【摘要】：目的:觀察糖尿病大鼠肺損傷的變化及高糖刺激Ⅱ型肺泡上皮A549細(xì)胞的變化,探討激動(dòng)線粒體乙醛脫氫酶2(aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)對(duì)糖尿病大鼠肺損傷模型及高糖刺激的Ⅱ型肺泡上皮A549細(xì)胞中炎性小體主要成員核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase-1(cysteinyl aspartate specific protease-1,Caspase-1)生成的影響。方法:第一部分:復(fù)制Ⅰ型糖尿病大鼠肺損傷模型,實(shí)驗(yàn)分組為4組:(1)對(duì)照組(CON組);(2)低劑量乙醇組(Et OH組);(3)糖尿病組(DM組);(4)糖尿病+低劑量乙醇組(DM+Et OH組),分別喂養(yǎng)至6周和12周。稱取大鼠體重及肺濕重,計(jì)算肺系數(shù);HE染色觀察肺臟形態(tài)變化;Masson和天狼星紅染色觀察肺臟纖維化變化;透射電鏡觀察肺臟超微結(jié)構(gòu)變化;Western blot檢測(cè)肺臟ALDH2及NLRP3炎性小體主要成員NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白的表達(dá)。第二部分:體外培養(yǎng)Ⅱ型肺泡上皮A549細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分4組:(1)對(duì)照組(25 mmol/L高糖完全培養(yǎng)基,CON組);(2)ALDH2激動(dòng)劑Alda-1組(25 mmol/L高糖完全培養(yǎng)基+20μmol/L Alda-1組);(3)ALDH2阻斷劑Daidzin組(25 mmol/L高糖完全培養(yǎng)基+60μmol/L Daidzin組);(4)Alda-1+Daidzin組(25 mmol/L高糖完全培養(yǎng)基+ALDH2激動(dòng)劑20μmol/L Alda-1組+ALDH2阻斷劑60μmol/L Daidzin組),干預(yù)處理24 h后,MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力,DHE熒光染色檢測(cè)細(xì)胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞遷移情況,Western blot檢測(cè)ALDH2及NLRP3炎性小體主要成員NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白的表達(dá)。結(jié)果:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明:與CON組相比,DM組大鼠肺系數(shù)明顯增大(P0.05),肺組織病理改變加重,膠原纖維增加明顯,超微結(jié)構(gòu)損傷明顯,且12周較6周損傷加重,ALDH2蛋白表達(dá)明顯降低(P0.05);6周時(shí)NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表達(dá)明顯升高(P0.05);12周時(shí)NLRP3、ASC蛋白表達(dá)明顯升高(P0.05),Caspase-1蛋白表達(dá)未見(jiàn)明顯變化(P0.05)。與DM組相比,DM+Et OH組肺組織病理改變減輕,膠原纖維減少,超微結(jié)構(gòu)損傷減輕,ALDH2蛋白表達(dá)明顯升高(P0.05),6周時(shí)NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表達(dá)明顯降低(P0.05),12周時(shí)NLRP3、ASC蛋白表達(dá)明顯降低(P0.05),Caspase-1蛋白表達(dá)未見(jiàn)明顯變化(P0.05)。Ⅱ型肺泡上皮A549細(xì)胞干預(yù)后顯示:與CON組相比,Alda-1組細(xì)胞增殖活力無(wú)明顯變化,細(xì)胞ROS水平和細(xì)胞遷移率均明顯降低(P0.05),ALDH2蛋白表達(dá)明顯增加(P0.05),炎性小體主要成員NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表達(dá)明顯降低(P0.05);Daidzin組細(xì)胞增殖活力、細(xì)胞ROS水平、細(xì)胞遷移率、ALDH2蛋白和ASC蛋白表達(dá)均無(wú)明顯變化,NLRP3蛋白表達(dá)明顯升高(P0.05),Caspase-1蛋白表達(dá)明顯降低(P0.05);與Alda-1組相比,Alda-1+Daidzin組細(xì)胞增殖活力及ROS水平無(wú)明顯變化,細(xì)胞遷移率明顯增高(P0.05),ALDH2蛋白表達(dá)明顯降低(P0.05),NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表達(dá)均明顯增高(P0.05)。結(jié)論:糖尿病大鼠肺組織ALDH2蛋白表達(dá)降低,炎性小體表達(dá)增加;低濃度乙醇促進(jìn)ALDH2蛋白表達(dá)減輕糖尿病大鼠肺組織損傷,其機(jī)制可能與降低NLRP3炎性小體的表達(dá)有關(guān),且ALDH2保護(hù)可能呈時(shí)間依賴性;提高ALDH2蛋白的表達(dá)可減輕高糖誘導(dǎo)的Ⅱ型肺泡上皮A549細(xì)胞損傷,其機(jī)制可能與降低A549細(xì)胞ROS水平,降低炎性小體的表達(dá),減輕炎癥反應(yīng)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R587.2;R563
【圖文】：

且 DM 組 12 周肺系數(shù)升高更加顯著（P<0.01）；與 DM 組EtOH 組 6 周和 12 周肺系數(shù)均明顯降低（P<0.05），提示低濃度乙醇鼠可有效降低肺系數(shù)（見(jiàn)表 1 和圖 1），減輕肺炎癥滲出和肺纖維化的表 1 6W 和 12W 不同處理組大鼠肺系數(shù)變化（ x±s , n=6） Changes in lung coefficient in rats treated with 6W and 12W in different groups ( x±肺系數(shù)分組 6W 12WCON 組 3.7±0.05 3.73±0.01EtOH 組 3.80±0.02 3.00±0.01**DM 組 5.45±0.03** 7.85±0.01**DM+EtOH 組 4.50±0.01^^ 7.08±0.14^^5, vs CON; ^^ P<0.05, vs DM

20圖 5. 6 周和 12 周不同處理組大鼠肺臟透射電鏡結(jié)果（×1700）Fig.5 Lung transmission electron microscopy results of rats in different treatment groupand 12 weeks (×1700)

21圖 6. 6 周和 12 周不同處理組大鼠肺臟 ALDH2 蛋白表達(dá)變化A：不同處理組大鼠肺臟典型 western blot 圖片；B：不同處理組肺組織 ALDH2 水平變化n=3）** P<0.05，與 CON 組比較；^^P<0.05，與 DM 組比較Fig. 6 Changes of lung ALDH2 protein expression in rats of different treatment groups at 6and 12 weeksA: typical western blot picture of lung in rats of different treatment groups; B: change of Alevel in lung tissue of different treatment groups ( x±s , n=3)** P<0.05, compared with the control group; ^^P<0.05, compared with the DM group

【參考文獻(xiàn)】

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1 高靜韜;李琦;;乙醛脫氫酶2與肺部疾病相關(guān)性研究進(jìn)展[J];國(guó)際呼吸雜志;2015年16期

2 楊英;龔忠厚;李翠;張倩;王智斌;韓亞軍;陳陽(yáng);葛偉;;線粒體乙醛脫氫酶2對(duì)β淀粉樣蛋白所致神經(jīng)元損傷的作用及機(jī)制[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2015年05期

3 李莎;白育庭;;糖尿病肺損傷的研究進(jìn)展[J];湖北科技學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年03期

4 胡俊鋒;楊麗娟;王蕾;張冠軍;高琴;;激動(dòng)線粒體乙醛脫氫酶2對(duì)抗糖尿病大鼠肺損傷的機(jī)制[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2013年24期

5 王曉黎;張錦;;糖尿病合并感染及其高危因素分析[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;2012年03期

6 張靜萍,趙宗珉,劉國(guó)良;細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶在糖尿病大鼠肺病變中的作用[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2004年07期

本文編號(hào)：2757552