【摘要】：目的:建立血脂異常以及2型糖尿病的中年雄性Sprague-Dawlay(SD)大鼠模型,探討高脂和2型糖尿病對(duì)生殖系統(tǒng)的影響關(guān)系的研究。本研究通過(guò)建立高脂血癥和糖尿病大鼠模型,研究睪丸形態(tài)學(xué)HE染色、睪丸ABP、INHB表達(dá)水平改變、血清T水平,探討高脂血癥和糖尿病對(duì)生精功能的影響,及其可能的機(jī)制。方法:挑選無(wú)特定病原體(SPF級(jí)),健康雄性SD大鼠60只,每只通過(guò)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行編號(hào)后,隨機(jī)編成A、B、C三個(gè)實(shí)驗(yàn)組:A對(duì)照組(n=15)、B高脂組(n=15)、C糖尿病組(n=30)。A對(duì)照組(n=15),用普通飼料飼養(yǎng);B高脂組(n=15),用高脂飼料飼養(yǎng);C糖尿病組(n=30),用高脂飼料飼養(yǎng)24w后,腹腔注射20mg/kg STZ,對(duì)照組和高脂組均予以等量的檸檬酸注射液代替;從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始到36w末,分別檢測(cè)每組大鼠的體重、血糖、血清甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、胰島素濃度,并剔除未成模大鼠。造模成功后,處死各組造模成功的大鼠,在頸動(dòng)脈處采血,離心取血清,檢測(cè)各組大鼠血清的T水平;立即分離每一組大鼠其中一側(cè)睪丸組織,全部浸泡在Bouin固定液里,在室溫條件下,儲(chǔ)存48 h后,送廣西醫(yī)科大學(xué)免疫組化實(shí)驗(yàn)中心,對(duì)睪丸標(biāo)本進(jìn)行包埋以及切片。取對(duì)側(cè)睪丸組織行以下研究,(1)睪丸組織切片HE染色,用OLYMPUS BX53顯微鏡和軟件檢測(cè)觀察睪丸組織結(jié)構(gòu)形態(tài)學(xué)變化,生精細(xì)胞數(shù)目;(2)分別采用免疫組化方法、Western Blot檢測(cè)三組大鼠睪丸ABP及INH B蛋白表達(dá)差異。收集并整理全部實(shí)驗(yàn)所獲得數(shù)據(jù)后,采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件分析所獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),采用P0.05來(lái)作為實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果:(1)對(duì)三組大鼠的體重進(jìn)行比較,對(duì)照組體重最重,高脂組則次之,糖尿病組最輕;高脂組和糖尿病組高密度脂蛋白、血清膽固醇、低密度脂蛋白及甘油三酯較對(duì)照組升高;高脂組和糖尿病組的放免法測(cè)空腹血糖、穩(wěn)態(tài)胰島素抵抗指數(shù)較對(duì)照組升高,而糖尿病組的放免法測(cè)空腹血糖、穩(wěn)態(tài)胰島素抵抗指數(shù)較高脂組升高;糖尿病組的空腹血糖較對(duì)照組及高脂組升高;高脂組與對(duì)照組的空腹血糖未升高,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以上的代謝數(shù)據(jù)表明高脂及糖尿病模型大鼠造模已經(jīng)成功;(2)HE染色結(jié)果與對(duì)照組相比,高脂組和糖尿病組大鼠睪丸生精小管基膜不完整,厚薄程度不均一,生精上皮基膜與支持細(xì)胞連接較為疏松,生精細(xì)胞排列疏松混亂,間隙變寬,層數(shù)減少,數(shù)量明顯減少(P0.05);(3)ABP、INH B及T表達(dá)結(jié)果與對(duì)照組相比,高脂組大鼠睪丸ABP表達(dá)明顯增多(P0.05)、INH B表達(dá)明顯減少(P0.05),糖尿病組大鼠睪丸ABP及INH B表達(dá)均明顯減少(P0.05),高脂組和糖尿病組模型大鼠的血清T水平均明顯降低(P0.01);與高脂組相比,睪丸ABP及INH B表達(dá)均明顯減少(P0.05),糖尿病組大鼠的血清T水平均明顯降低(P0.01)。結(jié)論 高脂血癥及糖尿病可能通過(guò)破壞睪丸組織正常結(jié)構(gòu),降低T合成分泌、高脂可使ABP表達(dá)增多、INH B表達(dá)減少,糖尿病可使ABP及INH B表達(dá)均減少,導(dǎo)致生精功能障礙。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R587.1;R589.2
【圖文】：

對(duì)照組 高脂組 糖尿病組圖 3-1 三組大鼠睪丸 HE 染色光鏡下圖片（X200，X400）Figure 3-1 The HE staining light microscopy pictures of testis in three groups of rats(X200，X403.3 免疫組化三組大鼠免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ABP 及 INHB 蛋白的陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)為棕紅色或者棕黃色，每一組標(biāo)本圖片背景清晰，染色較好。ABP 及 IN蛋白主要在睪丸各級(jí)生精細(xì)胞胞漿中表達(dá)，其余細(xì)胞及細(xì)胞核未見(jiàn)明顯達(dá)。每一組大鼠睪丸組織的各級(jí)生精細(xì)胞的細(xì)胞核免疫組化染色主要為色，各級(jí)生精細(xì)胞胞質(zhì)、精子頭、體與尾部及睪丸支持細(xì)胞中均未觀察ABP 及 INHB 蛋白的表達(dá)。對(duì)照組大鼠睪丸組織 ABP 及 INHB 蛋白的棕色或者棕紅色陽(yáng)性染色及分布均勻；高脂組大鼠睪丸組織 ABP 棕黃色或

高脂和糖尿病大鼠血清 T、睪丸 ABP 及 INH B 表達(dá)水平改變及對(duì)生精功能的影響 2018 屆碩士學(xué)位論0.05）；與對(duì)照組相比，糖尿病組 ABP 及 INHB 表達(dá)量均顯著降低，二均有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與高脂組相比，糖尿病組 INHB 表達(dá)量顯降低（P<0.05），有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（見(jiàn)圖 3-2、圖 3-3、表 3-2、圖 3

0.05）；與對(duì)照組相比，糖尿病組 ABP 及 INHB 表達(dá)量均顯著降低，二均有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與高脂組相比，糖尿病組 INHB 表達(dá)量顯降低（P<0.05），有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（見(jiàn)圖 3-2、圖 3-3、表 3-2、圖 3-對(duì)照組 高脂組 糖尿病組圖 3-2 三組大鼠睪丸組織 ABP 蛋白的免疫組化表達(dá)示意圖（×400）Figure 3-2 The Expression of Immunohistochemical forABP Protein in Testis of Three Groups

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