【摘要】：目的橋本甲狀腺炎(HT)可以引起育齡女性受孕率下降,影響女性懷孕的因素很多,雌激素受體是其中之一。因此本課題通過(guò)對(duì)NOD雌性小鼠注射豬甲狀腺球蛋白(p Tg)建造HT模型,檢測(cè)動(dòng)情周期,觀(guān)察HT小鼠動(dòng)情期子宮內(nèi)膜的雌激素受體α表達(dá)是否受到影響,同時(shí)檢測(cè)子宮局部細(xì)胞因子水平了解HT子宮的局部免疫,探討HT對(duì)懷孕的影響。方法選取30只健康的NOD小鼠,統(tǒng)一為8~9周齡、雌性、清潔級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。喂養(yǎng)一周后,將30只NOD小鼠隨機(jī)分成2組:正常對(duì)照(CON)組和橋本甲狀腺炎(HT)組各15只。以下為HT組造模的操作步驟:倒出100μl的PBS溶液,向里面加入25μg的豬甲狀腺球蛋白p Tg,p Tg溶液與弗氏完全佐劑(CFA)混合于研缽中,二者比例為1:1。冰浴條件下研磨至完全乳化。固定小鼠,在其尾根部1cm處皮下注射0.1 ml乳化劑。在正常對(duì)照組需要注射相等量的CFA。兩周后用同樣的方法將弗氏不完全佐劑(IFA)替換掉模型組CFA,對(duì)照組小鼠等量IFA注射。造模周期49天。取甲狀腺標(biāo)本,做HE染色并拍攝圖片。取小鼠血清,檢測(cè)甲狀腺球蛋白抗體(Tg Ab)、甲狀腺激素(T3、T4),甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體(TPOAb)及TSH。免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)小鼠子宮內(nèi)膜雌激素受體α的分布和表達(dá)。小鼠子宮雌激素受體α和IL-6,IL-10 m RNA含量用PCR檢測(cè),瑞士染色檢測(cè)小鼠動(dòng)情周期。小鼠子宮IL-10和IL-6用流式液相多重蛋白定量技術(shù)(CBA)檢測(cè)。結(jié)果1.小鼠甲狀腺標(biāo)本描述:與CON組相比HT組小鼠的甲狀腺增大。甲狀腺組織顏色呈淡紅色,質(zhì)地觸之較韌。甲狀腺HE染色:與CON組相比,HT組小鼠可見(jiàn)甲狀腺內(nèi)有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),部分破壞的甲狀腺濾泡。2.小鼠甲狀腺激素水平:較CON組相比,HT組TSH,T3,T4差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。小鼠抗體水平與CON組相比,HT組小鼠血清Tg Ab升高(P0.001),TPOAb升高(P0.05);3.免疫組化結(jié)果:CON組和HT組動(dòng)情期子宮內(nèi)膜均存在免疫陽(yáng)性物質(zhì)表達(dá)。子宮內(nèi)膜上腔上皮、腺上皮及基質(zhì)都有ERα的表達(dá)。CON組子宮內(nèi)膜ERα水平顯著高于HT組(P0.05)。4.PCR結(jié)果:HT組小鼠動(dòng)情期子宮ERαm RNA水平低于CON組(P0.001);IL-6和IL-10 m RNA水平均為HT組低于CON組表達(dá)(P0.001)。5.瑞氏染色結(jié)果描述:基本都是有核上皮細(xì)胞,夾雜少量角化上皮細(xì)胞的為動(dòng)情前期;大而角化的無(wú)核細(xì)胞居多,間有少許有核上皮細(xì)胞的是動(dòng)情期;角化上皮細(xì)胞,白細(xì)胞,有核上皮細(xì)胞都可看到的為動(dòng)情后期;有大量的白細(xì)胞,存在少上皮細(xì)胞的為動(dòng)情間期。6.CBA法測(cè)小鼠子宮IL-6及IL-10結(jié)果與CON組比,HT組IL-6水平減低(P0.05),IL-10水平減低(P0.001)。結(jié)論HT會(huì)導(dǎo)致小鼠動(dòng)情期子宮內(nèi)膜ERα表達(dá)下降,子宮局部IL-6及IL-10水平發(fā)生變化。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可能對(duì)HT影響懷孕的探討有一些參考意義。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R581.4
【圖文】：

理像用 IPP6.0 圖像分析軟件分析；PCR 結(jié)果用 2-軟件進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析。進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方 x s表示。單個(gè)變量的兩組資料之間比較采用。以 P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。正常小鼠的甲狀腺組織標(biāo)本腺分為左側(cè)葉，右側(cè)葉和峽部，形態(tài)不太規(guī)則，淡紅，正常對(duì)照組甲狀腺符合正常小鼠甲狀腺外，觸之質(zhì)地較韌。

圖 2 兩組小鼠甲狀腺的 HE 染色圖片 ×50（見(jiàn)圖中%急曄荊〢：正常對(duì)照組；B：橋本組；Fig 2 HE staining of thyroid tissue in two groups ×50 (be marked byA: Normal control group; B: HT group;.3 兩組小鼠血清激素水平兩組小鼠血清 T3、T4、TSH 水平檢測(cè)結(jié)果：正常對(duì)照組和 HT較為接近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，HT 組 T4 水平比正常對(duì)照組要高差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，TSH 在 HT 組稍微低于正常對(duì)照組，兩組間統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)圖 3。A

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3 易欣;于曉Y

本文編號(hào)：2735005