【摘要】：糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy, DN)是糖尿病最常見的慢性并發(fā)癥之一,微量白蛋白尿是其早期臨床表現(xiàn),屬可逆性改變。DN病理改變包括腎小球肥大、細(xì)胞外基質(zhì)增多、腎小球硬化和間質(zhì)纖維化,糖代謝異常與DN發(fā)生密切相關(guān),且近期有研究證實(shí)mTOR即哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白在DN發(fā)生中起重要作用。胰升糖素樣肽1 (glucagon-like peptide-1, GLP-1)作為新的降糖藥物,已用于2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)病人,證實(shí)能顯著降低糖尿病患者的血糖。但GLP-1應(yīng)用于糖尿病前期人群的研究相對(duì)較少,且近年來越來越多的研究開始關(guān)注GLP-1的降糖外療效,如對(duì)大血管及微血管的保護(hù)作用等。故本課題擬開展相關(guān)研究,觀察早期應(yīng)用GLP-1類似物—利拉魯肽是否能減少糖耐量受損(Impaired Glucose Tolerance, IGT)大鼠的糖尿病發(fā)生率及是否能延緩其腎損傷。同時(shí)研究利拉魯肽是否能延緩T2DM大鼠腎損傷及其機(jī)制,即證實(shí)利拉魯肽的腎保護(hù)作用是否與PI3K-AKT-mTOR通路相關(guān)。相信研究結(jié)果將為闡明利拉魯肽的腎保護(hù)作用機(jī)制,為利拉魯肽在糖尿病前期和糖尿病患者中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。[目的]1.研究利拉魯肽對(duì)IGT大鼠腎損傷的保護(hù)作用2.研究利拉魯肽對(duì)T2DM大鼠腎損傷的保護(hù)作用3.研究利拉魯肽延緩糖尿病腎損傷的可能機(jī)制[方法]選擇4周齡的SD大鼠,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為高脂飼料組和普通飼料組。予高脂飼料喂養(yǎng)8周后,分別腹腔注射10mg/kg和20mg/kg的鏈脲佐菌素(streptozotocin, STZ),構(gòu)建IGT大鼠及T2DM大鼠模型。建模成功后,IGT大鼠隨機(jī)分為IGT對(duì)照組、利拉魯肽治療組,并設(shè)立正常對(duì)照組；T2DM大鼠隨機(jī)分為糖尿病對(duì)照組,胰島素治療組和利拉魯肽治療組,同樣設(shè)立正常對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)期間每周檢測(cè)血糖和體重,高脂喂養(yǎng)8周、IGT大鼠干預(yù)5周和糖尿病干預(yù)5周后分別行口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(Oral glucose tolerance test, OGTT)以評(píng)估胰島功能情況,并測(cè)血脂、血尿素、血肌酐、胱抑素C和尿白蛋白/肌酐比值等指標(biāo)；大鼠處死后留腎臟組織,行HE染色及電鏡檢測(cè),觀察腎組織形態(tài)學(xué)改變；行Masson染色,觀察腎組織纖維化情況；免疫組化檢測(cè)大鼠腎組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1 (transforming growth factor β1, TGFβ1)、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor, CTGF)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表達(dá)情況；Western Blot法檢測(cè)腎組織mTOR和P70S6k蛋白表達(dá)情況：實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)法(Relative quantification in real time reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)檢測(cè)腎組織mTOR、CTGF、VEGF和NOX-4 mRNA的表達(dá)情況。研究利拉魯肽早期干預(yù)是否能延緩糖尿病的發(fā)生及改善IGT大鼠的腎損傷；利拉魯肽是否通過抑制mTOR通路,延緩T2DM的腎損傷。[結(jié)果]1.高脂喂養(yǎng)8周后,與普通飼料組大鼠比,高脂飼料組大鼠甘油三脂水平升高,體重及雙側(cè)附睪脂肪重量均明顯增高(均P0.01)；2.與IGT對(duì)照組相比,利拉魯肽治療組大鼠體重、雙腎/體重比值、雙側(cè)附睪脂肪/體重比值、血糖、總膽固醇及甘油三脂水平均明顯減低(均P0.05)；3.與胰島素治療組相比,T2DM利拉魯肽治療組大鼠體重、雙腎/體重比值、雙側(cè)附睪脂肪/體重比值、血糖、總膽固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白、胱抑素C及尿白蛋白/肌酐比值均明顯降低(均P0.05)；4.T2DM大鼠腎小球肥大、系膜細(xì)胞明顯擴(kuò)張,且足細(xì)胞數(shù)量明顯減少；但利拉魯肽治療后腎小球肥大和系膜細(xì)胞擴(kuò)張情況明顯好轉(zhuǎn),足細(xì)胞數(shù)量明顯增多；5.免疫組化研究證實(shí),與糖尿病對(duì)照組及胰島素治療組相比,利拉魯肽治療組腎組織TGF-β1、CTGF及VEGF表達(dá)明顯減少；6.與胰島素治療組相比,利拉魯肽治療組腎組織的p-mTOR和p-p70S6k蛋白的表達(dá)明顯減少,且腎組織CTGF、VEGF及NOX-4 mRNA的表達(dá)也明顯降低。[結(jié)論]糖耐量受損大鼠已出現(xiàn)輕度的腎臟病理學(xué)改變,而早期應(yīng)用利拉魯肽干預(yù)可延緩糖耐量受損大鼠進(jìn)展為糖尿病,并改善其腎損傷。研究發(fā)現(xiàn)利拉魯肽在降糖同時(shí),可明顯改善T2DM大鼠的腎損傷,延緩糖尿病腎病進(jìn)展；利拉魯肽可能是作用于腎臟的GLP-1受體,繼而抑制mTOR通路,發(fā)揮其腎保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.2
【圖文】：

ＩＧＴ大鼠干預(yù)５周后，利拉魯肚治療組大鼠空腹血搪明顯低于ＩＧＴ對(duì)照組大鼠逡逑（均Ｐ＜０．０５）；而利拉魯化治療組大鼠空腹血糖與正常對(duì)照組相比，無明顯差異（Ｐ逡逑＞０．０５）。詳見表１－５和圖１－５。逡逑邐表１－５邋ＩＧＴ大鼠藥物干預(yù)期間血糖變化邐逡逑組另ｉｊ邐Ａ１組邐Ａ２組邐Ａ３組逡逑干煩后逡逑１Ｗ邐５．３邋功．５＂邐６．化邋０．４＆Ａ邐５．２±０．７逡逑２Ｗ邐５．３邋功．４＂邐６．１功．５＆＆邐５．化邋０．５逡逑３Ｗ邐５．４±０．５＂邐氏２±０．６＆＆邐５．３±０．５逡逑４Ｗ邐５．７±０．４邋‘邐６．３±０．６＆＆邐５．６功．６逡逑５Ｗ邐６．２±０．５＂邐７邋出邋０．８＆么邐５．狂邋０．５逡逑ＶＳ邋出ｅｇｒｏ叩邋Ａ２邐＊邋ｆ邋＜０．０５邋＂／＊＜０．０１；邋ｖｓ邋ｔｈｅ邋ｇｒｏ叩邋Ａ３邐么／＊＜０．０５邐戶＜０．０１．逡逑：｜逡逑。５邋－邐邐邐邐邐Ｉ邐１逡逑＾邐Ａ１逡逑Ｉ邋４邋－邐—Ａ２逡逑害邋３邋．逡逑山逡逑２邋■逡逑１邋■逡逑０邋Ｉ邐＇邐＊邐＇邐＇邐＇逡逑１Ｗ邐２Ｗ邐３Ｗ邐４Ｗ邐５Ｗ逡逑Ｔｉｍｅ（ｗｅｅｋ）逡逑圖１－５邋ＩＧＴ大鼠藥物干預(yù)期間血糖變化逡逑－１８－逡逑

干預(yù)５周時(shí)，利拉魯膚治療組大鼠的ＴＧ和ＴＣ水平明顯低于ＩＧＴ對(duì)照姐大鼠，逡逑差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Ｐ＜０．０１），但兩組間ＬＤレＣ和ＨＤレＣ水平無明顯差異（均Ｐ逡逑＞０．０１）。詳見表１－９和圖１－９。逡逑邐表１－９邋ＩＧＴ大鼠藥物干預(yù)５Ｗ血脂變化邐逡逑Ａ１組邋Ａ２}D邋Ａ３組逡逑ＴＧ邋（ｍｍｏｌ／Ｌ）邐０．５±０．１邋＊＊邐１．０±０．２|!邐０．５±０．１逡逑ＴＣ邋（ｍｍｏ化）邐１．５±０．３＂邐２．０±０．２＾＾邐１．６±０．１邐。逡逑ＬＤＬ－Ｃ邋（ｍｍｏｌ／Ｌ）邐０．７±０．３邐０．８±０．２邐０．７±０．２逡逑ＨＤＬＣ邋（ｍｍｏｌ／Ｌ）邐１．４±０．４邐１．牡０．３邐１．５±０．３逡逑－２１邋－逡逑

島素水平明顯高于自身空腹、１５ｍｉｎ和３０ｍｉｎ水平，也明顯高普通飼料組相應(yīng)時(shí)點(diǎn)水逡逑平，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Ｐ＜０．０１）；；高脂飼料組大鼠膀島素ＡＵＣ值明顯高于逡逑普通飼料組大鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ＰＣＯ．Ｏｌ）。詳見表１－１０和圖１－１０逡逑－２２－逡逑

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2767939