【摘要】：目的:探究klotho(克老素,KL)通過何種機制來改善地塞米松(dexamethason,DEX)對MC3T3-E1成骨細胞的抑制作用。方法:首先采用倒置熒光顯微鏡觀察含Klotho基因(Ad-KL)重組腺病毒和含綠色熒光蛋白基因(Ad-GFP)的重組腺病毒在MC3T3-E1細胞中的轉染效率,并用Western blot檢測KL蛋白表達水平。CCK-8檢測各組細胞的存活率,流式細胞術和Western blot分析NF-кB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)組跟各組間的關系;通過Western blot和qPCR對各組凋亡蛋白和NF-κκB通路相關蛋白的表達情況進行檢測;激光共聚焦檢測IκB蛋白表達情況及NF-кB p65核移位。結果:MC3T3-E1細胞成功被Ad-KL轉染,且KL蛋白可以在細胞中高效表達。通過CCK-8及Western blot發(fā)現(xiàn)DEX誘導成骨細胞凋亡且cleaved caspase-3蛋白表達明顯增加,而KL預處理后凋亡細胞數量較前明顯減少且cleaved caspase-3蛋白表達下降。PDTC可使DEX誘導的凋亡細胞數減少并減弱DEX誘導的caspase-3增加。KL能夠通過減少DEX誘導的IκB降解,NF-кB p65的核移位和p65的磷酸化來降低DEX誘導的MC3T3-E1細胞凋亡并同時減少caspase-3的表達。結論:KL能通過抑制NF-κB途徑來改善DEX誘導的MC3T3-E1細胞凋亡。除此之外,KL還有可能通過其他信號通路來改善DEX誘導的MC3T3-E1細胞凋亡,具體如何尚需要進一步研究。本研究結果表明,KL有可能是未來防治糖皮質激素性骨質疏松(GIOP)的新靶點。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R580
【圖文】：

d-KL 和 Ad-GFP 轉染 MC3T3-E1 細胞及轉染后 KL 蛋白表達水平情況（ransfection of MC3T3-E1 cells withAd-KLand Ad-GFP, and KL protein elevels post-transfection（×200）使用免疫熒光顯微鏡觀察分別用 Ad-GFP 和 Ad-KL 轉染 24 小時和 48 小片，200×）;（B）通過蛋白印跡檢測 KL 蛋白與β-actin 的相對表達水平，升高。 數據是三次獨立實驗的平均值，表示為平均值±SEM。 ** p<0.05 Cells transfected with Ad-GFP and Ad-KL for 24 h and 48 h were obsuorescence microscopy (All figures, are magnified 200×)；(B) The relativ

圖 2 MC3T3-E1 細胞的存活率在不同 DEX 濃度下的影響t of different concentrations of DEX on the cytotoxicity o 4 mmol·L-1DEX 預處理 MC3T3-E1 細胞 24 小時。使用 4 mmol / L DEX 處理顯著降低活細胞群數值是平均值±比，*p<0.05，**p<0.01 和***p<0.001。

圖 3 KL 對 DEX 誘導的 MC3T3-E1 細胞凋亡的影響Fig.3 Effect of KL on DEX-induced apoptosis in MC3T3-E1 cells（A）通過 Western blot 檢測 caspase-3 和 cleaved caspase-3 的蛋白表達水平及其蛋白表定量分析。（B）通過 RT-qPCR 檢測 caspase-3 mRNA 的表達水平。（C）用相應分組處胞后，用 CCK-8 法測量 MC3T3-E1 細胞的存活率。數據是三次獨立實驗的平均值±SEM

【參考文獻】

相關博士學位論文 前1條

1 李福春;TRPV5/TRPV6對大鼠骨髓間充質干細胞成骨分化及成骨細胞信號傳遞的影響[D];吉林大學;2008年

本文編號：2756317