【摘要】：近年來食物過敏發(fā)病率呈逐年上升的趨勢,發(fā)達(dá)國家每年有3%-4%的成年人發(fā)生食物過敏,兒童及嬰幼兒的發(fā)病率為5%。為了更好地預(yù)防和控制食物過敏的發(fā)生,食物致敏性評價及發(fā)生機(jī)制的研究成為食物過敏領(lǐng)域的研究熱點。目前,食物潛在致敏性評價以外源蛋白的評估策略最為成熟,然而尚未有一套系統(tǒng)的針對食物蛋白的致敏性評估策略。另外,食物過敏發(fā)生過程發(fā)敏階段的免疫學(xué)機(jī)制存在多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,各途徑之間存在多個交匯點,形成一個錯綜復(fù)雜的脫顆粒網(wǎng)絡(luò)體系,其中一些機(jī)制仍有待進(jìn)一步探究。本文選擇有代表性、致敏性不同的蛋白,分別為大豆球蛋白、卵清白蛋白和馬鈴薯酸性磷酸酶,建立BALB/c小鼠模型獲取致敏血清,就大鼠嗜堿性白血病(RBL)細(xì)胞與IgE結(jié)合能力以及脫顆粒能力進(jìn)行了分析,建立一種高反應(yīng)性的細(xì)胞免疫學(xué)評價方法,采用外源蛋白致敏性評估策略中推薦的方法進(jìn)行驗證,研究如何將細(xì)胞免疫學(xué)評價方法和外源蛋白致敏性評估策略推薦方法進(jìn)行互補(bǔ)應(yīng)用,建立一套針對食物蛋白的新的致敏性評估策略,為食物過敏原的風(fēng)險評估和標(biāo)準(zhǔn)化研究提供更加準(zhǔn)確、全面的數(shù)據(jù)支持。另外,我們采用已建立的RBL-2H3細(xì)胞免疫學(xué)模型探究食物過敏發(fā)生過程發(fā)敏階段的免疫學(xué)機(jī)制,剖析肥大細(xì)胞關(guān)鍵信號蛋白Dok-1參與FcεRI介導(dǎo)的脫顆粒信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,對確定抑制食物過敏的潛在靶點具有重要意義。主要研究結(jié)果及結(jié)論如下： (1)建立了高反應(yīng)性的RBL-2H3細(xì)胞免疫學(xué)評價方法。RBL-2H3細(xì)胞免疫學(xué)模型靈敏度高、特異性強(qiáng),能夠區(qū)分不同強(qiáng)度的過敏原,將成為一種用于檢測食物蛋白潛在致敏活性的有效方法；相反地,RBL-1細(xì)胞免疫學(xué)模型不能區(qū)分不同致敏性的食物蛋白,不適合用于食物蛋白致敏性評價。RBL-2H3細(xì)胞免疫學(xué)評價方法與外源蛋白致敏性評估策略推薦的方法(生物信息學(xué)分析、模擬胃液消化實驗和動物模型)評價結(jié)果具有一致性,驗證細(xì)胞免疫學(xué)模型評價結(jié)果的正確性和可行性。 (2)建立了一套針對食物蛋白的致敏性評估策略。首先采用生物信息學(xué)分析食物蛋白與已知過敏原的序列同源性以及線性抗原決定簇,并通過人體血清學(xué)分析食物蛋白特異性IgE進(jìn)行驗證,另外血清中特異性IgE/IgG4比值反映食物蛋白的臨床反應(yīng)性；其次,采用模擬胃液消化實驗分析食物蛋白的抗消化性以及加工處理對其抗消化性的影響；當(dāng)生物信息學(xué)分析、模擬胃液消化實驗的預(yù)測結(jié)果相矛盾時,RBL-2H3細(xì)胞免疫學(xué)評價方法可以充當(dāng)“裁判”的角色,通過分析食物蛋白誘發(fā)細(xì)胞脫顆粒程度,評判食物蛋白的致敏性；最后,采用動物模型觀察不同致敏蛋白引發(fā)的過敏反應(yīng)。綜合分析各種致敏性評價方法的評價結(jié)果,系統(tǒng)地評價食物蛋白的潛在致敏性及其引發(fā)的過敏反應(yīng)。 (3)采用已建立的RBL-2H3細(xì)胞模型研究了Dok-1在肥大細(xì)胞脫顆粒反應(yīng)中的負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制,發(fā)現(xiàn)了一條新的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑�？乖碳cεRI激活后,Dok-1通過與P13K的產(chǎn)物PI(3,4,5)P3相結(jié)合,從胞質(zhì)區(qū)域轉(zhuǎn)移至質(zhì)膜區(qū)域,進(jìn)而被質(zhì)膜區(qū)域的Src家族激酶(如Lyn,Fyn)磷酸化；磷酸化的Dok-1抑制了由TRPC1通道控制的細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流反應(yīng),將Nck招募至質(zhì)膜區(qū)域,通過抑制Ca2+依賴的F-肌動蛋白微絲解聚負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞脫顆粒反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R593.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2777298