【摘要】：研究背景支氣管哮喘是一種常見的呼吸道慢性炎癥性疾病,主要特征包括氣道炎癥,多種刺激因素能夠使氣道呈現(xiàn)高反應(yīng)性,廣泛而多變的可逆性氣流受限以及隨病程的延長而導(dǎo)致的氣道結(jié)構(gòu)的改變,即氣道重構(gòu)。引起哮喘發(fā)病的主要原因是Th1/Th2比例失衡,Th1細胞產(chǎn)生的白細胞介素-2、干擾素γ(IFN-γ)和腫瘤壞死因子α參與細胞免疫應(yīng)答誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng),而大多數(shù)過敏性氣道炎癥是Th2細胞過度增多誘導(dǎo)釋放細胞因子白細胞介素-4(IL-4)、白細胞介素-5(IL-5)等引起的。其中,IL-4和IFN-y是Th1/Th2細胞分化中的特征因子。肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)是一種依賴于Ca2+-鈣調(diào)蛋白的激酶,對肌肉收縮有重要作用。有研究表明,哮喘患者支氣管平滑肌細胞肌球蛋白輕鏈激酶的含量較正常細胞增加。本實驗利用建成小鼠哮喘模型,目的是為了探討MLCK對哮喘小鼠的氣道炎癥和肺功能的影響,為治療哮喘尋找新的方向。目的通過測定MLCK及炎性介質(zhì)在哮喘模型小鼠中的表達及肺功能的變化,探究MLCK對哮喘氣道炎癥的影響,以及在肺功能中的作用。方法將20只清潔級為SPF級、6-7周齡、雌性,BALB/c小鼠,隨機分為對照組、哮喘組2組,每組各10只。利用雞卵白蛋白(OVA)注射致敏法構(gòu)造小鼠哮喘模型。哮喘組第0、7、14天OVA/氫氧化鋁生理鹽水混懸液(含20μgOVA和4mg氫氧化鋁)0.2ml/只腹腔注射致敏,第21天開始霧化5%OVA生理鹽水2ml,每天30min,連續(xù)激發(fā)一周。對照組以同體積生理鹽水代替致敏劑和激發(fā)劑。通過肺功能儀器來分別檢測兩組小鼠肺功能,摘取小鼠肺組織,切片,觀察病理改變,免疫組織化學(xué)染色法觀察肺組織中MLCK的表達,顯微鏡下血清中白細胞及嗜酸性粒細胞計數(shù),ELISA方法檢測肺泡灌洗液中炎性介質(zhì)IL-4、IFN-y濃度,Western blot法分析肺組織中MLCK的表達,qPCR檢測MLCK mRNA表達。結(jié)果1.哮喘組小鼠肺功能指標(biāo)低于對照組(P0.05),反映氣道高反應(yīng)性的肺阻力明顯升高(P0.05);2.哮喘組小鼠白細胞及嗜酸性粒細胞計數(shù)高于對照組(P0.05);3.哮喘組小鼠BALF中炎性介質(zhì)IL-4的濃度高于對照組(P0.05)。哮喘組IFN-γ的濃度低于對照組(P0.05)。4.哮喘組小鼠肺組織MLCK在蛋白和基因水平的表達量均高于對照組(P0.05)。結(jié)論肌球蛋白輕鏈激酶促進哮喘小鼠炎性介質(zhì)的分泌,可能參與氣道炎癥的反應(yīng)并影響肺功能。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R562.25
【圖文】：

小鼠血清中嗜酸性粒細胞及白細胞計數(shù)

圖５邋ＥＬＩＳＡ法檢測小鼠ＢＡＬＦ中炎性介質(zhì)的表達逡逑２４逡逑

【參考文獻】

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本文編號：2734640