【摘要】：第一部分骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)卵巢早衰小鼠卵巢功能及生育能力的影響目的：探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)移植對(duì)化療藥物所致卵巢早衰(premature ovarian failure, POF)小鼠卵巢功能及生育能力的影響。方法：通過一次性腹腔注射環(huán)磷酰胺(CTX) 120mg/kg和白消安(BUS) 12mg/kg建立卵巢早衰小鼠模型。將本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為三組：建模移植組、建模對(duì)照組和空白對(duì)照組。建模后14天,將帶有綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)轉(zhuǎn)基因小鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注射至建模移植組小鼠體內(nèi),并取等量生理鹽水經(jīng)尾靜脈注射至建模對(duì)照組和空白對(duì)照組小鼠體內(nèi)。飼養(yǎng)2個(gè)月后,采用原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)檢測卵巢顆粒細(xì)胞凋亡情況及小鼠血清FSH和E2水平,觀察各組超促排卵后的獲卵數(shù)、受精率、卵裂率、囊胚形成率,以及與雄性小鼠合籠后生育子代的數(shù)量。結(jié)果：①血清性激素空白對(duì)照組FSH和E2水平在實(shí)驗(yàn)前后均無明顯變化。建模對(duì)照組在化療藥物注射后14天,FSH水平顯著升高,E2水平顯著下降。BMSCs移植后2個(gè)月,建模移植組FSH水平明顯下降,E2水平明顯上升,與空白對(duì)照組無顯著性差異。②卵巢顆粒細(xì)胞凋亡情況化療藥物注射后14天空白對(duì)照組可見少量凋亡顆粒細(xì)胞,建模對(duì)照組卵巢卵泡中出現(xiàn)大量凋亡顆粒細(xì)胞,凋亡指數(shù)顯著高于空白對(duì)照組。BMSCs移植后2個(gè)月,建模移植組卵巢卵泡內(nèi)凋亡顆粒細(xì)胞明顯減少,凋亡指數(shù)顯著低于建模對(duì)照組。③獲得卵母細(xì)胞受精情況及囊胚形成率 空白對(duì)照組獲得卵子數(shù)及受精率、卵裂率、囊胚形成率在實(shí)驗(yàn)前后均無明顯變化；建模對(duì)照組小鼠化療藥物注射后14d, 獲得卵子數(shù)及受精率、卵裂率、囊胚形成率明顯下降；BMSCs移植后2個(gè)月,建模移植組獲得卵子數(shù)及受精率、卵裂率、囊胚形成率明顯上升,與空白對(duì)照組無顯著性差異。④生育子代情況骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植2個(gè)月后,空白對(duì)照組共生育小鼠24只,建模對(duì)照組未生育出小鼠；建模移植組共生育小鼠6只。結(jié)論：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植可顯著降低卵巢顆粒細(xì)胞凋亡數(shù)量,改善卵巢內(nèi)分泌功能,提高小鼠生育能力。第二部分 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植在卵巢早衰小鼠卵巢內(nèi)的定位目的：探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植后在小鼠卵巢內(nèi)的定位及分化情況。方法：BMSCs移植后2個(gè)月,熒光顯微鏡下觀察卵巢冰凍切片內(nèi)綠色熒光蛋白及類固醇激素細(xì)胞的表面標(biāo)記的表達(dá)情況,并采用免疫組化方法鏡下觀察BMSCs在卵巢內(nèi)的定位。結(jié)果：BMSCs移植后2個(gè)月,可見卵巢間質(zhì)內(nèi)存在大量綠色熒光細(xì)胞和標(biāo)記BMSCs,但定位存活的細(xì)胞并不表達(dá)類固醇激素分泌細(xì)胞的表面標(biāo)記FSHR。結(jié)論：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可定位存活于卵巢間質(zhì)中,但并未分化為有功能的卵巢顆粒細(xì)胞。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R711.75;R457.7
【圖文】：

逡逑如圖１所示，空白對(duì)照組小鼠卵巢內(nèi)散在極少量棟黃色調(diào)ｔ顆粒細(xì)胞，調(diào)亡指逡逑數(shù)為７．０％；化療藥物注射后Ｈｄ，小鼠卵巢內(nèi)出現(xiàn)大量od亡顆粒細(xì)胞，呈棟黃色逡逑深染，調(diào)ｔ指數(shù)為３７．８％；邋ＢＭＳＣｓ移植后２個(gè)月，建模移植組小鼠卵巢內(nèi)蹤黃色調(diào)逡逑ｔ顆粒細(xì)胞明顯減少，調(diào)亡指數(shù)為１７．邋８％，明顯低于建模對(duì)照組３４．０％，差異具有逡逑顯著性。逡逑WWW逡逑ＡＢＣ逡逑圖１邋ＢＭＳＣｓ移植后２個(gè)月Ｈ組小鼠卵巢顆粒細(xì)胞調(diào)ｔ的比較（Ａ；空白對(duì)照組卵巢，Ｂ：逡逑建模對(duì)照姐卵巢，Ｃ：建模移植組卯巢，Ｘ４００）逡逑Ｆｉｇ．邋Ｉ邋Ｔｈｅ邋ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ邋ｏｆ邋ｇｒａｎｕｌｏｓａ邋ｃｅｌｌｓ邋ａｐｏｐｔｏｓｉｓ邋ａｍｏｎｇ邋ｔｈｒｅｅ邋ｇｒｏｕｐｓ邋２邋ｍｏ打ｔｈｓ邋ａ巧ｅｒ邋ｔｈｅ逡逑化ａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＢＭＳＣｓ邋（Ａ邋！邋ｔｈｅ邋ｂｌａｎｋ邋ｇｒｏ叫；Ｂ：邋ｔｈｅ邋ｍｏｄｅｌ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｎｍｐ；邋Ｃ邋ｔｈｅ邋ＢＭＳＣｓ逡逑ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ邋ｇｒｏｕｐ）逡逑４．３各組卵母細(xì)胞獲取數(shù)及體外受精結(jié)果逡逑如表２所示，化療藥物注射后１４天小鼠所獲卵母細(xì)胞數(shù)顯著減少，且受精率逡逑明顯下降，胚胎卵裂率及囊巧形成率顯著低于空白對(duì)照組。由表３和圖２可見，逡逑ＢＭＳＣｓ移植后２個(gè)月

４．３各組卵母細(xì)胞獲取數(shù)及體外受精結(jié)果逡逑如表２所示，化療藥物注射后１４天小鼠所獲卵母細(xì)胞數(shù)顯著減少，且受精率逡逑明顯下降，胚胎卵裂率及囊巧形成率顯著低于空白對(duì)照組。由表３和圖２可見，逡逑ＢＭＳＣｓ移植后２個(gè)月，小鼠所獲卵母細(xì)胞數(shù)明顯增加，卵母細(xì)胞受精率升高，形態(tài)逡逑稍不規(guī)則，細(xì)胞碎片量明顯低于建模對(duì)照姐，胚胎卵裂率及囊胚形成率均高于建逡逑模對(duì)照組，但各項(xiàng)指標(biāo)仍顯著低于空白對(duì)照組；而建模對(duì)照組小鼠所獲胚胎數(shù)量逡逑較少，且形態(tài)異常，內(nèi)含較多細(xì)胞碎片，潮臨死亡，囊胚形成率極低；空白對(duì)照逡逑組小鼠所獲胚胎數(shù)量明顯高于建模對(duì)照組和建模移植組，且形態(tài)規(guī)則，細(xì)胞碎片逡逑少，發(fā)育較好，大部分均能發(fā)育至囊胚階段。逡逑表２建模后１４天蘭組小鼠獲卵數(shù)及儕胎發(fā)育情況的比較逡逑Ｔａｂ．２邋Ｔｈｅ邋ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ邋ｏｆ邋ｒｅｔｒｉｅｖｅｄ邋ｏｏｃｙｔｅｓ邋ａｎｄ邋ｅｍｂｒｙｏ邋ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ邋ｐｏｔｅｎｔｉａｌ邋ａｍｏｎｇ邋ｔｈｒｅｅ逡逑ｇｒｏｕｐｓ邋ｏｎ邋１４化邋ｄａｙ邋ｏｆ邋ＰＯＦ邋ｍｏｄｅｌ邋巧ｔａｂｌｉｓｈｍｅ打ｔ逡逑１９逡逑

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 黨建紅;金志軍;葛軍輝;胡電;彭飛;;人臍血單個(gè)核細(xì)胞移植治療放射性裸鼠卵巢早衰[J];國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志;2012年02期

本文編號(hào)：2731028