【摘要】：第一部分 糖尿病小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞脂向分化能力目的：體外誘導(dǎo)db/db鼠和db/m鼠的BMSCs向成脂細(xì)胞分化,比較其脂向分化能力有無差異。方法:取8w齡db/db鼠和db/m鼠的BMSCs,通過流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)其細(xì)胞表面標(biāo)記物,CCK-8法檢測(cè)比較兩種小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖能力的差異,成脂誘導(dǎo)21d后行油紅O染色;應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)PPARγ、C/EBPα的基因表達(dá)；通過WesternBlot檢測(cè)成脂細(xì)胞相關(guān)因子PPARγ、C/EBPα蛋白表達(dá)量。結(jié)果：1.兩種小鼠的BMSCs均高度表達(dá)CD29、CD44,而低表達(dá)CD34、CD45(db/m鼠BMSCs陽性率分別為99.5%、99.1%、2.7%和2.8%,db/db鼠BMSCs陽性率分別為94.6%、97.4%、3.1%和4.1%)；2.db/db鼠BMSCs增殖能力稍低于對(duì)照組db/m鼠(P0.05)；3.油紅O染色示db/db組骨脂肪滴數(shù)量明顯多于db/m組,且脂肪滴的體積亦大于db/m組；4.RT-PCR檢測(cè)顯示成脂誘導(dǎo)21d,db/db組PPARγ和C/EBPa基因表達(dá)量均明顯高于db/m組(P0.05)；5.Western Blot檢測(cè)顯示成脂誘導(dǎo)21d,db/db組PPARγ和C/EBPα蛋白表達(dá)量均明顯高于db/m組(P0.05)結(jié)論：1.db/db鼠和db/m鼠的p3 BMSCs的活力強(qiáng)、純度高,增殖能力無明顯差異；2.db/db鼠BMSCs脂向分化能力明顯強(qiáng)于db/m鼠。第二部分EGb761對(duì)糖尿病小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化能力的影響目的：db/db鼠BMSCs成骨誘導(dǎo)分化的過程中加入EGb761進(jìn)行干預(yù),觀察其對(duì)BMSCs骨向分化能力的影響。方法：取8w齡db/db鼠的BMSCs,CCK-8法篩選EGb761對(duì)db/db鼠BMSCs的細(xì)胞毒性,選取最佳濃度干預(yù)db/db鼠BMSCs成骨分化,第]4d行茜素紅染色,測(cè)定ALP活性,RT-PCI檢測(cè)ALP、RUNX2基因的表達(dá),Western Blot檢測(cè)ALP、RUNX2蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果：1.濃度在1000 mg/L以下的EGb761對(duì)細(xì)胞的生長增值無明顯細(xì)胞毒作用,選取最佳刺激濃度10mmg/L；2.茜素紅染色示：EGb761干預(yù)組與誘導(dǎo)組相比礦化結(jié)節(jié)較大,數(shù)量較多,染色較深,呈現(xiàn)為紅褐色：EGb761干預(yù)組ALP活性強(qiáng)于誘導(dǎo)組(P0.05)；3.與正常成骨誘導(dǎo)組相比,EGb761干預(yù)組ALP和RUNX 2基因表達(dá)量均明顯增強(qiáng)(P0.05)；4.與正常成骨誘導(dǎo)組相比,EGb761干預(yù)組ALP和RUNX 2蛋白表達(dá)水平均明顯上升(P0.05)。結(jié)論：EGb761可促進(jìn)db/db小鼠BMSCs向成骨細(xì)胞分化。第三部分EGb761對(duì)糖尿病小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化能力的影響目的：db/db鼠BMSCs成脂分化的過程中加入EGb761進(jìn)行干預(yù),觀察BMSCs脂向分化能力是否減弱,初探EGb761對(duì)BMSCs脂向分化的影響及可能機(jī)制。方法：取8w齡db/db鼠BMSCs,成脂分化過程中予EGb761進(jìn)行干預(yù),21d后行油紅O染色,RT-PCI檢測(cè)PPARγ、C/EBPα和β-catenin的基因表達(dá),Western Blc檢測(cè)PPARγ、C/EBPα和β-catenin的蛋白表達(dá)。結(jié)果：1.油紅O染色示EGb761干預(yù)組脂肪滴數(shù)量明顯少于正常誘導(dǎo)組,且脂肪滴的體積亦小于正常誘導(dǎo)組；2.RT-PC檢測(cè)顯示成脂誘導(dǎo)21d,EGb761干預(yù)組PPARγ和C/EBPa基因表達(dá)量均明顯低于正常誘導(dǎo)組(P0.05),而β-catenin的基因表達(dá)量明顯高于正常誘導(dǎo)組(P0.05)；3Western Blot檢測(cè)顯示EGb761干預(yù)組PPARγ和C/EBPα蛋白表達(dá)量均明顯低于正常誘導(dǎo)組(P0.05),而β-catenin的蛋白表達(dá)量明顯高于正常誘導(dǎo)組(P0.05)。結(jié)論：EGb761可抑制db/db鼠BMSCs向脂肪細(xì)胞分化,可能機(jī)制之一是EGb761可調(diào)節(jié)BMSCs成脂分化過程中Wnt通路部分相關(guān)基因的表達(dá)水平。
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.1

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本文編號(hào)：2767891