【摘要】：研究背景和目的:衰老作為一個(gè)全身性的事件,不僅以孤立的方式影響著某個(gè)組織或器官,其對(duì)骨骼系統(tǒng)也產(chǎn)生不利的影響。骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis,OP)是一種骨量減低,骨結(jié)構(gòu)破壞導(dǎo)致骨脆性增加因而易發(fā)生骨折的全身性疾病。原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥包括絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥、老年骨質(zhì)疏松癥和特發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。和衰老相關(guān)的骨質(zhì)疏松癥主要指老年性骨質(zhì)疏松癥�？顾ダ现委熌軌蛟黾有∈蠊切×毫考肮墙M織生物機(jī)械特性,因此,我們有理由相信,抗衰老是治療老年性骨質(zhì)疏松癥的一種有效方法。長(zhǎng)久以來,人們一直在研究延緩衰老以達(dá)到長(zhǎng)生不老的方法。有研究報(bào)道:年輕個(gè)體的血液、血漿及他們的衍生物能夠促進(jìn)干細(xì)胞功能及組織的再生和修復(fù),因此其能夠?qū)顾ダ线^程。而通過聯(lián)體共生/血漿注射實(shí)現(xiàn)兩只動(dòng)物的血液交換對(duì)于衰老/抗衰老的研究具有十分重要的作用。研究表明,異時(shí)聯(lián)體共生/年輕血漿注射能夠?qū)顾ダ系牟焕绊?對(duì)于對(duì)抗老年性骨質(zhì)疏松癥具有積極的作用;反之,異時(shí)聯(lián)體共生/老年血漿注射能夠?qū)δ贻p動(dòng)物的組織產(chǎn)生不利的影響。因此,我們推測(cè),在動(dòng)物體內(nèi)是否存在某種/某些關(guān)鍵的因子,其隨著年齡的增長(zhǎng)而改變,通過調(diào)節(jié)這種或這些因子能夠影響骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程。本課題旨在探討老年血漿是否能夠影響小鼠的骨骼“衰老”,進(jìn)一步研究其中關(guān)鍵的分子及其對(duì)于骨質(zhì)疏松癥的意義。研究方法:本研究分三部分進(jìn)行:第一部分觀察異時(shí)聯(lián)體共生/老年血漿注射對(duì)年輕小鼠的骨量影響。聯(lián)體共生實(shí)驗(yàn)共分為三個(gè)組,分別為年輕小鼠與年輕小鼠共生組,年輕小鼠與老年小鼠共生組,假共生組,在共生模型建立后4周,于一只小鼠尾靜脈注射Evan染液,通過觀察Evan染液向與其共生小鼠滲透情況,確認(rèn)聯(lián)體共生模型是否成功;共生后正常飼養(yǎng)3個(gè)月。血漿注射實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)組,分別為注射年輕血漿組,注射老年血漿組,注射生理鹽水組,提取18月老年雄性及3月年輕雄性C57小鼠血液、常規(guī)離心后收集血漿,將血漿對(duì)3月齡年輕C57小鼠進(jìn)行尾靜脈注射,每周2次,每次0.2 ml,共注射8周,另外設(shè)置一組即對(duì)3月齡年輕C57小鼠尾靜脈注射生理鹽水,每周2次,每次0.2 ml。用MICROCT、HE染色、TRAP染色和VONCOSSA染色等方法觀察幾組動(dòng)物模型中小鼠的骨量丟失及成骨和破骨情況。第二部分篩選影響骨質(zhì)丟失的關(guān)鍵分子。通過定制蛋白芯片分析聯(lián)體共生/老年血漿注射兩種模型,分別篩選各自的關(guān)鍵分子,交叉得到CCL11、CXCL1、IL-13、CCL5四種關(guān)鍵分子。然后進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)分為五組:注射老年血漿組、注射老年血漿+CCL11抗體組、注射老年血漿+CXCL1抗體組、注射老年血漿+IL-13抗體組、注射老年血漿+CCL5抗體組,每周注射2次,每次0.2 ml老年血漿,抗體注入時(shí),每周1次,每次0.1 ml,共注射8周。用MICROCT、HE染色的方法觀察幾組動(dòng)物模型中小鼠的骨量丟失的情況。最后得出CCL11效果最強(qiáng)的初步結(jié)論。第三部分探討CCL11與年輕和老年小鼠骨量丟失的關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)分為六組:年輕小鼠組、年輕小鼠注射CCL11組、年輕小鼠注射CCL11+CCL11抗體組、老年小鼠組、老年小鼠注射CCL11組、老年小鼠注射CCL11+CCL11抗體組,每周2次,每次0.1 ml CCL11重構(gòu)體,CCL11抗體注入時(shí),每周2次,每次0.1 ml,共注射8周。用MICROCT、HE染色、TRAP染色和VONCOSSA染色等方法觀察幾組動(dòng)物模型中小鼠的骨量丟失及成骨和破骨情況。結(jié)果:第一部分:在聯(lián)體共生模型中,年輕與老年小鼠共生組年輕小鼠在BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.area上明顯低于其余兩組(年輕小鼠與年輕小鼠共生組,假共生組);N.ob/B.Pm及P1NP(骨形成指標(biāo))較其余兩組減低;N.Oc/B.Pm及CTX(骨吸收指標(biāo))較其余兩組增高。在血漿注射模型中我們觀察到注射老年血漿的年輕小鼠在BMD、BV\TV、Tb.N、Tb.area上明顯低于其余兩組(注射年輕血漿的年輕小鼠,注射生理鹽水的年輕小鼠),且N.ob/B.Pm及P1NP較其余兩組減低,而N.Oc/B.Pm及CTX較其余兩組增高。這些結(jié)果提示:老年血液和血漿確實(shí)可加速小鼠骨質(zhì)和骨量的丟失。第二部分:我們發(fā)現(xiàn),注射老年血漿+CCL11抗體的年輕小鼠BMD、BV\TV、Tb.N、Tb.area比注射老年血漿組明顯增高;而注射老年血漿+CXCL1抗體組、注射老年血漿+IL-13抗體組、注射老年血漿+CCL5抗體組比注射老年血漿組在上述指標(biāo)上無明顯差異。結(jié)果提示:CCL11可能是老年血漿可以加速年輕小鼠骨質(zhì)和骨量丟失的關(guān)鍵。第三部分:我們發(fā)現(xiàn),對(duì)于年輕小鼠來說,CCL11注射組在BMD、BV/TV、Tb/N、Tb.area較年輕小鼠組和年輕小鼠注射CCL11+CCL11抗體組兩組均明顯減低,N.ob/B.Pm、P1NP均明顯減低,而N.Oc/B.Pm,CTX指標(biāo)明顯增高;同樣對(duì)于老年小鼠,CCL11注射組較其余兩組(老年小鼠組和老年小鼠注射CCL11+CCL11抗體組)在BMD、BV/TV、Tb/N、Tb.area明顯減低,在N.ob/B.Pm、P1NP明顯減低,而在N.Oc/B.Pm和CTX上,三組間無明顯差異。結(jié)果提示:CCL11確實(shí)可以加速年輕和老年小鼠的骨質(zhì)和骨量的丟失,成骨細(xì)胞功能下降可能是關(guān)鍵原因之一。結(jié)論:1、在異時(shí)聯(lián)體共生模型中,年輕小鼠和同種屬老年小鼠共生后,導(dǎo)致年輕小鼠骨量丟失;在血漿注射模型中,對(duì)年輕小鼠注射老年血漿后促進(jìn)年輕小鼠的骨量丟失。2、在聯(lián)體共生模型和血漿注射模型中共同升高的因子為CCL11、CXCL1、IL-13、CCL5;而其中CCL11為影響骨量丟失的關(guān)鍵因子。3、CCL11注射后能引起年輕小鼠和老年小鼠的骨量丟失,且CCL11被CCL11抗體抑制后這種加速骨量丟失的效應(yīng)消失。總之,老年血漿能夠加速年輕小鼠的骨量丟失,這種作用可能是通過血漿中高濃度的CCL11實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R580
【圖文】：

2-14 周）血漿，方法簡(jiǎn)述如下：使用左手將待采血小鼠固定后，右手精棉球?qū)π∈罂糁芷つw消毒 2 次，消毒完畢后，左手拇指與食指輕壓使小鼠眶后靜脈叢充血，右手持內(nèi)徑 0.5 mm 的玻璃毛細(xì)管自眼內(nèi)眥刺約 2-3 mm，當(dāng)遇到阻力時(shí)，停止，同時(shí)，緩慢將針退出約 0.1-0.5 mm毛細(xì)管使出血順暢。血液采集完成后，將所采集血液置于含有抗凝劑（中，放于溫箱中 37 ℃ 靜置半個(gè)小時(shí)，使用離心機(jī) 5000 rpm， 離心 1清液，將上清液置于 -80 ℃ 冰箱中冷凍保存。采取尾靜脈注射的方式將 C57 小鼠尾靜脈置于 50 ℃ 水中浸潤(rùn) 20 秒鐘后，將其固定在小鼠用食指和中指于小鼠尾巴近端稍用力加壓，而用拇指和環(huán)指于小鼠尾巴定，使用酒精棉球自小鼠尾巴近端向遠(yuǎn)端環(huán)狀加壓涂抹 2 次，將小鼠鼠尾的末端，右手持 1 ml 注射器使針頭方向與鼠尾巴方向平行順血管針洞朝上緩慢推進(jìn)，當(dāng)看到回血后，注射）分別對(duì) B1、 B2、 B3 組鹽水、老年血漿、年輕血漿 8 周，每周 2 次，每次 0.2 ml； 注射全月，處死小鼠取股骨送檢。

圖 2 共生模型 MICROCT 和 HE 染色骨參數(shù)分析結(jié)果注射實(shí)驗(yàn)中， B2 組年輕小鼠（對(duì)年輕小鼠注射老年血漿）較射生理鹽水）B3 組（對(duì)年輕小鼠注射年輕血漿）BMD、BV/減低（圖 3 ）。

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1 王曉冰;;年輕血液真能抗衰老嗎?[J];百科知識(shí);2017年01期

2 張善o

本文編號(hào)：2713734