【摘要】：第一部分霧化吸入注射用母牛分枝桿菌調(diào)控γδT細(xì)胞對(duì)哮喘小鼠的影響目的:通過提取經(jīng)霧化吸入注射用母牛分枝桿菌干預(yù)的TCR-β-/-小鼠的γδT細(xì)胞過繼免疫治療哮喘小鼠,探討注射用母牛分枝桿菌是否通過調(diào)控γδT細(xì)胞影響哮喘小鼠的氣道炎癥及影響下游細(xì)胞因子IL-4、IFN-γ。方法:按隨機(jī)數(shù)字表法將40只雄性Balb/c小鼠分為4組:正常組(A)、哮喘組(B)、哮喘治療對(duì)照組(C)和哮喘治療干預(yù)組(D)。(TCR-β-/-小鼠分為對(duì)照組和治療干預(yù)組:治療干預(yù)組每天1次,連續(xù)5天霧化吸入注射用母牛分枝桿菌。對(duì)照組予霧化吸入生理鹽水10ml。末次取脾,分離γδT細(xì)胞懸液鼠尾靜脈注射到BALB/C雄性小鼠體內(nèi),得到哮喘治療對(duì)照組(C)、哮喘治療干預(yù)組(D)。)模型組和治療對(duì)照組、治療干預(yù)組各組均經(jīng)卵清蛋白(OVA)致敏和激發(fā)制成小鼠支氣管哮喘模型。C、D組激發(fā)后給予尾靜脈注射提取的經(jīng)霧化吸入生理鹽水干預(yù)和霧化吸入注射用母牛分枝桿菌干預(yù)γδT細(xì)胞,每天一次到激發(fā)結(jié)束。采用肺功能儀檢查各組小鼠肺功能后處死提取肺組織和支氣管肺泡灌洗液(BALF)。病理HE染色觀察肺組織支氣管肺炎癥。離心BALF行炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù);BALF中IFN-γ和IL-4表達(dá)水平用ELISA法檢測(cè);肺組織單個(gè)核細(xì)胞IL-4、IFN-γ占γδT細(xì)胞百分比用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。結(jié)果:哮喘組小鼠氣道反應(yīng)性均高于正常組小鼠,哮喘組小鼠氣道反應(yīng)性均高于哮喘治療對(duì)照組和治療干預(yù)組。哮喘治療干預(yù)組小鼠氣道炎癥病變較哮喘治療對(duì)照組減輕。ELISA結(jié)果顯示,哮喘組BALF中IL-4水平與正常組相比明顯升高,而IFN-γ水平較之明顯降低;哮喘治療對(duì)照組與治療干預(yù)組BALF中IL-4水平與哮喘組相比明顯降低,而IFN-γ水平教之升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:哮喘組小鼠γδT淋巴細(xì)胞分泌的IL-4與正常組相比明顯增高,IFN-γ明顯降低,顯示向Th2細(xì)胞分化的特征,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。哮喘治療對(duì)照組與治療干預(yù)組小鼠肺內(nèi)的γδT細(xì)胞分泌IL-4與哮喘組對(duì)比明顯減低,IFN-γ明顯增高,顯示向Th1細(xì)胞分化的特征,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:霧化吸入母牛分枝桿菌可以減輕OVA致敏引起的Th2優(yōu)勢(shì)免疫應(yīng)答,調(diào)節(jié)哮喘Th1/Th2免疫失衡。霧化吸入注射用母牛分枝桿菌通過調(diào)控γδT細(xì)胞影響哮喘小鼠的氣道炎癥反應(yīng),其效應(yīng)與調(diào)節(jié)細(xì)胞因子分泌有關(guān)。第二部分過繼免疫γδT細(xì)胞對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥及對(duì)細(xì)胞因子的影響目的:通過鼠尾靜脈過繼免疫γδT細(xì)胞干預(yù)哮喘小鼠模型,探討過繼免疫γδT細(xì)胞對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥及對(duì)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-1β、IL-4和IL-18的影響。方法:按隨機(jī)數(shù)字表法將24只雄性Balb/c小鼠分為3組:正常組(A)、哮喘組(B)、哮喘治療組(C),每組8只。制成小鼠支氣管哮喘模型(卵清蛋白(OVA)致敏和激發(fā))。C組激發(fā)后給予鼠尾靜脈過繼免疫γδT細(xì)胞治療,每天一次到激發(fā)結(jié)束。采用肺功能儀檢查各組小鼠肺功能后處死提取肺組織和支氣管肺泡灌洗液(BALF)。病理HE染色觀察肺組織支氣管肺炎癥。離心BALF行炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù);檢測(cè)各組小鼠BALF中IL-1β、IL-18、IL-4和IFN-γ表達(dá)水平采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實(shí)驗(yàn);肺組織單個(gè)核細(xì)胞IL-4、IFN-γ占γδT細(xì)胞百分比采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。結(jié)果:哮喘組小鼠氣道反應(yīng)性均高于正常組小鼠,哮喘組小鼠氣道反應(yīng)性高于哮喘治療組。哮喘治療組小鼠氣道炎癥病變較哮喘組減輕。ELISA結(jié)果顯示,哮喘組BALF中IFN-γ水平與正常組相比明顯降低,而BALF中IL-1β、IL-4和IL-18水平與正常組相比明顯升高;哮喘治療組BALF中IFN-γ水平與哮喘組相比明顯升高,而BALF中IL-1β、IL-4和IL-18水平與哮喘組相比明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:哮喘組小鼠γδT淋巴細(xì)胞分泌的IFN-γ與正常組對(duì)比明顯降低,IL-4明顯增高,顯示向Th2細(xì)胞分化的特征,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。哮喘治療組小鼠肺內(nèi)的γδT細(xì)胞分泌IFN-γ與哮喘組對(duì)比明顯增高,IL-4明顯減低,顯示向Th1細(xì)胞分化的特征,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:鼠尾靜脈過繼免疫γδT細(xì)胞能減輕哮喘小鼠氣道炎癥,降低IL-1β、IL-4和IL-18水平,升高IFN-γ水平,減輕OVA致敏引起的Th2優(yōu)勢(shì)免疫應(yīng)答。第三部分霧化吸入注射用母牛分枝桿菌對(duì)哮喘小鼠NLRP3炎癥小體及IL-1β和IL-18的影響目的:觀察霧化吸入注射用母牛分枝桿菌對(duì)哮喘小鼠外周血中單個(gè)核細(xì)胞中NLRP3炎癥小體表達(dá)水平及血清中下游因子白細(xì)胞介素1β(IL-1β)和白細(xì)胞介素18(IL-18)水平變化,探討霧化吸入注射用母牛分枝桿菌對(duì)哮喘小鼠NLRP3炎癥小體及血清中IL-1β和IL-18的影響。方法:按隨機(jī)數(shù)字表法將40只雄性Balb/c小鼠分為4組:正常組(A)、哮喘組(B)、哮喘治療組(C)和哮喘干預(yù)組(D)。制成小鼠支氣管哮喘模型(卵清蛋白(OVA)致敏和激發(fā))。C組激發(fā)后給予霧化吸入注射用母牛分枝桿菌,每天一次。D組激發(fā)前給予注射用母牛分枝桿菌霧化吸入,每天一次。采用肺功能儀檢查各組小鼠肺功能后處死提取肺組織和支氣管肺泡灌洗液(BALF)。病理HE染色觀察肺組織支氣管肺炎癥。離心BALF行炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù);檢測(cè)各組小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞中NLRP3用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法。檢測(cè)各組小鼠血清中IL-1β和IL-18水平用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果:哮喘組小鼠氣道反應(yīng)性均高于正常組小鼠,哮喘組小鼠氣道反應(yīng)性均高于小鼠哮喘治療組和干預(yù)組。哮喘組小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞中NLRP3、血清中IL-1β和IL-18水平均高于正常組小鼠(P0.01);哮喘組小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞中NLRP3及血清中IL-1β和IL-18水平均高于小鼠哮喘模型治療組和干預(yù)組(P0.05)。結(jié)論:哮喘小鼠外周血NLRP3炎癥小體及下游因子IL-1β和IL-18水平升高,NLRP3炎癥小體通路可能促進(jìn)了哮喘的發(fā)病過程。霧化吸入注射用母牛分枝桿菌能減輕支氣管哮喘小鼠氣道炎癥,其效應(yīng)與調(diào)節(jié)NLRP3炎癥小體及血清中IL-1β和IL-18有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R562.25
【圖文】：

肺組織組織病理學(xué)表現(xiàn)(HE染色×40)

平滑肌略見肥大增生，氣道和血管周圍可見稍多淋巴細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)。干預(yù)組鏡下見大致同治療組，淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)之減少。normal group (A) asthma group (B)treatment group (C) prevention group（D）

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1 王寧;王立軍;任筱

本文編號(hào)：2773064