【摘要】：組蛋白去乙�；�(Histone deacetylases,HDACs)能夠通過影響翻譯后修飾,調(diào)節(jié)多種生物過程。有研究表明,組蛋白去乙�；敢种苿�(Histone deacetylase inhibitor,HDACi)能夠誘導(dǎo)部分腫瘤細胞凋亡,其作用機制也得到了廣泛的研究。但對于同為炎癥相關(guān)疾病的Ⅰ型糖尿病,較少有人探究HDACi是否通過抑制Ⅰ型糖尿病的炎癥反應(yīng),保護胰島β細胞。有研究證明三種炎癥因子IL-1β,TNF-α,IFN-γ,均與Ⅰ型糖尿病相關(guān)。因此,本文提出假設(shè),HDACi能否抑制三種炎癥因子混合物誘導(dǎo)的大鼠胰島β細胞INS-1細胞株的凋亡。本研究選取了三種炎癥因子混合物IL-1β,TNF-α,IFN-γ,用不同濃度的炎癥因子混合物處理細胞24h,結(jié)果表明炎癥因子混合物能夠抑制INS-1細胞的活力,并誘導(dǎo)其凋亡。并確定了炎癥因子混合物處理時間為24h,后續(xù)實驗濃度為IL-1β(10ng/ml),TNF-α(12.5ng/ml),IFN-γ(25ng/ml)。而后選取8種HDACi,通過MTT實驗、流式細胞術(shù)和Western blot實驗探究8種HDACi能否保護INS-1細胞,增加細胞活力,減少炎癥因子誘導(dǎo)的細胞凋亡,減少凋亡相關(guān)蛋白的表達。將HDACi的保護時間設(shè)為0h、2h、4h、6h,結(jié)果表明HDACi預(yù)處理時間越長保護效果越明顯,細胞活力越高,凋亡數(shù)量越少,凋亡蛋白表達量越低。并從其中篩選出了保護效果最好的HDACi:M344。最后,提取M344預(yù)處理6h組(炎癥因子混合物處理時間為0h、2h、8h、16h、24h)、炎癥因子Cot組(炎癥因子混合物處理時間相同)的RNA,進行基因芯片分析。首先比較了炎癥因子混合物處理0h和24h的基因表達差異,獲得2550個差異基因,并將差異基因富集到Wiki通路中,結(jié)果表明炎癥因子混合物能夠上調(diào)多種凋亡相關(guān)基因的表達,并阻滯細胞周期。之后比較了炎癥因子混合物處理細胞時間相同時有無M344保護作用能否引起基因表達的差異,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與Cot組相比,在各個時間點,M344均能抑制大量凋亡相關(guān)基因的表達,同時能夠抑制部分免疫相關(guān)基因的表達,但細胞周期相關(guān)基因的表達并沒有出現(xiàn)明顯變化。綜上所述,本文驗證了三種炎癥因子混合物能夠誘導(dǎo)INS-1細胞凋亡,并篩選出了一種能夠抑制炎癥因子作用,保護INS-1細胞的HDACi:M344,并明確了炎癥因子混合物能促進細胞凋亡、阻滯細胞周期,M344能夠抑制炎癥因子誘導(dǎo)的凋亡及免疫相關(guān)基因的表達,保護INS-1細胞。
【圖文】：

東北師范大學(xué)碩士學(xué)位論文干 EP 管，，加入 20μL DEPC 水溶解樣品，檢測 RNA 濃度，-80℃保存。（八）基因芯片數(shù)據(jù)分析1. Expression Console (EC)EC 軟件用于將 CEL 格式的原始芯片數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為 CHP 格式，以及檢測芯片質(zhì)量是否符合標準。提前下載好庫文件和注釋文件。由于本實驗使用大鼠 INS-1 細胞，選擇芯片類型為 RTA1.0(Rat TranscriptomeArray 1.0)。打開原始數(shù)據(jù)，進行背景處理和數(shù)據(jù)匯總。格式轉(zhuǎn)換成功后，進行芯片質(zhì)量檢測，運行界面如圖 1 所示。

圖 2 Transcriptome Analysis Console 的運行界面展示Fig 2 .The exhibition of Transcriptome Analysis Console in action（九）統(tǒng)計學(xué)分析本文采用 T 檢驗方法進行數(shù)據(jù)分析，當 0.01＜P＜0.05 時實驗數(shù)據(jù)在統(tǒng)計學(xué)上具有顯著性差異；當 P＜0.01 時實驗數(shù)據(jù)在統(tǒng)計學(xué)上具有極顯著差異，進行 T檢驗的所有實驗至少重復(fù) 3 次。
【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R587.1

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號：2695497