汀和血管緊張素受體拮抗劑的協(xié)同作用是否可以做為治療血脂代謝異常的新策略是非常有意義的。在脂肪細(xì)胞代謝過程中AngⅡ與自噬都是非常重要的一部分,而NOX4、LC3B-Ⅱ、p62等蛋白表達(dá)的情況及這些因子之間的相互作用及影響,均未見報(bào)道。目的:本研究旨在探討AngⅡ在脂肪細(xì)胞中誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)和脂肪因子分泌情況,觀察辛伐他汀在此過程中表現(xiàn)的生物學(xué)效應(yīng)和分子作用機(jī)制。方法:(1)體外培養(yǎng)3T3-L1前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化成熟后加藥干預(yù);(2)應(yīng)用CCK8試劑盒檢測用不同劑量的AngⅡ和不同作用時(shí)間干預(yù)的脂肪細(xì)胞活性變化;(3)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測不同藥物干預(yù)后脂肪細(xì)胞內(nèi)ROS生成量;(4)應(yīng)用ELISA試劑盒檢測細(xì)胞上清液中l(wèi)eptin、Adiponectin水平;(5)Western Blot(免疫蛋白印跡法)檢測NOX4、LC3B-Ⅱ、p62表達(dá)水平。結(jié)果:(1)AngⅡ呈濃度/濃度依賴性降低3T3-L1脂肪細(xì)胞活性;(2)AngⅡ促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞分泌leptin可被辛伐他汀抑制;(3)AngⅡ促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞中活性氧自由基生成可被辛伐他汀抑制;(4)AngⅡ誘導(dǎo)3T3-L1脂肪細(xì)胞中NOX4過表達(dá);(5)辛伐他汀抑制AngⅡ誘導(dǎo)的LC3B-Ⅱ、p62/SQSTM1蛋白表達(dá)上調(diào)。結(jié)論:AngII誘導(dǎo)的3T3-L1脂肪細(xì)胞NOX4過表達(dá)會(huì)引起ROS生成增多、脂肪因子leptin分泌量升高,辛伐他汀可能通過抑制自噬蛋白LC3B-II和p62表達(dá)來抑制Ang II誘導(dǎo)的ROS生成和瘦素分泌從而發(fā)揮保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R589.2
【圖文】：

圖 1 光鏡下成熟脂肪細(xì)胞（左 20X，右 40X，黑色箭頭所示橘紅色花環(huán)形細(xì)胞）2.3 CCK8 試劑盒檢測 3T3-L1 脂肪細(xì)胞活性（1）將誘導(dǎo)分化第 10 天左右的成熟脂肪細(xì)胞從培養(yǎng)箱中取出，在無菌超凈工作臺(tái)內(nèi)用胰蛋白酶消化液消化后接種在 96 孔板中，平均每孔接種 10000 個(gè)細(xì)胞，過夜。第二天吸去孔內(nèi)完全培養(yǎng)基，向其中加入 100μl 含 1%FBS 的條件培養(yǎng)基進(jìn)行饑餓處理 12h 后，再改用完全培養(yǎng)基后分別加入不同濃度的 AngⅡ（0、20、40、80、100、120、140μmol/L）進(jìn)行干預(yù)，之后將 96 孔板放入 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 24h。（2）同（1）中將成熟脂肪細(xì)胞進(jìn)行消化、種板、饑餓處理，再改用完全培養(yǎng)基后加入 AngⅡ（80μmol/L）給予不同時(shí)間（0、2、4、6、12、24h）在 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中共孵育。（3）在（1）或（2）步驟處理后的細(xì)胞從培養(yǎng)箱中取出，在無菌超凈工作臺(tái)內(nèi)用 1ml 無菌注射器吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)基，每孔加入 100μl 完全培養(yǎng)基、10μl CCK8

AngⅡ處理組降低（圖 3B）1.25 倍（P<0.05）。然而，在相同條件下檢測 adiponect并未發(fā)現(xiàn)相似改變；與對照組相比，adiponectin 的分泌量與 AngⅡ的濃度改變無關(guān)性。根據(jù)以上結(jié)果，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，AngⅡ的作用時(shí)間均選取為 2h，作用濃為 80μmol/L。A B

圖 3. AngⅡ促進(jìn) 3T3-L1 脂肪細(xì)胞分泌瘦素可被辛伐他汀抑制。n=3 ,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,****P<0.00013．AngⅡ促進(jìn) 3T3-L1 脂肪細(xì)胞中活性氧自由基生成可被辛伐他汀抑制在實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)與對照組相比，AngⅡ處理組的 ROS 生成量增加了近 1.4倍（圖 4A,B），而 NAC+AngⅡ和 GKT137831+AngⅡ處理組的 ROS 生成量雖較對照組稍高，但與 AngⅡ組相比都是降低的（P<0.01，圖 4CD,G），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AngⅡ+辛伐他�。�1μmol/L）組的 ROS 生成量較 AngⅡ組是降低的（P<0.05），而辛伐他�。�10μmol/L）組則沒有類似改變（圖 4E,F,G），說明在此實(shí)驗(yàn)中，不同濃度的辛伐他汀對于 AngⅡ誘導(dǎo)的 ROS 生成的抑制作用是不同的。A B C

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 黃志立;張麗君;伍麗華;王妍;楊汝德;;RNA干擾血管緊張素原基因表達(dá)對前脂肪細(xì)胞3T3-L1分化的影響[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年06期

2 高燕;尚文斌;;局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)對脂肪細(xì)胞功能的影響[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年11期

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相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 趙志強(qiáng);RAS阻斷劑對人前脂肪細(xì)胞分化及脂聯(lián)素表達(dá)的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2009年

本文編號：2782421