【摘要】：研究背景:系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)是一種全身多器官、多系統(tǒng)受損的自身免疫性疾病。狼瘡性腎炎(lupus nephritis,LN)是SLE最嚴重的并發(fā)癥,約20%的LN患者10年可能發(fā)展為尿毒癥,嚴重危害人體健康,帶來沉重的社會負擔。因此,闡明SLE的發(fā)病機制,尋找新的治療靶點迫在眉睫。PGRN是一種多效能的生長因子,多項研究顯示其在免疫調(diào)節(jié)、損傷修復、炎癥反應和宿主防御等多種生理病理過程中發(fā)揮重要作用。早期研究發(fā)現(xiàn)PGRN可通過調(diào)控不同的信號通路,發(fā)揮促進或抑制疾病發(fā)展的作用。有研究表明IFN-α在SLE中發(fā)揮了重要作用,而我們的前期研究顯示PGRN調(diào)控了IRF1的表達,該蛋白是調(diào)控IFN-α的重要轉(zhuǎn)錄因子,同時我們發(fā)現(xiàn)活動期SLE患者血清中PGRN水平較正常對照組顯著增高,因此,我們推測PGRN可能通過調(diào)控IFN-α在SLE疾病的發(fā)展中發(fā)揮了作用。目的:綜合前期實驗結(jié)果和文獻報道,我們提出了一個科學假設,即PGRN通過調(diào)控IFN-α的表達,促進SLE疾病的炎癥反應,加重SLE的組織損傷,促進疾病的發(fā)展。本研究擬通過臨床標本檢測和缺陷動物實驗對這一假設進行初步驗證,為SLE的發(fā)病機制提供新的實驗證據(jù),同時為SLE的免疫新療法開辟新的思路。方法:首先采用ELISA方法分別檢測兒童和成人活動期SLE患者血清中的PGRN蛋白表達水平;然后用pristane建立小鼠SLE疾病模型,經(jīng)ELISA法檢測PGRN在SLE小鼠中的蛋白表達水平。將WT小鼠和PGRN~(-/-)小鼠分別建立SLE模型之后,通過小鼠組織器官和肝腎功能損傷、IFN-α和IFNAR水平、T細胞免疫應答及細胞因子變化、自身抗體變化的觀察,評估PGRN在SLE疾病中發(fā)揮的免疫作用。同時采用WT小鼠和IFNAR~(-/-)小鼠建立SLE疾病模型后經(jīng)腹腔給予rIFN-α蛋白,觀察小鼠組織器官損傷、炎癥程度變化,探索SLE中PGRN發(fā)揮免疫作用的途徑。并采用免疫印跡技術(shù)對相關信號通路進行初步探索。結(jié)果:與正常對照組比較,兒童和成人活動期SLE患者PGRN蛋白水平均顯著升高,然后建立小鼠SLE疾病模型,經(jīng)ELISA法檢測PGRN水平,顯示PGRN在SLE疾病小鼠外周血和肺臟中也表達升高。相比WT的SLE小鼠,PGRN~(-/-)的SLE小鼠腎、肺、脾等臟器的炎癥細胞浸潤、組織水腫、壞死等組織病理損傷明顯減輕,反映肝細胞損傷的轉(zhuǎn)氨酶ALT和AST,反映腎臟損傷的BUN和Cr、IFN-α和IFNAR水平均顯著降低,提示PGRN可上調(diào)IFN-α的表達,促進SLE疾病的發(fā)展。進一步發(fā)現(xiàn):IFNAR~(-/-)的SLE疾病小鼠,組織損傷和炎癥因子顯著降低,而IFNAR~(-/-)的SLE疾病小鼠腹腔注射rIFN-α蛋白后,炎癥損傷明顯加重,與PGRN缺陷后的效應一致,提示IFN-α具有與PGRN類似的促進SLE發(fā)展的作用。免疫反應研究顯示,PGRN缺陷后引起T細胞(Th1、Th2、Th17和Treg)和B細胞免疫應答失衡,引起炎癥因子(IFN-γ、IL-17A)和自身抗體(Anti-ds DNA、Anti-ribosomal P0)含量明顯降低,與IFN-α的效應相吻合,提示PGRN在SLE中的有害作用可能是通過上調(diào)IFN-α的表達而實現(xiàn)的。結(jié)論:PGRN在SLE中可上調(diào)IFN-α的表達,促進SLE小鼠Th1細胞應答,抑制Treg細胞的分化,增加自身抗體的水平,從而促進炎癥的發(fā)生,加重組織損傷,促進SLE疾病的發(fā)展。因此阻斷PGRN可能是治療SLE的一個新的有效途徑。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R593.241
【圖文】：

圖 1 臨床 SLE 患者血清中 PGRN 表達水平（A）兒童標本（B）成年標本Fig 1 SLE results in elevated serum progranulin (PGRN) levels.(A) Progranulin concentration was measured by ELISA in serum samples collected from 27pediatric patients with SLE and from 21 healthy control subjects.(B) Progranulin concentrations were measured by ELISA in serum samples collected from 30adult patients with SLE and from 25 healthy control subjects.Horizontal bars represent median values, and dots represent individual participants.,compared between groups3.2 PGRN 在 Pristane 誘導的 SLE 動物模型中表達顯著升高3.2.1 構(gòu)建 SLE 疾病的小鼠模型為驗證上述臨床結(jié)果并進行后續(xù)的免疫機制研究，我們用 Pristane 誘導法構(gòu)建SLE 疾病的小鼠模型[40]，對 SLE 小鼠的臟器損傷以及炎癥因子進行檢測，以判斷SLE 模型是否建立成功。結(jié)果顯示：與正常對照比較，3 月 SLE 模型小鼠肺部大體可見顯著出血水腫，

36圖 2 SLE 小鼠組織損傷顯著加重（A）Pristane 誘導法建模，3 月 SLE 外觀（B）肺臟、腎臟和脾臟經(jīng)石蠟切片后 HE 染色（C）腎臟經(jīng)石蠟位，檢測腎臟中免疫復合物的沉積(每組各 5 只）Fig2 Obvious aggravation of tissue damage in Experimental SLE modlung, kidney and spleen of SLE mouse (3 months after pristane injectiand spleen paraffin sections were stained with HE . (C) Immunofluoreanalysis was used to examine the deposition of immune complexes in ki(n= 5 per group)

圖 3 SLE 小鼠肝功能損傷顯著加重 (每組各 5 只）Fig 3 Obvious aggravation of liver function injury in mice with SLE(n= 5 per group)如圖 4 所示：與正常對照比較，6 月 SLE 小鼠，與腎損傷有關的血清 BUN、Cr 顯著增高，提示 SLE 小鼠腎功能損傷較正常小鼠顯著加重。圖 4 SLE 小鼠腎功能損傷顯著加重 (每組各 5 只）

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 沈金花;呂印;劉慶華;;干擾素調(diào)節(jié)因子的研究進展[J];中南民族大學學報(自然科學版);2014年02期

2 王濤;江超;陳琳潔;謝長好;李志軍;;系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血漿干擾素α的表達及臨床意義[J];重慶醫(yī)學;2012年17期

本文編號：2744017