【摘要】：目的:類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是臨床表現(xiàn)以滑膜炎、對稱性關節(jié)炎和骨質破壞為主的慢性自身免疫性疾病。RA炎癥所致的骨質丟失和破壞不能及時得到修復與重建,成骨細胞參與的骨形成與破骨細胞參與的骨吸收之間的動態(tài)平衡遭到破壞,導致骨量流失、骨密度和骨結構的異常引發(fā)骨質疏松(osteoporosis,OP),常伴有關節(jié)功能障礙及活動受限。本實驗通過研究IL-35對成骨細胞增殖、凋亡及其對成骨細胞分泌血管新生因子的影響,以及上述作用和Wnt/β-catenin信號通路之間的關系,來探討IL-35對骨形成的影響,為RA合并OP提供新的治療方向。方法:利用細胞培養(yǎng)技術培養(yǎng)成骨細胞細胞系MC3T3-E1,用不同濃度的IL-35(0-100ng/ml)刺激成骨細胞,CCK8法檢測細胞增殖情況,FCM分析細胞凋亡率,RT-PCR檢測FGF-2,VEGF及其受體Flt-1和Flk-1 m RNA的表達。加入Wnt/β-catenin抑制劑DKK-1(0.1ug/ml),加入不同濃度的IL-35共孵育,RT-PCR檢測VEGF m RNA的表達。結果:加入不同濃度的IL-35刺激后,隨IL-35濃度升高,光吸收值增大,與對照組相比,細胞增殖能力增強,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。經(jīng)IL-35刺激后,25ng/ml組(4.25±0.35%)。50ng/ml組(3.0±0.14%)和100ng/ml組(1.3±0.28%)成骨細胞的凋亡率明顯低于對照組的凋亡率(6.35±0.64%),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),且升高趨勢和IL-35濃度梯度成正比。隨著IL-35濃度的升高,與對照組相比,成骨細胞內(nèi)FGF-2,VEGF,Flt-1 m RNA表達量均明顯增加(P0.05),未檢測到Flk-1m RNA的表達。經(jīng)DKK-1阻斷后,與對照組相比成骨細胞內(nèi)VEGF m RNA明顯減少且與IL-35濃度的升高呈負相關,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:IL-35可以促進成骨細胞增殖,抑制其凋亡。IL-35可能通過Wnt/β-catenin通路發(fā)揮促進成骨細胞分泌血管新生因子FGF-2,VEGF及其受體Flt-1。
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R593.22
【圖文】：

中國醫(yī)科大學碩士學位論文3 結果濃度的 IL-35 對成骨細胞增殖能力的影響濃度 IL-35(0ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)與成骨細胞，隨 IL-35 濃度升高（25-100ng/ml），光吸收值增大，細胞（0ng/ml）明顯增強，差異有統(tǒng)計學意義（*P<0.05）。說明 IL細胞增殖，且與 IL-35 濃度呈正相關。

【參考文獻】

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本文編號：2761163