【摘要】：目的:研究短肽FLPNF對地塞米松誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞凋亡和細(xì)胞葡萄糖刺激胰島素分泌功能下降的影響及其發(fā)揮作用的可能分子學(xué)機制。方法:以大鼠胰島β細(xì)胞系INS-1細(xì)胞株為研究對象,分為空白對照(Control)組、DEX組、FLPNF組、FLPNF+DEX組、Ghrelin組、Ghrelin+DEX組、NFGAIL組、NFGAIL+DEX組;CCK-8法檢測細(xì)胞活力;TUNEL染色法及Annexin V/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況,統(tǒng)計細(xì)胞凋亡率;Western blot法檢測凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3的表達(dá)情況;ELISA法檢測細(xì)胞葡萄糖刺激胰島素分泌功能;Western blot法檢測葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白Glut2的表達(dá)情況;Graph Pad Prism5.0軟件統(tǒng)計分析所檢測各項指標(biāo)的數(shù)據(jù),p0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:短肽FLPNF單獨作用下,INS-1細(xì)胞的增殖活力及狀態(tài)未發(fā)生明顯改變,細(xì)胞凋亡率及凋亡相關(guān)蛋白未見明顯變化,葡萄糖轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白Glut2的表達(dá)未明顯增加,葡萄糖刺激的胰島素分泌量未見明顯變化;地塞米松單獨作用下,INS-1細(xì)胞的細(xì)胞活力降低、細(xì)胞損傷明顯,可以觀察到核皺縮破裂,細(xì)胞凋亡密度較高,凋亡率可達(dá)(40.6±2.4)%,凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)明顯降低,Bax、cleaved Caspase-3的表達(dá)明顯升高,葡萄糖刺激的胰島素分泌量降低,葡萄糖轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白Glut2的表達(dá)明顯降低,地塞米松明顯增加了INS-1細(xì)胞的凋亡并導(dǎo)致INS-1細(xì)胞的葡萄糖刺激胰島素分泌功能明顯下降;在地塞米松聯(lián)合短肽FLPNF后,INS-1細(xì)胞的細(xì)胞活力提高、細(xì)胞狀態(tài)明顯改善,細(xì)胞凋亡密度明顯下降,凋亡率降低至(27.2±2.0)%(p0.001),凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)明顯上調(diào),Bax、cleaved Caspase-3的表達(dá)明顯下調(diào),葡萄糖刺激胰島素分泌功能增強,葡萄糖轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白Glut2的表達(dá)顯著上調(diào),短肽FLPNF明顯降低地塞米松誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞凋亡并改善了細(xì)胞葡萄糖刺激胰島素分泌功能;作為陽性對照肽的Ghrelin組,單獨作用下INS-1的各項指標(biāo)未見明顯變化,與地塞米松聯(lián)合應(yīng)用時,相比DEX組,INS-1細(xì)胞的細(xì)胞活力提高、凋亡率降低,Bcl-2表達(dá)明顯提高,Bax、cleaved Caspase-3的表達(dá)明顯降低;作為陰性對照的非相關(guān)短肽NFGAIL,單獨作用下INS-1細(xì)胞各項指標(biāo)未見明顯變化,聯(lián)合地塞米松應(yīng)用時,INS-1細(xì)胞的凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)與地塞米松單獨作用時的表達(dá)未見明顯改變,細(xì)胞的凋亡密度較地塞米松單獨作用下稍有增加。結(jié)論:短肽FLPNF通過上調(diào)Bcl-2的表達(dá)、下調(diào)Bax及cleaved Caspase-3的表達(dá),明顯降低地塞米松誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞凋亡;同時,短肽FLPNF通過上調(diào)Glut2表達(dá),改善了胰島β細(xì)胞的葡萄糖刺激胰島素分泌功能。綜上,短肽FLPNF對地塞米松誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞凋亡具有明顯的保護作用。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R587.1
【圖文】：

圖 1 CCK-8 法測定各組 INS-1 細(xì)胞增殖活性藥物不同處理順序?qū)?INS-1 細(xì)胞活力的影響，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差法和 LSD 法用于研究的組間比較；***，與 DEX 組相比，p 組相比，p ＜0.01；Δ，與 DEX48h+FLPNF72h 組相比，p ＜0.對 INS-1 細(xì)胞活力的影響，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（n=3）；單因研究的組間比較：***，與 DEX 組相比，p ＜0.001；#，與 FLP.05。C，代表短肽 FLPNF 與對照肽對 DEX 作用下 INS-1 細(xì)胞活力表示（n=3）；單因素方差分析法和 LSD 法用于研究的組間比較0.001；###，與 DEX 組相比，p ＜0.001；##，與 DEX 組相比， FLPNF 對 INS-1 細(xì)胞凋亡的影響L 法檢測細(xì)胞凋亡的結(jié)果中，Control 組中較少見到細(xì)胞凋FGAIL+DEX 組中細(xì)胞凋亡密度最高，可見核碎裂，二者無

2 TUNEL 法檢測短肽 FLPNF 抗地塞米松誘導(dǎo)的 INS-1 細(xì)胞凋亡的作用 ×40NS-1 細(xì)胞用 TUNEL 染色并在倒置熒光顯微鏡下拍照。B，統(tǒng)計分析凋亡細(xì)胞數(shù)，±標(biāo)準(zhǔn)差表示（n=3）；單因素方差分析法和 LSD 法用于研究的組間比較：**，與 Contrp ＜0.01；***，與 Control 組相比，p ＜0.001；##，與 DEX 組相比，p ＜0.01。exin V-FITC/PI 法檢測細(xì)胞凋亡的結(jié)果與 TUNEL 法檢測細(xì)胞凋亡的結(jié)果基Control 組細(xì)胞凋亡率較低，DEX 組和 NFGAIL+DEX 組細(xì)胞凋亡率顯著升0.001)，且可見早期凋亡散點密度與晚期凋亡散點密度均有升高；Ghrelin 組組、NFGAIL 組較 Control 組無明顯差異(p ＞0.05)；Ghrelin+DEX 組及DEX 組的細(xì)胞凋亡率比 DEX 組有明顯降低(p ＜0.001)。(圖 3)

圖 3Annexin V-FITC 流式法檢測 INS-1 細(xì)胞凋亡-1 細(xì)胞用 AnnexinV-FITC 試劑和 PI 試劑雙重染色后，通過流式細(xì)散點圖。B，細(xì)胞凋亡率的統(tǒng)計分析結(jié)果，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（LSD 法用于研究的組間比較： ***，與 Control 組相比，p ＜0.00.01；Δ，DEX+FLPNF 組與 DEX+Ghrelin 組相比，p ＜0.01。 FLPNF 對 INS-1 細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白 Bcl-2、Bax 和3 表達(dá)的影響的 Bcl-2 表達(dá)水平較 Control 組明顯降低(p ＜0.05)，經(jīng)過PNF+DEX 組的 Bcl-2 表達(dá)水平明顯升高(p ＜0.05)；同時平明顯高于 Control 組(p ＜0.05)，而 FLPNF+ DEX 組的明顯降低(p ＜0.05)。(圖 4)

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本文編號：2746096